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對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌及應(yīng)用

閱讀:120發(fā)布:2024-01-08

專利匯可以提供對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌及應(yīng)用專利檢索,專利查詢,專利分析的服務(wù)。并且本 發(fā)明 公開(kāi)了對(duì) 植物 具有多種功能的海洋芽孢桿菌,從海洋生境獲得海洋芽孢桿菌BY?1188菌株(Bacillus marinus),經(jīng)人工誘變育種和培養(yǎng)條件優(yōu)化,以其保藏編號(hào)為:CGMCC No.6187的BY?1188菌株,菌株經(jīng)培養(yǎng)基優(yōu)化測(cè)試,其適宜的 發(fā)酵 培養(yǎng)液的配方為:蛋白胨2?5g, 酵母 粉1?3g,NaCl,25?30g,KCl0.3?0.5g,MgCl2·7H2O1.9?2.5g,F(xiàn)ePO4O.01?0.02g, 水 1000ml,pH7.0?7.5,上述為培養(yǎng)液,加瓊脂16?19g為固體培養(yǎng)基。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn) 生物 學(xué)特性和 農(nóng)藥 活性穩(wěn)定,對(duì)環(huán)境沒(méi)有污染。,下面是對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌及應(yīng)用專利的具體信息內(nèi)容。

1.對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌,從海洋生境獲得海洋芽孢桿菌BY-1188菌株(Bacillus?marinus),經(jīng)人工誘變育種和培養(yǎng)條件優(yōu)化,其適宜的人工培養(yǎng)發(fā)酵的條件為:
1)以其保藏編號(hào)為:CGMCC?No.6187的BY-1188菌株;
2)菌株在上述固體培養(yǎng)基置22℃-27℃溫箱培養(yǎng)2-3天,將固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)好的菌體刮下,接入步驟1中的培養(yǎng)液培養(yǎng)3天為種子液,再將種子液接入40-50L上述培養(yǎng)液中,22℃-
27℃,轉(zhuǎn)速150rpm,振蕩培養(yǎng)3-5天,獲得發(fā)酵液,并可逐級(jí)放大。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌的應(yīng)用,其特征在于:海洋芽孢桿菌BY-1188菌株采用對(duì)峙培養(yǎng)法、96孔板法、抑菌率統(tǒng)計(jì)法3種抑菌測(cè)試聯(lián)合測(cè)試方法選出,菌株實(shí)用性強(qiáng):
1)對(duì)峙培養(yǎng)法、抑菌率統(tǒng)計(jì)法為常規(guī)方法,對(duì)農(nóng)業(yè)常見(jiàn)和危害嚴(yán)重的9種植物病原真菌:稻瘟霉菌Pyricularia?oryzae、茄鏈孢菌Alternaria?salani、鐮孢霉菌Fusarium?oxysporrum、灰葡萄孢菌Botrytis?cinerea、大麗輪枝菌Verticillium?dahliae、芽枝霉菌Cladosporium?fulvum、辣椒疫霉菌Phytophthora?capsici、絲核菌Rhizoctonia?solani赤霉菌Fusarium?graminearum進(jìn)行抑菌測(cè)試,對(duì)峙培養(yǎng)法中抑菌圈30-35mm,抑菌率統(tǒng)計(jì)法中抑菌率73.33-87.60%;
2)96孔板為常規(guī)測(cè)試基礎(chǔ)上創(chuàng)制的改良方法,以發(fā)酵液直接測(cè),測(cè)試單位為μL/mL,供試靶標(biāo)病原菌為:稻瘟霉菌Pyricularia?oryzae和茄鏈孢菌Alternaria?salani,供試靶標(biāo)病原菌孢子懸浮液以每孔50μL的量加入到96孔板的第1行各孔(A孔)中,之后將海洋芽孢桿菌BY-1188菌株的無(wú)細(xì)胞濾液50μL,加入各孔混勻,并依次倍半稀釋到第8行最后1孔(H孔),以加無(wú)菌的孔做為對(duì)照,27℃靜置培養(yǎng)3小時(shí)后觀察,觀測(cè)標(biāo)準(zhǔn)為:對(duì)照的病原菌孢子
90%為正常萌發(fā),處理的病原菌孢子死亡或畸形率在90%為抑制,每個(gè)處理重復(fù)3次,處理抑菌濃度越小,表示活性越高,BY-1188的抑菌活性MIC為2,顯示強(qiáng)抑菌活性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌的應(yīng)用,其特征在于:海洋芽孢桿菌BY-1188菌株在植物活體上對(duì)辣椒疫霉病、番茄灰霉病防治效果分別為88.4%和85.1%,防治效果超過(guò)傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥防治水平。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌的應(yīng)用,其特征在于:海洋芽孢桿菌BY-1188菌株在普通耕作土及海濱鹽漬土栽種的黃瓜、番茄、辣椒、甘藍(lán)、甜瓜、茄子均能正常定殖,浸根栽種5天后根、莖、葉的定殖數(shù)分別可達(dá)5.98×103、6.24×103、3.78×103,定殖數(shù)可維持15-20天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌的應(yīng)用,其特征在于:海洋芽孢桿菌BY-1188菌株對(duì)植物種子的萌發(fā)和幼苗的生長(zhǎng)都具有促進(jìn)作用,菌液處理的番茄植株苗健壯,葉片大,葉色濃綠,莖稈粗,根毛長(zhǎng),幼苗的株高、根長(zhǎng)、莖粗分別增加
65.0%-84.4%;葉綠素a、b、總?cè)~綠素分別提高60.0%,-143.9%,植株鮮重、干重增加
86.0%-115.8%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌的應(yīng)用,其特征在于:海洋芽孢桿菌BY-1188菌株在鹽漬土壤誘導(dǎo)植物抗鹽,菌株降低了根、葉Na+的積聚39.5%,提+
高根、葉K 含量36.09%,植株含水量提高73.66%,植株鹽害癥狀減輕,鹽害指數(shù)降低了
56.67%。

說(shuō)明書全文

對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌及應(yīng)用

技術(shù)領(lǐng)域

[0001] 本發(fā)明屬于海洋生物領(lǐng)域,具體的說(shuō)是由海洋生境獲得的芽孢桿菌,種名:海洋芽孢桿菌(Bacillus?marinus),通過(guò)人工誘變育種及培養(yǎng)發(fā)酵,活菌制劑對(duì)栽培植物具有防病、促生長(zhǎng)、誘導(dǎo)抗寒抗鹽的作用。該菌種保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC),地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào),中國(guó)科學(xué)院微生物研究所,保藏日期2012年6月5日,保藏編號(hào)CGMCC?No.6187,分類命名Bacillus?marinus。

背景技術(shù)

[0002] 農(nóng)產(chǎn)品安全是所有食品安全的的源頭,研發(fā)和使用高效低毒的生物農(nóng)藥是保證農(nóng)產(chǎn)品安全的基本措施,活菌制劑是生物農(nóng)藥的一大種類,這些有益菌通過(guò)定殖在植物體或寄生在害蟲體內(nèi),發(fā)揮抑菌和殺蟲等作用。芽孢桿菌是其中最著名的益生菌,作為各種酶的產(chǎn)生菌廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn);作為飼料添加劑和醫(yī)藥,可抑制常見(jiàn)腸道病原菌,提高動(dòng)物抗病能,降低抗生素用量;其無(wú)毒、成本低、殺蟲、抑菌能力強(qiáng)的特點(diǎn),也為國(guó)內(nèi)外研發(fā)生物農(nóng)藥所關(guān)注,是世界產(chǎn)量最大的生物農(nóng)藥,新資源、新用途的發(fā)現(xiàn)更是國(guó)內(nèi)外農(nóng)藥領(lǐng)域爭(zhēng)奪的對(duì)象。
[0003] 我國(guó)是土壤鹽漬化嚴(yán)重的國(guó)家之一,鹽漬化土壤總面積達(dá)3460萬(wàn)公頃,相當(dāng)于耕地的1/3,鑒于人多地少的特點(diǎn),這些鹽漬化土壤仍被人們所利用栽種耐鹽作物,同時(shí),早春和晚秋的倒春寒每年也造成農(nóng)作物巨大損失。目前國(guó)內(nèi)外開(kāi)發(fā)微生物農(nóng)藥由于生防菌都來(lái)源于陸地,在含鹽量較高的土壤中難以存活、定殖,在鹽漬地土傳病害的防治效果較差;陸地生防菌由于生境原因,較低的環(huán)境溫度限制了其發(fā)揮作用。近幾年受到國(guó)內(nèi)外關(guān)注的新資源-海洋微生物,由于其原始生境的低溫高鹽特性,使其更易在鹽漬土壤和低溫環(huán)境發(fā)揮作用,在新農(nóng)藥開(kāi)發(fā)領(lǐng)域顯現(xiàn)其生境優(yōu)勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容

[0004] 本發(fā)明目的是提供一株在防治植物病害的同時(shí)又可誘導(dǎo)植物抗鹽,促進(jìn)植物生長(zhǎng)的海洋芽孢桿菌,及在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用。發(fā)明充分利用了海洋微生物這一特殊生境的天然資源,野生菌株已通過(guò)人工誘變育種,生物學(xué)特性和農(nóng)藥活性穩(wěn)定,容易培養(yǎng),培養(yǎng)周期短,操作方法簡(jiǎn)便可行,對(duì)環(huán)境沒(méi)有污染,所用原料廉價(jià),生產(chǎn)成本低,開(kāi)發(fā)前景好,容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。
[0005] 本發(fā)明的目的是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的,由海洋生境獲得了海洋芽孢桿菌BY-1188菌株(Bacillus?marinus),經(jīng)人工誘變育種和培養(yǎng)條件優(yōu)化,其適宜的人工培養(yǎng)發(fā)酵的條件為:
[0006] 1)以其保藏編號(hào)為:CGMCC?No.6187的BY-1188菌株,菌株經(jīng)培養(yǎng)基優(yōu)化測(cè)試,其適宜的發(fā)酵培養(yǎng)液的配方為:蛋白胨2-5g,酵母粉1-3g,NaCl,25-30g,KCl0.3-0.5g,MgCl2·7H2O1.9-2.5g,F(xiàn)ePO40.01-0.02g,1000ml,pH7.0-7.5,上述為培養(yǎng)液,加瓊脂16-19g為固體培養(yǎng)基;
[0007] 2)菌株在上述固體培養(yǎng)基置22℃-27℃溫箱培養(yǎng)2-3天,將固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)好的菌體刮下,接入步驟1中的培養(yǎng)液培養(yǎng)3天為種子液,再將種子液接入40-50L上述培養(yǎng)液中,22℃-27℃轉(zhuǎn)速150rpm,振蕩培養(yǎng)3-5天,獲得發(fā)酵液,并可逐級(jí)放大。
[0008] 所述的海洋芽孢桿菌BY-1188菌株菌落表面粗糙不透明,前期灰白色,后轉(zhuǎn)變?yōu)闈峒t色,邊緣缺刻狀,表面多褶;菌體呈直桿狀,革蘭氏染色陽(yáng)性,0.5-2.5μm×1.2-10μm,無(wú)莢膜,周生鞭毛,芽孢中生不膨大,成對(duì)或鏈狀排列;生理生化特征:BY-1188菌株能在5%NaCl的環(huán)境生長(zhǎng),明膠酶試驗(yàn)陽(yáng)性,觸酶反應(yīng)陽(yáng)性,接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性,淀粉水解試驗(yàn)陰性,VP試驗(yàn)陰性,吲哚反應(yīng)、H2S反應(yīng)陰性,葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,不利用檸檬酸鹽,不能水解尿素和卵磷脂。
[0009] 所述的海洋芽孢桿菌BY-1188菌株采用對(duì)峙培養(yǎng)法、96孔板法、抑菌率統(tǒng)計(jì)法3種抑菌測(cè)試聯(lián)合測(cè)試方法選出,菌株實(shí)用性強(qiáng):
[0010] 1)對(duì)峙培養(yǎng)法、抑菌率統(tǒng)計(jì)法為常規(guī)方法,對(duì)農(nóng)業(yè)常見(jiàn)和危害嚴(yán)重的9種植物病原真菌:稻瘟霉菌Pyricularia?oryzae、茄鏈孢菌Alternaria?salani、鐮孢霉菌Fusarium?oxysporrum、灰葡萄孢菌Botrytis?cinerea、大麗輪枝菌Verticillium?dahliae、芽枝霉菌Cladosporium?fulvum、辣椒疫霉菌Phytophthora?capsici、絲核菌Rhizoctonia?solani赤霉菌Fusarium?graminearum進(jìn)行抑菌測(cè)試,對(duì)峙培養(yǎng)法中抑菌圈30-35mm,抑菌率統(tǒng)計(jì)法中抑菌率73.33-87.60%;
[0011] 2)96孔板為常規(guī)測(cè)試基礎(chǔ)上創(chuàng)制的改良方法,以發(fā)酵液直接測(cè),測(cè)試單位為μL/mL,供試靶標(biāo)病原菌為:稻瘟霉菌Pyricularia?oryzae和茄鏈孢菌Alternaria?salani,供試靶標(biāo)病原菌孢子懸浮液以每孔50μL的量加入到96孔板的第1行各孔(A孔)中,之后將海洋芽孢桿菌BY-1188菌株的無(wú)細(xì)胞濾液50μL,加入各孔混勻,并依次倍半稀釋到第8行最后1孔(H孔),以加無(wú)菌水的孔做為對(duì)照,27℃靜置培養(yǎng)3小時(shí)后觀察,觀測(cè)標(biāo)準(zhǔn)為:對(duì)照的病原菌孢子90%以上正常萌發(fā),處理的病原菌孢子死亡或畸形率在90%以上為抑制,每個(gè)處理重復(fù)3次,處理抑菌濃度越小,表示活性越高,BY-1188的抑菌活性MIC為2,顯示強(qiáng)抑菌活性;
[0012] 所述的海洋芽孢桿菌BY-1188菌株在植物活體上對(duì)辣椒疫霉病、番茄灰霉病防治效果分別為88.4%和85.1%,防治效果超過(guò)傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥防治水平。
[0013] 所述的海洋芽孢桿菌BY-1188菌株在普通耕作土及海濱鹽漬土栽種的黃瓜、番茄、辣椒、甘藍(lán)、甜瓜、茄子均能正常定殖,浸根栽種5天后根、莖、葉的定殖數(shù)分別可達(dá)5.98×103、6.24×103、3.78×103,定殖數(shù)可維持15-20天。
[0014] 所述的海洋芽孢桿菌BY-1188菌株對(duì)植物種子的萌發(fā)和幼苗的生長(zhǎng)都具有促進(jìn)作用,菌液處理的番茄植株苗健壯,葉片大,葉色濃綠,莖稈粗,根毛長(zhǎng),幼苗的株高、根長(zhǎng)、莖粗分別增加65.0%-84.4%;葉綠素a、b、總?cè)~綠素分別提高60.0%,-143.9%,植株鮮重、干重增加86.0%-115.8%。
[0015] 所述的海洋芽孢桿菌BY-1188菌株在鹽漬土壤誘導(dǎo)植物抗鹽,菌株降低了根、葉Na+的積聚39.5%,提高根、葉K+含量36.09%,植株含水量提高73.66%,植株鹽害癥狀減輕,鹽害指數(shù)降低了56.67%。
[0016] 本發(fā)明有益效果:充分利用了海洋微生物這一特殊生境的天然資源,野生菌株已通過(guò)人工誘變育種,生物學(xué)特性和農(nóng)藥活性穩(wěn)定,容易培養(yǎng),培養(yǎng)周期短,操作方法簡(jiǎn)便可行,對(duì)環(huán)境沒(méi)有污染,海洋芽孢桿菌活菌無(wú)論在植物離體還是活體情況下,都對(duì)植物病原真菌有強(qiáng)抑制作用,菌株可在植物的根莖部及植物體內(nèi)正常定殖,在防治植物病害的同時(shí),還可促進(jìn)植物生長(zhǎng)和誘導(dǎo)植物抗鹽,所用原料廉價(jià),生產(chǎn)成本低,開(kāi)發(fā)前景好,容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。

具體實(shí)施方式

[0017] 本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅局限于以下實(shí)施例中,本發(fā)明的具體技術(shù)步驟如下:
[0018] 實(shí)施例1:BY-1188菌株的人工培養(yǎng)及發(fā)酵
[0019] 以保藏編號(hào)為:CGMCC?No.6187的BY-1188菌株,經(jīng)培養(yǎng)基優(yōu)化測(cè)試,其適合的培養(yǎng)發(fā)酵液的配方為:蛋白胨2-5g,酵母粉1-3g,NaCl,25-30g,KCl0.3-0.5g,MgCl2·7H2O1.9-2.5g,F(xiàn)ePO40.01-0.02g,水1000ml,pH7.0-7.5,上述為培養(yǎng)液,加瓊脂16-19g為固體培養(yǎng)基。
[0020] 在上述固體培養(yǎng)基上培養(yǎng),并用常規(guī)方法測(cè)試其理化特征,該菌株的菌落及菌體特征:菌落表面粗糙不透明,前期灰白色,后轉(zhuǎn)變?yōu)闈峒t色,邊緣缺刻狀,表面多褶;菌體呈直桿狀,革蘭氏染色陽(yáng)性,0.5-2.5μm×1.2-10μm,無(wú)莢膜,周生鞭毛,芽孢中生不膨大,成對(duì)或鏈狀排列;
[0021] 生理生化特征:BY-1188菌株能在5%NaCl的環(huán)境生長(zhǎng),明膠酶試驗(yàn)陽(yáng)性,觸酶反應(yīng)陽(yáng)性,接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性,淀粉水解試驗(yàn)陰性,VP試驗(yàn)陰性,吲哚反應(yīng)、H2S反應(yīng)陰性,氧化葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,不利用檸檬酸鹽,不能水解尿素和卵磷脂。
[0022] 菌株在固體培養(yǎng)基22℃-25℃培養(yǎng)4-5天,將固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)好的菌體刮下,接入培養(yǎng)液培養(yǎng)3-4天為種子液,再將種子液接入40-50L上述培養(yǎng)液中,22℃-25℃,轉(zhuǎn)速150rpm,振蕩培養(yǎng)4-5天,獲得發(fā)酵液,根據(jù)需要,同樣培養(yǎng)方法可逐級(jí)放大。
[0023] 實(shí)施例2:BY-1188菌株對(duì)多種植物病原真菌的抑菌活性;
[0024] 發(fā)酵液抑菌活性采用3種(對(duì)峙培養(yǎng)法、96孔板法、抑菌率統(tǒng)計(jì)法)聯(lián)合抑菌測(cè)試方法,對(duì)菌株的抑菌活性進(jìn)行測(cè)試,這種聯(lián)合測(cè)試方法可有效避免人為誤差和菌株假陽(yáng)性,獲得的菌株實(shí)用性更強(qiáng)。
[0025] 其中對(duì)峙培養(yǎng)法、抑菌率統(tǒng)計(jì)法為常規(guī)方法,對(duì)農(nóng)業(yè)常見(jiàn)和危害嚴(yán)重的9種植物病原真菌:稻瘟霉菌Pyricularia?oryzae、茄鏈孢菌Alternaria?salani、鐮孢霉菌Fusarium?oxysporrum、灰葡萄孢菌Botrytis?cinerea、大麗輪枝菌Verticillium?dahliae、芽枝霉菌Cladosporium?fulvum、辣椒疫霉菌Phytophthora?capsici、絲核菌Rhizoctonia?solani赤霉菌Fusarium?graminearum進(jìn)行抑菌測(cè)試;
[0026] 96孔板法為申請(qǐng)人在常規(guī)方法基礎(chǔ)上,根據(jù)海洋微生物及活菌制劑特點(diǎn)進(jìn)行改良,常規(guī)方法測(cè)試最小抑菌濃度MIC單位為μg/mL,需獲得抑菌物質(zhì)純品,工作量大,成本高,我們?cè)頁(yè)Q算成測(cè)試單位為μL/mL,可用發(fā)酵液直接測(cè),同時(shí),病原靶標(biāo)菌選擇經(jīng)多次試驗(yàn)證明的最有代表性的稻瘟霉菌Pyricularia?oryzae和茄鏈孢菌Alternaria?salani,大大節(jié)省了時(shí)間和成本:供試靶標(biāo)病原菌孢子懸浮液以每孔50μL的量加入到96孔板的第1行各孔(A孔)中,接著將BY-1188的無(wú)細(xì)胞濾液50μL分別加入到96孔板的第1行各孔中混勻,并依次倍半稀釋到第8行最后1孔(H孔),第1列為對(duì)照列,加50μL無(wú)菌水。27℃靜置培養(yǎng)3小時(shí)后,在倒置顯微鏡下與對(duì)照相比觀察孢子萌芽情況(對(duì)照需90%以上的病原菌孢子正常萌發(fā),處理要90%以上的病原菌孢子死亡或畸形)。每個(gè)處理重復(fù)3次。處理抑菌濃度越小,表示活性越高。
[0027] 3種(對(duì)峙培養(yǎng)法、96孔板法、抑菌率統(tǒng)計(jì)法)聯(lián)合抑菌測(cè)試結(jié)果顯示如下:
[0028] 表1 BY-1188對(duì)植物病原菌抑菌活性
[0029]
[0030] 注釋:植物病原菌:Po:Pyricularia?oryzae;??? ?As:Alternaria?salani;
[0031] ????????????????Fo:Fusarium?oxysporum;??? ?Bc:Botrytis?cinerea;
[0032] ????????????????Vd:Verticillium?dahliae;? ?Cf:Cladosporium?fulvum;
[0033] ????????????????Pc:Phytophthora?capsici;? ?Rs:Rhizoctonia?solani;
[0034] ????????????????Fg:Fusarium?graminearum????“-”表示未測(cè)
[0035] Test1,簡(jiǎn)稱T1:對(duì)峙培養(yǎng)測(cè)試,以抑菌圈大小表示菌株活性,“+”表示抑菌圈為20-25mm“++”表示抑菌圈為26-30mm“+++”表示抑菌圈為30-35mm;
[0036] Test2,簡(jiǎn)稱T2:96孔板測(cè)試,反應(yīng)固定的培養(yǎng)時(shí)間,菌株釋放在胞外的最低抑菌濃度MIC,采取倍半稀釋法,第一孔最高濃度500μl/ml,第二孔250μl/ml,依次遞減,取整數(shù),MIC越小抑菌活性越強(qiáng);
[0037] Test3,簡(jiǎn)稱T3:對(duì)病原菌的抑制率,抑制率=(對(duì)照菌落半徑-處理菌落半徑)/對(duì)照菌落半徑×100%
[0038] 由上表數(shù)據(jù)可知,BY-1188菌株對(duì)9種農(nóng)業(yè)常見(jiàn)和危害嚴(yán)重的病原真菌,具有很好的抑菌效果,在對(duì)峙培養(yǎng)法中,除一株病原菌都達(dá)到最強(qiáng)抑制的抑菌圈30-35mm,抑菌率統(tǒng)計(jì)法中,抑菌率73.33-87.60%,顯示很高的抑菌率;96孔板測(cè)試抑菌活性MIC為2,顯示強(qiáng)抑菌活性具有研制新殺菌劑的潛力。
[0039] 實(shí)施例3:在BY-1188菌株在植物活體的定殖
[0040] 所試方法均為植物定殖常規(guī)測(cè)試方法:BY-1188做利福平標(biāo)記后實(shí)施例1方法培養(yǎng)發(fā)酵,測(cè)試的植物苗浸入發(fā)酵菌液,分別栽入普通耕作土和海濱鹽漬土(NaCl含量0.5%)的盆缽,分別在1、3、5、7、10、15天將苗各組織研磨,取樣在添加利福的平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)觀察,并折算成每克檢樣細(xì)菌菌落個(gè)數(shù)(cfu/g),結(jié)果證明見(jiàn)表2,BY-1188菌株無(wú)論在普通耕作土還是海濱鹽漬土,栽種的黃瓜、番茄、辣椒、甘藍(lán)、甜瓜、茄子都可以正常定植,浸根栽種5天后根、莖、葉的最高定殖數(shù)分別可達(dá)5.98×103、6.24×103、3.78×103,定殖數(shù)可維持15-
20天.
[0041] 表2浸根栽種5天后CT-2628在植物體內(nèi)定殖情況
[0042]
[0043] 實(shí)施例4:BY-1188菌株對(duì)植物的促生長(zhǎng)作用:
[0044] 采用常規(guī)方法測(cè)試BY-1188菌株對(duì)植物的促生長(zhǎng)作用,分別用稀釋500倍的BY-1188菌株發(fā)酵液和清水浸番茄種(對(duì)照),栽種在裝有滅菌土的盆缽中,每個(gè)處理12盆,3個(gè)重復(fù),2片子葉時(shí),用同濃度發(fā)酵液灌根1次,培養(yǎng)25天,連根拔出,常規(guī)方法統(tǒng)計(jì)根長(zhǎng)、株高、鮮重、干重,與對(duì)照相比計(jì)算增長(zhǎng)率。同時(shí)取葉片0.5g加入4倍體積的丙研缽中,加入少量石英砂,研成勻漿,常規(guī)方法測(cè)試BY-1188菌株處理和清水對(duì)照的番茄葉片葉綠素含量。
[0045] 表3 BY-1188菌株對(duì)番茄的促生長(zhǎng)作用
[0046]
[0047]
[0048] 由表2可以看出,經(jīng)BY-1188菌株對(duì)番茄種子的萌發(fā)和幼苗的生長(zhǎng)都具有明顯促生作用,菌液處理的番茄植株苗比清水處理的健壯,葉片大,葉色濃綠,莖稈粗,根毛長(zhǎng),幼苗的平均株高增長(zhǎng)65.0%;根長(zhǎng)增長(zhǎng)84.4%;莖粗增長(zhǎng)83.3%,芽孢桿菌處理的番茄葉片葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素分別比對(duì)照分別提高了60.0%,143.9%,81.2%,平均鮮重增加86.0%,干重增長(zhǎng)115.8%。
[0049] 實(shí)施例5:BY-1188菌株對(duì)盆栽植物疫霉病、灰霉病的防治作用;
[0050] 盆栽辣椒、番茄苗培養(yǎng)至3-4片真葉,用新配的孢子懸浮液常規(guī)方法接種疫霉病和灰霉病,BY-1188菌株發(fā)酵液稀釋500倍。選取3葉期感染疫霉病或灰霉病且長(zhǎng)勢(shì)一致的盆栽辣椒和番茄苗,用上述化合物稀釋液進(jìn)行防治,以農(nóng)業(yè)生產(chǎn)防治該病常用的傳統(tǒng)農(nóng)藥做為陽(yáng)性對(duì)照,同濃度的發(fā)酵液處理做為空白對(duì)照。每處理12株幼苗,3個(gè)重復(fù),7d后調(diào)查病情,計(jì)算防治效果。
[0051] 表4 BY-1188對(duì)辣椒疫霉病的防治效果
[0052]
[0053] LSD檢驗(yàn)P=0.05
[0054] 表4、5數(shù)據(jù)證明,盆栽植物活體測(cè)試,活菌制劑對(duì)辣椒疫霉病、番茄灰霉病和均有很好的防治效果,分別為88.4%和85.1%;其防治效果超過(guò)傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥防治水平。
[0055] 實(shí)施例6:BY-1188菌株誘導(dǎo)植物抗鹽試驗(yàn)
[0056] 將番茄苗栽種在沿海取的自然鹽漬土壤(生長(zhǎng)耐鹽植物,NaCl濃度為0.5%),正常栽培土壤(NaCl濃度低于0.2%)作為對(duì)照,于處理2、4、6、8、10、12天后,傳統(tǒng)方法測(cè)試種子的發(fā)芽數(shù)及胚根長(zhǎng)、胚軸長(zhǎng),計(jì)算發(fā)芽指數(shù);幼苗生長(zhǎng)25天,收獲完整的植株,傳統(tǒng)方法測(cè)定幼苗莖粗,株高、根長(zhǎng)、展開(kāi)葉片數(shù)等計(jì)算壯苗指數(shù),同時(shí)測(cè)試葉綠素含量和植物根、葉內(nèi)Na+、K+含量。
[0057] 結(jié)果證明,番茄的種子在土壤NaCl濃度為0.5%土壤中萌發(fā)受到抑制,加入海洋芽孢桿菌對(duì)番茄種子萌發(fā)促進(jìn)作用較大,加入芽孢桿菌的發(fā)芽指數(shù)明顯高于對(duì)照,提高58.3%
[0058] 表6海洋芽孢桿菌處理對(duì)鹽脅迫下番茄種子胚根、胚軸及發(fā)芽指數(shù)的影響[0059]
[0060] *小寫英文字母表示多重比較a=0.05的差異顯著性,無(wú)相同字母的同列數(shù)據(jù)間差異顯著。
[0061] 如下表7所示,與對(duì)照相比,芽孢桿菌處理株高、葉長(zhǎng)、展開(kāi)葉數(shù)、莖粗分別提高82.2%、66.7%、30.7%和50.0%,與CK相比差異顯著(P<0.05)。
[0062] 表7海洋芽孢桿菌處理對(duì)鹽脅迫下番茄幼苗形態(tài)的影響
[0063]
[0064] 表8鹽脅迫下經(jīng)海洋芽孢桿菌處理對(duì)番茄根葉內(nèi)Na+、K+含量的影響
[0065]
[0066] 從表8可以看出,在鹽脅迫下,與對(duì)照相比,經(jīng)海洋芽孢桿菌處理后,番茄根、葉內(nèi)Na+含量都有不同程度的降低,Na+在根內(nèi)的積聚,與對(duì)照相比,降低了39.5%,根和葉片中K++含量升高,與對(duì)照相比,葉片中K 含量提高了36.09%。番茄生長(zhǎng)25天后,對(duì)照的干重含水量為949.30%,經(jīng)菌株處理干重含水量分別為1022.96%,處理能夠促進(jìn)番茄植株對(duì)水分的吸收,保持體內(nèi)較高的水分含量,降低Na+在植物體內(nèi)的積聚,提高植物體內(nèi)K+含量,從而不同程度地減輕或緩解鹽傷害,番茄苗生長(zhǎng)情況也顯示,對(duì)照番茄苗葉片失水干枯面積較大,顯現(xiàn)出重度鹽害癥狀,經(jīng)菌株處理的番茄苗,第葉片鹽害癥狀明顯減輕,比對(duì)照鹽害指數(shù)降低了56.67%。
[0067] 盡管上面已經(jīng)描述了本發(fā)明的具體例子,但是有一點(diǎn)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是明顯的,即在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的前提下可對(duì)本發(fā)明作各種變化和改動(dòng),都在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi),對(duì)于上述實(shí)施例進(jìn)行修改,添加和替換,其都沒(méi)有超出本發(fā)明的保護(hù)范圍。
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