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一種三氯化誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法

閱讀:130發(fā)布:2023-03-14

專利匯可以提供一種三氯化誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法專利檢索,專利查詢,專利分析的服務(wù)。并且本 發(fā)明 涉及 生物 醫(yī)學(xué)研究技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及一種三氯化 鐵 誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法。該方案中通過在食蟹猴股動(dòng)脈外膜局部給予三氯化鐵,鐵離子介導(dǎo)的化學(xué) 氧 化引起的組織損傷導(dǎo)致血管內(nèi)皮及組織損傷可導(dǎo)致血小板粘附和聚集,進(jìn)一步激活凝血系統(tǒng)和膠原 纖維 沉積,從而形成血栓。在該實(shí)驗(yàn)中,三氯化鐵成功誘導(dǎo)了食蟹猴股動(dòng)脈血栓,動(dòng)脈血液流速在15min內(nèi)下降至基線值的20%,在20min內(nèi)血液流速完全降為0。本發(fā)明為探明冠脈綜合征發(fā)生的病因及有效的臨床 治療 方案 提供與人類更為相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。,下面是一種三氯化誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法專利的具體信息內(nèi)容。

1.一種三氯化誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:
A.實(shí)驗(yàn)前稱量并記錄動(dòng)物的體重,設(shè)置好T402PP流量計(jì),數(shù)據(jù)采集系統(tǒng),生理監(jiān)護(hù)儀及電腦軟件,實(shí)驗(yàn)前將血流計(jì)預(yù)熱10-20min,多普勒探頭浸沒與生理鹽中平衡10-20min;
B.將動(dòng)物先進(jìn)行麻醉鎮(zhèn)定,隨后用含1.5%異氟烷的氣維持麻醉,氧氣速率為2L/min,隨后將動(dòng)物置于可調(diào)溫電熱板上以維持體溫,血壓,心率及體溫等生理信號(hào)在實(shí)驗(yàn)過程中都會(huì)被監(jiān)測(cè);
C.通過手術(shù),鈍性分離并暴露左側(cè)股動(dòng)脈,分離清理出2-3cm長的血管。通過覆蓋浸有37℃的溫?zé)嵘睇}水的紗布,來維持該區(qū)域在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中的濕度;將多普勒探頭置于左股動(dòng)脈上,在放置前,將探頭空隙填滿37℃溫?zé)岬某曬詈蟿瑢⑻筋^置于與血管垂直位置,并保證導(dǎo)線沒有對(duì)血管造成扭轉(zhuǎn)或牽拉,待信號(hào)穩(wěn)定后,持續(xù)記錄血流速度;
實(shí)驗(yàn)前將2片3×5mm大小的濾紙片浸在三氯化鐵中備用,實(shí)驗(yàn)時(shí)將2片濾紙置于多普勒探頭的血管上游,一張?jiān)谘苌戏?,另一張?jiān)谘芟路?,放?0min后,將濾紙移除,移除后,用浸過生理鹽水的簽將殘留的三氯化鐵擦去,并繼續(xù)保持該區(qū)域濕潤;
繼續(xù)測(cè)量并記錄血液流速30min,或者直到血栓形成,血流速度減少到基線的20%以下,并持續(xù)超過5min,記錄血栓形成時(shí)間;
D.待血栓形成后,將血管兩端結(jié)扎后剪下,剪開血管分離出血栓。將血栓固定。在實(shí)驗(yàn)前后,分別測(cè)定出血時(shí)間。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟B中動(dòng)物的麻醉鎮(zhèn)定方法是先用1.5mg/kg的舒泰。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟C中探頭空隙填滿的超聲耦合劑中要避免有起泡出現(xiàn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟C中濾紙片浸入在40%的三氯化鐵中備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟C中在使用三氯化鐵前,要保證血流速度已經(jīng)記錄了至少5min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟C中血栓形成時(shí)間,即放置濾紙片到血流速度降低到20%基線值的時(shí)間。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟D中將血栓固定于10%中性甲中,用于病例分析。

說明書全文

一種三氯化誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法

技術(shù)領(lǐng)域

[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)研究技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及一種三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

[0002] 冠狀動(dòng)脈或腦動(dòng)脈血栓是世界范圍內(nèi)引起病人癱瘓或死亡的主要原因之一。各類血栓動(dòng)物模型被廣泛用于模擬人類疾病。在各種實(shí)驗(yàn)性損傷型動(dòng)脈血栓的模型中,三氯化鐵(FeCl3)引起的血管損傷導(dǎo)致的動(dòng)脈血栓模型在各類動(dòng)物種屬中均被廣泛使用,包括嚙齒類,兔和狗等。通過在動(dòng)脈外膜局部給予三氯化鐵,鐵離子介導(dǎo)的化學(xué)化引起的組織損傷導(dǎo)致血管內(nèi)皮及組織損傷可導(dǎo)致血小板粘附和聚集,進(jìn)一步激活凝血系統(tǒng)和膠原纖維沉積,從而形成血栓。
[0003] 然而,在嚙齒類動(dòng)物與靈長類動(dòng)物所觀察到的藥效往往和人類身上有很大不同,一定程度上限制了醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步。
[0004] 故急需建立一種三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法,為探明冠脈綜合征發(fā)生的病因及有效的臨床治療方案提供與人類更為相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

[0005] 鑒于以上問題,本發(fā)明提供了一種三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型的構(gòu)建方法,為探明冠脈綜合征發(fā)生的病因及有效的臨床治療方案提供與人類更為相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:一種三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,包括以下步驟:
[0007] A.實(shí)驗(yàn)前稱量并記錄動(dòng)物的體重,設(shè)置好T402PP流量計(jì),數(shù)據(jù)采集系統(tǒng),生理監(jiān)護(hù)儀及電腦軟件,實(shí)驗(yàn)前將血流計(jì)預(yù)熱10-20min,多普勒探頭浸沒與生理鹽中平衡10-20min;
[0008] B.將動(dòng)物先進(jìn)行麻醉鎮(zhèn)定,隨后用含1.5%異氟烷的氧氣維持麻醉,氧氣速率為2L/min,隨后將動(dòng)物置于可調(diào)溫電熱板上以維持體溫,血壓,心率及
[0009] C.通過手術(shù),鈍性分離并暴露左側(cè)股動(dòng)脈,分離清理出2-3cm長的血管。通過覆蓋浸有37℃的溫?zé)嵘睇}水的紗布,來維持該區(qū)域在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中的濕度;將多普勒探頭置于左股動(dòng)脈上,在放置前,將探頭空隙填滿37℃溫?zé)岬某曬詈蟿瑢⑻筋^置于與血管垂直位置,并保證導(dǎo)線沒有對(duì)血管造成扭轉(zhuǎn)或牽拉,待信號(hào)穩(wěn)定后,持續(xù)記錄血流速度;
[0010] 實(shí)驗(yàn)前將2片3×5mm大小的濾紙片浸在三氯化鐵中備用,實(shí)驗(yàn)時(shí)將2片濾紙置于多普勒探頭的血管上游,一張?jiān)谘苌戏?,另一張?jiān)谘芟路?,放?0min后,將濾紙移除,移除后,用浸過生理鹽水的簽將殘留的三氯化鐵擦去,并繼續(xù)保持該區(qū)域濕潤;
[0011] 繼續(xù)測(cè)量并記錄血液流速30min,或者直到血栓形成,血流速度減少到基線的20%以下,并持續(xù)超過5min,記錄血栓形成時(shí)間;
[0012] D.待血栓形成后,將血管兩端結(jié)扎后剪下,剪開血管分離出血栓。將血栓固定。在實(shí)驗(yàn)前后,分別測(cè)定出血時(shí)間。
[0013] 所述步驟B中動(dòng)物的麻醉鎮(zhèn)定方法是先用1.5mg/kg的舒泰。
[0014] 所述步驟C中探頭空隙填滿的超聲耦合劑中要避免有起泡出現(xiàn)。
[0015] 所述步驟C中濾紙片浸入在40%的三氯化鐵中備用。
[0016] 所述步驟C中在使用三氯化鐵前,要保證血流速度已經(jīng)記錄了至少5min。
[0017] 所述步驟C中血栓形成時(shí)間,即放置濾紙片到血流速度降低到20%基線值的時(shí)間。
[0018] 所述步驟D中將血栓固定于10%中性甲中,用于病例分析。
[0019] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果在于提供了一種三氯化鐵誘導(dǎo)的食蟹猴股動(dòng)脈血栓動(dòng)物模型構(gòu)建方法,為探明冠脈綜合征發(fā)生的病因及有效的臨床治療方案提供與人類更為相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。這一方法的可重復(fù)性較好,其造成的血管內(nèi)皮損傷和所形成的血栓,與冠脈綜合征患者的血栓在過程和病理上高度一致。此外,由于靈長類動(dòng)物與人的親緣關(guān)系,提供了良好的生物大分子交叉反應(yīng)性,使得針對(duì)血栓的大分子抗體藥物的篩選成為可能。附圖說明
[0020] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案,下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹,顯而易見地,下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例,對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講,在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下,還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0021] 圖1為正常組與模型組出血時(shí)間。
[0022] 圖2為血栓形成時(shí)間。

具體實(shí)施方式

[0023] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例,對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術(shù)方案,而不能以此來限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0024] 實(shí)施例1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0025]
[0026] 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)在普通級(jí)動(dòng)物房中,單籠飼養(yǎng),保持室內(nèi)溫度為20-29℃,相對(duì)濕度40-70%,熒光燈12h循環(huán)照明,照明時(shí)間為08:00-20:00,動(dòng)物自由取食,自由飲水,飲用水均為經(jīng)凈水器凈化后的自來水,符合WHO飲用水規(guī)范。
[0027] 實(shí)施例2.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
[0028] 實(shí)驗(yàn)前稱量并記錄動(dòng)物的體重;設(shè)置好T402PP流量計(jì),數(shù)據(jù)采集系統(tǒng),生理監(jiān)護(hù)儀及電腦軟件。實(shí)驗(yàn)前將血流計(jì)預(yù)熱10-20min。多普勒探頭浸沒與生理鹽水中平衡10-20min。
[0029] 實(shí)施例3.麻醉
[0030] 將動(dòng)物先用1.5mg/kg的舒泰鎮(zhèn)定,隨后用含1.5%異氟烷的氧氣維持麻醉,氧氣速率為2L/min。隨后將動(dòng)物置于可調(diào)溫電熱板上以維持體溫。血壓,心率及體溫等生理信號(hào)在實(shí)驗(yàn)過程中都會(huì)被監(jiān)測(cè)。
[0031] 實(shí)施例4.建模過程
[0032] 通過手術(shù),鈍性分離并暴露左側(cè)股動(dòng)脈,分離清理出2-3cm長的血管。通過覆蓋一塊浸有37℃的溫?zé)嵘睇}水的紗布,來維持該區(qū)域在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中的濕度。
[0033] 將多普勒探頭置于左股動(dòng)脈上。在放置前,將探頭空隙填滿37℃溫?zé)岬某曬詈蟿?,耦合劑中要避免有起泡出現(xiàn)。將探頭置于與血管垂直位置,并保證導(dǎo)線沒有對(duì)血管造成扭轉(zhuǎn)或牽拉。待信號(hào)穩(wěn)定后,持續(xù)記錄血流速度。
[0034] 實(shí)驗(yàn)前將2片3×5mm大小的濾紙片浸在40%的三氯化鐵中備用。實(shí)驗(yàn)時(shí)將2片濾紙置于多普勒探頭的血管上游,一張?jiān)谘苌戏剑硪粡堅(jiān)谘芟路?。放?0min后,將濾紙移除。移除后,用浸過生理鹽水的棉簽將殘留的三氯化鐵擦去,并繼續(xù)保持該區(qū)域濕潤。
[0035] 繼續(xù)測(cè)量并記錄血液流速30min,或者直到血栓形成,血流速度減少到基線的20%以下,并持續(xù)超過5min。在使用三氯化鐵前,要保證血流速度已經(jīng)記錄了至少5min以上。血栓形成時(shí)間,即放置濾紙片到血流速度降低到20%基線值的時(shí)間,會(huì)被記錄下來。
[0036] 表1.血栓形成時(shí)間
[0037]
[0038] 實(shí)施例5:實(shí)驗(yàn)后處理
[0039] 待血栓形成后,將血管兩端結(jié)扎后剪下,剪開血管分離出血栓。將血栓固定于10%中性甲醛中,用于病例分析。在實(shí)驗(yàn)前后,分別測(cè)定出血時(shí)間。
[0040] 表2.出血時(shí)間
[0041]
[0042] 在該實(shí)驗(yàn)中,三氯化鐵成功誘導(dǎo)了食蟹猴股動(dòng)脈血栓,動(dòng)脈血液流速在15min內(nèi)下降至基線值的20%,在20min內(nèi)血液流速完全降為0。
[0043] 該模型有效模擬了冠脈綜合征患者的血栓形成過程,而且動(dòng)物個(gè)體差異小,可重復(fù)性好,建模穩(wěn)定。由于食蟹猴和人親緣關(guān)系近,和人的各類抗體等大分子藥物有良好的交叉反應(yīng)性,故該模型可有效應(yīng)用于各類抗血栓類大分子抗體藥物的篩選,評(píng)估和申報(bào)等應(yīng)用中。
[0044] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已,并不用以限制本發(fā)明,凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi),所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等,均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
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