技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本公開提供了與抗-CXCR5
抗體相關(guān)或源自抗-CXCR5抗體的組合物和方法。更具體地,本公開提供了結(jié)合CXCR5的人抗體、這類抗體的CXCR5-結(jié)合
片段和衍
生物及包含這類片段的CXCR5-結(jié)合多肽。再進(jìn)一步地,本公開提供了編碼這類抗體、抗體片段和衍生物及多肽的核酸,包含這類多核苷酸的細(xì)胞,制備這類抗體、抗體片段和衍生物及多肽的方法,及使用這類抗體、抗體片段和衍生物及多肽的方法,包括
治療或診斷患有CXCR5相關(guān)障礙和病癥(包括各種炎性障礙和各種癌癥)的受試者的方法。
背景技術(shù)
[0002] CXCR5,也稱為伯基特淋巴瘤受體(BLR1)、CD185、MDR15和MGC117347,是G蛋白-偶聯(lián)受體,其是CXC趨化因子受體家族的成員。配體是BLC,也稱為CXCL13,其是B細(xì)胞化學(xué)引誘物。未加工的CXCR5前體長度為372個(gè)
氨基酸,分子量為42KD。CXCR5在B細(xì)胞遷移和特定解剖區(qū)室的
定位中具有作用。敲除小鼠缺乏外周淋巴結(jié),具有較少派爾集合淋巴結(jié)和具有降低的B細(xì)胞
水平。
發(fā)明內(nèi)容
[0003] 本公開提供了以至少10-6M的結(jié)合親和
力結(jié)合CXCR5表位的IgG類的全人抗體,其具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的重鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合。優(yōu)選地,全人抗體具有重鏈和輕鏈兩者,其中所述抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2(本文中稱為52A9)、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4(本文中稱為52A10)、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6(本文中稱為52B10)、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8(本文中稱為52C6)、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10(本文中稱為52D6)、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12(本文中稱為
52D7)、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14(本文中稱為52D11)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16(本文中稱為52E1)、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18(本文中稱為52E10)、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20(本文中稱為52H9)、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22(本文中稱為PC12)、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24(本文中稱為PD10)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26(本文中稱為D3-4)、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28(本文中稱為E2-1)、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30(本文中稱為A4或
7A7)、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32(本文中稱為A8)、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34(本文中稱為A12)、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36(本文中稱為B3)、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38(本文中稱為C8)、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40(本文中稱為F8或10G9)、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42(本文中稱為G11)、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44(本文中稱為H3)、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46(本文中稱為H5)、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48(本文中稱為H6)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49(本文中稱為2D3)、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51(本文中稱為3A11)、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53(本文中稱為3B9)、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55(本文中稱為3D11)、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57(本文中稱為3D12或4E12)、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59(本文中稱為3E7)、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61(本文中稱為3E12)、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63(本文中稱為3F7)、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65(本文中稱為3G2)、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67(本文中稱為3G7)、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69(本文中稱為4A5)、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71(本文中稱為4E9)、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73(本文中稱為4F1)、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75(本文中稱為4F4)、SEQ?ID?NO.76/SEQID?NO.77(本文中稱為
4H2)、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79(本文中稱為5A8)、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81(本文中稱為5F1)、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83(本文中稱為6A4)、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85(本文中稱為6F9)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86(本文中稱為6G5)、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88(本文中稱為7B11或8B2)、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90(本文中稱為7H10)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91(本文中稱為8D12)、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93(本文中稱為8H5)、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95(本文中稱為9A10)、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97(本文中稱為10A12)、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99(本文中稱為10B2)、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101(本文中稱為10C3)、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103(本文中稱為10C7)、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105(本文中稱為11E3)、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107(本文中稱為
11A12)、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109(本文中稱為11A7)、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111(本文中稱為11C3)、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113(本文中稱為11D3)、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115(本文中稱為11D4)、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117(本文中稱為
11D7)、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119(本文中稱為11F3)、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121(本文中稱為11G3)、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123(本文中稱為12A4)、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125(本文中稱為12B11或14E10)、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127(本文中稱為
12B4)、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129(本文中稱為12C1)、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131(本文中稱為12C6)、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133(本文中稱為12D11)、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135(本文中稱為12D3)、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137(本文中稱為12G10)、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139(本文中稱為13E10)、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140(本文中稱為13E4)、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142(本文中稱為13A3)、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144(本文中稱為13F8)、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146(本文中稱為13F9)、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148(本文中稱為13G9)、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150(本文中稱為
14E5)、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152(本文中稱為14B11)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153(本文中稱為14B4)、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155(本文中稱為14C10)、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157(本文中稱為14C11)、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159(本文中稱為14C3)、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161(本文中稱為14D7)、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163(本文中稱為14F11)、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165(本文中稱為14F8)、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167(本文中稱為15C9)、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169(本文中稱為15D7)、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171(本文中稱為14D9)、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173(本文中稱為
15F9)、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175(本文中稱為15G11)、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177(本文中稱為15G7)、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178(本文中稱為15G9)、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180(本文中稱為15H10)、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182(本文中稱為
15H12)、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184(本文中稱為16E3)、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186(本文中稱為16A6)、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188(本文中稱為16A8)、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190(本文中稱為16B1)、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192(本文中稱為
16B7)、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194(本文中稱為16F8)、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196(本文中稱為16F9)及其組合。
[0004] 本公開提供了全人抗體Fab片段,其具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域,其中所述重鏈可變域序列與選自以下的氨基酸序列至少95%同一:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合。優(yōu)選地,全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者,其中所述抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196及其組合。
[0005] 本公開提供了單鏈人抗體,其具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域及連接所述重鏈和輕鏈可變域區(qū)域的肽接頭,其中所述重鏈可變域序列與選自以下的氨基酸序列至少95%同一:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合。優(yōu)選地,所述全人單鏈抗體具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者,其中所述單鏈全人抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196及其組合。
[0006] 本公開還提供了用于治療炎性
疾病的方法,包括施用有效量的抗-CXCR5多肽,其中所述抗-CXCR5多肽選自以至少10-6M的結(jié)合親和力結(jié)合CXCR5表位的IgG類的全人抗體、具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域的全人抗體Fab片段、具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域及連接所述重鏈和輕鏈可變域區(qū)域的肽接頭的單鏈人抗體,及其組合;
[0007] 其中所述全人抗體具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的重鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合;
[0008] 其中所述全人抗體Fab片段具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的重鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合;和
[0009] 其中所述單鏈人抗體具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的重鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合。
[0010] 優(yōu)選地,所述全人抗體具有重鏈和輕鏈兩者,其中所述抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2(本文中稱為52A9)、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4(本文中稱為52A10)、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6(本文中稱為52B10)、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8(本文中稱為52C6)、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10(本文中稱為52D6)、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12(本文中稱為52D7)、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14(本文中稱為52D11)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16(本文中稱為52E1)、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18(本文中稱為52E10)、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20(本文中稱為52H9)、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22(本文中稱為PC12)、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24(本文中稱為PD10)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26(本文中稱為D3-4)、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28(本文中稱為E2-1)、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30(本文中稱為A4或7A7)、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32(本文中稱為A8)、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34(本文中稱為A12)、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36(本文中稱為B3)、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38(本文中稱為C8)、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40(本文中稱為F8或10G9)、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42(本文中稱為G11)、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44(本文中稱為H3)、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46(本文中稱為H5)、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48(本文中稱為H6)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49(本文中稱為2D3)、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51(本文中稱為3A11)、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53(本文中稱為3B9)、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55(本文中稱為3D11)、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57(本文中稱為3D12或4E12)、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59(本文中稱為3E7)、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61(本文中稱為3E12)、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63(本文中稱為3F7)、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65(本文中稱為3G2)、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67(本文中稱為3G7)、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69(本文中稱為4A5)、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71(本文中稱為4E9)、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73(本文中稱為4F1)、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75(本文中稱為
4F4)、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77(本文中稱為4H2)、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79(本文中稱為5A8)、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81(本文中稱為5F1)、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83(本文中稱為6A4)、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85(本文中稱為6F9)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86(本文中稱為6G5)、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88(本文中稱為7B11或8B2)、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90(本文中稱為7H10)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91(本文中稱為8D12)、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93(本文中稱為8H5)、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95(本文中稱為
9A10)、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97(本文中稱為10A12)、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99(本文中稱為10B2)、SEQ?ID?NO.100/SEQ?I?DNO.101(本文中稱為10C3)、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103(本文中稱為10C7)、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105(本文中稱為11E3)、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107(本文中稱為11A12)、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109(本文中稱為
11A7)、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111(本文中稱為11C3)、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113(本文中稱為11D3)、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115(本文中稱為11D4)、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117(本文中稱為11D7)、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119(本文中稱為11F3)、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121(本文中稱為11G3)、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123(本文中稱為12A4)、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125(本文中稱為12B11或14E10)、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127(本文中稱為12B4)、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129(本文中稱為12C1)、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131(本文中稱為12C6)、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133(本文中稱為
12D11)、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135(本文中稱為12D3)、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137(本文中稱為12G10)、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139(本文中稱為13E10)、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140(本文中稱為13E4)、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142(本文中稱為
13A3)、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144(本文中稱為13F8)、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146(本文中稱為13F9)、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148(本文中稱為13G9)、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150(本文中稱為14E5)、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152(本文中稱為14B11)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153(本文中稱為14B4)、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155(本文中稱為14C10)、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157(本文中稱為14C11)、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159(本文中稱為14C3)、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161(本文中稱為14D7)、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163(本文中稱為14F11)、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165(本文中稱為
14F8)、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167(本文中稱為15C9)、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169(本文中稱為15D7)、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171(本文中稱為14D9)、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173(本文中稱為15F9)、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175(本文中稱為
15G11)、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177(本文中稱為15G7)、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178(本文中稱為15G9)、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180(本文中稱為15H10)、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182(本文中稱為15H12)、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184(本文中稱為16E3)、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186(本文中稱為16A6)、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188(本文中稱為16A8)、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190(本文中稱為16B1)、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192(本文中稱為16B7)、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194(本文中稱為16F8)、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196(本文中稱為16F9)及其組合。優(yōu)選地,全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者,其中所述抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:
SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2(本文中稱為52A9)、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4(本文中稱為
52A10)、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6(本文中稱為52B10)、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8(本文中稱為52C6)、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10(本文中稱為52D6)、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12(本文中稱為52D7)、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14(本文中稱為52D11)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16(本文中稱為52E1)、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18(本文中稱為
52E10)、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20(本文中稱為52H9)、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22(本文中稱為PC12)、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24(本文中稱為PD10)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26(本文中稱為D3-4)、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28(本文中稱為E2-1)、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30(本文中稱為A4或7A7)、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32(本文中稱為A8)、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34(本文中稱為A12)、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36(本文中稱為B3)、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38(本文中稱為C8)、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40(本文中稱為F8或10G9)、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42(本文中稱為G11)、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44(本文中稱為H3)、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46(本文中稱為H5)、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48(本文中稱為H6)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49(本文中稱為2D3)、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51(本文中稱為3A11)、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53(本文中稱為3B9)、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55(本文中稱為3D11)、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57(本文中稱為3D12或
4E12)、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59(本文中稱為3E7)、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61(本文中稱為3E12)、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63(本文中稱為3F7)、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65(本文中稱為3G2)、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67(本文中稱為3G7)、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69(本文中稱為4A5)、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71(本文中稱為4E9)、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73(本文中稱為4F1)、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75(本文中稱為4F4)、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77(本文中稱為4H2)、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79(本文中稱為
5A8)、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81(本文中稱為5F1)、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83(本文中稱為6A4)、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85(本文中稱為6F9)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86(本文中稱為6G5)、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88(本文中稱為7B11或8B2)、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90(本文中稱為7H10)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91(本文中稱為8D12)、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93(本文中稱為8H5)、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95(本文中稱為9A10)、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97(本文中稱為10A12)、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99(本文中稱為10B2)、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101(本文中稱為10C3)、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103(本文中稱為10C7)、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105(本文中稱為11E3)、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107(本文中稱為11A12)、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109(本文中稱為
11A7)、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111(本文中稱為11C3)、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113(本文中稱為11D3)、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115(本文中稱為11D4)、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117(本文中稱為11D7)、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119(本文中稱為11F3)、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121(本文中稱為11G3)、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123(本文中稱為12A4)、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125(本文中稱為12B11或14E10)、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127(本文中稱為12B4)、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129(本文中稱為12C1)、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131(本文中稱為12C6)、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133(本文中稱為
12D11)、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135(本文中稱為12D3)、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137(本文中稱為12G10)、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139(本文中稱為13E10)、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140(本文中稱為13E4)、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142(本文中稱為
13A3)、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144(本文中稱為13F8)、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146(本文中稱為13F9)、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148(本文中稱為13G9)、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150(本文中稱為14E5)、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152(本文中稱為14B11)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153(本文中稱為14B4)、SEQID?NO.154/SEQ?ID?NO.155(本文中稱為14C10)、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157(本文中稱為14C11)、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159(本文中稱為14C3)、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161(本文中稱為14D7)、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163(本文中稱為14F11)、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165(本文中稱為
14F8)、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167(本文中稱為15C9)、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169(本文中稱為15D7)、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171(本文中稱為14D9)、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173(本文中稱為15F9)、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175(本文中稱為
15G11)、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177(本文中稱為15G7)、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178(本文中稱為15G9)、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180(本文中稱為15H10)、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182(本文中稱為15H12)、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184(本文中稱為16E3)、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186(本文中稱為16A6)、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188(本文中稱為16A8)、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190(本文中稱為16B1)、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192(本文中稱為16B7)、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194(本文中稱為16F8)、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196(本文中稱為16F9)及其組合。優(yōu)選地,所述全人單鏈抗體具有具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者,其中所述單鏈全人抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196及其組合。
[0011] 優(yōu)選地,待治療的疾病選自選自類
風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、青少年慢性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、萊姆關(guān)節(jié)炎、
銀屑病性關(guān)節(jié)炎、
反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、脊柱關(guān)節(jié)病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸病、胰島素依賴型糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、變應(yīng)性疾病、銀屑病、皮炎、硬皮病、移
植物抗宿主病、器官移植排斥、與器官移植相關(guān)的急性或慢性免疫疾病、肉狀瘤病、動(dòng)脈粥樣硬化、彌散性血管內(nèi)凝血、川崎病、格雷夫斯氏病、腎病綜合征、慢性疲勞綜合征、韋格納氏肉芽腫病、諾赫-舍恩萊因紫癜、腎的微型血管炎、慢性活動(dòng)性
肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、中毒性休克綜合征、膿毒癥綜合征、惡病質(zhì)、感染性疾病、寄生蟲病、獲得性免疫
缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓舞蹈病、
帕金森病、阿爾茨海默病、中風(fēng)、原發(fā)性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、
惡性腫瘤、心力衰竭、心肌梗塞、
艾迪生病、散發(fā)性I型多腺缺乏和II型多腺缺乏、施密特綜合征、成人(急性)呼吸窘迫綜合征、脫發(fā)、斑禿、血清陰性關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)病、賴特病、銀屑病性關(guān)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎性關(guān)節(jié)病、腸病性滑膜炎、衣原體、耶爾森氏菌和沙
門氏菌相關(guān)關(guān)節(jié)病、脊柱關(guān)節(jié)病、動(dòng)脈粥樣化疾病/動(dòng)脈硬化、特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)、自身免疫性大皰病、尋常性天皰瘡、落葉狀天皰瘡、類天皰瘡、線性IgA病、自身免疫性溶血性貧血、庫姆斯陽性溶血性貧血、獲得性惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛性腦炎/Royal?Free病、慢性粘膜
皮膚念珠菌病、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、原發(fā)性硬化性肝炎、隱源性自身免疫性肝炎、獲得性免疫缺陷病綜合征、獲得性免疫缺陷相關(guān)疾病、乙型肝炎、丙型肝炎、普通變異性免疫缺陷(普通可變性低丙種球蛋白血癥)、擴(kuò)張型心肌病、女性不孕癥、卵巢衰竭、卵巢功能早衰、
纖維化
肺病、隱源性纖維性肺泡炎、
炎癥后間質(zhì)性肺病、間質(zhì)性肺炎、結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺病、混合性結(jié)締組織病相關(guān)肺病、系統(tǒng)性硬化相關(guān)間質(zhì)性肺病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)間質(zhì)性肺病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)肺病、皮肌炎/多肌炎相關(guān)肺病、舍格倫病相關(guān)肺病、強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān)肺病、脈管炎性彌散性肺病、含
鐵血黃素沉著癥相關(guān)肺病、藥物誘發(fā)性間質(zhì)性肺病、纖維變性、放射纖維變性、閉塞性細(xì)支氣管炎、慢性嗜酸粒細(xì)胞性肺炎、淋巴細(xì)胞浸潤性肺病、感染后間質(zhì)性肺病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎(經(jīng)典自身免疫性或狼瘡樣肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自身免疫介導(dǎo)的低血糖、B型胰島素抵抗伴黑棘皮病、甲狀旁腺功能減退癥、與器官移植相關(guān)的急性免疫性疾病、與器官移植相關(guān)的慢性免疫性疾病、骨關(guān)節(jié)病、原發(fā)性硬化性膽管炎、1型銀屑病、2型銀屑病、特發(fā)性白細(xì)胞減少癥、自身免疫性中性粒細(xì)胞減少癥、腎病NOS、腎小球性腎炎、腎微型血管炎、萊姆病、盤狀紅斑狼瘡、特發(fā)性男性不育癥或NOS、精子自身免疫、多發(fā)性硬化(所有亞型)、交感性眼炎、結(jié)締組織病繼發(fā)性肺動(dòng)脈
高血壓、古德帕斯徹綜合征、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎的肺表現(xiàn)、急性風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性脊椎炎、史蒂爾病、系統(tǒng)性硬化、舍格倫綜合征、高安氏病/動(dòng)脈炎、自身免疫性血小板減少癥、特發(fā)性血小板減少癥、自身免疫性甲狀腺病、甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺腫性自身免疫性甲狀腺功能減退癥(橋本病)、萎縮性自身免疫性甲狀腺功能減退癥、原發(fā)性黏液腺瘤病、晶狀體源性葡萄膜炎、原發(fā)性血管炎、白癲風(fēng)、急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精引起的肝損傷、膽汁郁積、特質(zhì)性肝病、藥物誘導(dǎo)的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、變態(tài)反應(yīng)和哮喘、B族鏈球菌(GBS)感染、
精神障礙(例如,
抑郁癥和
精神分裂癥)、Th2型和Th1型介導(dǎo)的疾病、急性和慢性
疼痛(不同形式的疼痛)及癌癥如肺癌、
乳腺癌、胃癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、
前列腺癌和直腸癌及造血系統(tǒng)惡性腫瘤(白血病和淋巴瘤)、無β脂蛋白血癥、手足發(fā)紺、急性和慢性寄生或感染性過程、急性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、急性髓細(xì)胞性白血病(AML)、急性或慢性細(xì)菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰竭、腺癌、房性異位搏動(dòng)(aerial?ectopic?beat)、AIDS癡呆復(fù)合征、酒精誘導(dǎo)的肝炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、變應(yīng)性
接觸性皮炎、變應(yīng)性鼻炎、同種異體移植排斥、α-1-抗胰蛋白酶缺乏癥、
肌萎縮性側(cè)索硬化、貧血、心絞痛、前
角細(xì)胞變性、抗cd3療法、抗磷脂綜合征、抗受體超敏反應(yīng)、主動(dòng)脈(aordic)和周圍
動(dòng)脈瘤、主動(dòng)脈壁夾層形成、動(dòng)脈高血壓、動(dòng)脈硬化、動(dòng)靜脈瘺、
共濟(jì)失調(diào)、
心房顫動(dòng)(持續(xù)性或陣發(fā)性)、心房撲動(dòng)、房室傳導(dǎo)阻滯、B細(xì)胞淋巴瘤、骨移植排斥、骨髓移植(BMT)排斥、束支傳導(dǎo)阻滯、伯基特淋巴瘤、燒傷、
心律失常、心臟頓抑綜合征(cardiac?stun?syndrome)、心臟腫瘤、心肌病、心肺分流術(shù)炎癥反應(yīng)、軟骨移植排斥、小腦皮質(zhì)變性、小腦失調(diào)、紊亂性或多源性房性心動(dòng)過速、化療相關(guān)病癥、慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)、慢性酒精中毒、慢性炎癥病理、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸鹽中毒、結(jié)腸直腸癌、充血性心力衰竭、結(jié)膜炎、接觸性皮炎、肺源性心臟病、
冠狀動(dòng)脈疾病、
克雅氏病、培養(yǎng)物陰性膿毒癥、囊性纖維化、細(xì)胞因子療法相關(guān)障礙、拳擊員癡呆、脫髓鞘性疾病、登革出血熱、皮炎、皮膚病癥、多尿癥、糖尿病、糖尿病性動(dòng)脈粥樣硬化性疾病、彌散性路易體病、擴(kuò)張性充血性心肌病、基底核病癥、中年唐氏綜合征(Down's?Syndrome?in?middleage)、由阻斷CNS多巴胺受體的藥物誘導(dǎo)的藥物誘發(fā)性
運(yùn)動(dòng)障礙、藥物敏感性、濕疹、腦脊髓炎、心內(nèi)膜炎、內(nèi)分泌病、會(huì)厭炎、EB
病毒感染、紅斑性肢痛病、錐體束外和小腦失調(diào)、家族性噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多癥(familial?hematophagocytic?lymphohistiocytosis)、
胎兒胸腺移植排斥、
弗里德賴希共濟(jì)失調(diào)、功能性周圍動(dòng)脈病癥、
真菌膿毒癥、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織的移植物排斥、革蘭氏陰性膿毒癥、革蘭氏陽性膿毒癥、胞內(nèi)生物體所致肉芽腫、毛細(xì)胞白血病、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz?disease)、橋本甲狀腺炎(Hashimoto'S?Thyroiditis)、枯草熱、心臟移植排斥、血色素沉著癥、血液
透析、溶血性尿毒癥綜合征/血栓溶解性血小板減少性紫癜、出血、甲型肝炎、希氏束心律失常、HIV感染/HIV神經(jīng)病、霍奇金病、運(yùn)動(dòng)機(jī)能亢進(jìn)性運(yùn)動(dòng)障礙、超敏反應(yīng)、過敏性肺炎、高血壓、運(yùn)動(dòng)功能減退性運(yùn)動(dòng)障礙、下丘腦-垂體-腎上腺軸評價(jià)(hypothalamic-pituitary-adrenal?axis?evaluation)、特發(fā)性艾迪生病、特發(fā)性肺纖維化、抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、虛弱、嬰兒脊髓性肌萎縮、主動(dòng)脈炎癥、甲型流感、
電離輻射暴露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經(jīng)炎、缺血-
再灌注損傷、缺血性中風(fēng)、青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年脊髓性肌萎縮、卡波西肉瘤、腎移植排斥、軍團(tuán)桿菌病(legionella)、利什曼病、麻風(fēng)、皮質(zhì)脊髓系統(tǒng)損傷、脂肪水腫(lipedema)、肝移植排斥、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細(xì)胞增多癥、惡性黑素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血癥,代謝性/特發(fā)性、偏頭痛性頭痛、線粒體多系統(tǒng)病癥、混合型結(jié)締組織病、單克隆丙種球蛋白病、多發(fā)性骨髓瘤、多系統(tǒng)變性(Mencel?Dejerine-Thomas?Shi-Drager?and?Machado-Joseph)、重癥肌無力、
鳥型胞內(nèi)分枝桿菌、結(jié)核分支桿菌、骨髓增生異常綜合征、心肌梗死、心肌缺血性病癥、鼻咽癌、新生兒慢性肺疾病、腎炎、腎變病、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)原性I肌萎縮、中性白細(xì)胞減少性發(fā)熱、非霍奇金淋巴瘤、腹主動(dòng)脈及其分支閉塞、閉塞性動(dòng)脈病癥、okt3治療、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/輸精管復(fù)通術(shù)、器官巨大癥、骨質(zhì)疏松癥、胰腺移植排斥、胰腺癌、副腫瘤綜合征/惡性腫瘤的高
鈣血癥、甲狀旁腺移植排斥、骨盆炎性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、外周動(dòng)脈粥樣硬化性疾病、外周血管病癥、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺囊蟲肺炎、肺炎、POEMS綜合征(多神經(jīng)病、器官巨大癥、內(nèi)分泌病、單克隆丙種球蛋白病和皮膚改變綜合征)、灌注后綜合征、
泵后綜合征、MI心切開術(shù)后綜合征、先兆子癇、進(jìn)行性核上性麻痹、原發(fā)性肺動(dòng)脈高血壓、放射療法、雷諾氏現(xiàn)象和疾病(Raynaud's?phenomenon?and?disease)、雷諾病、雷弗素姆病(Refsum'sdisease)、規(guī)律性窄QRS心動(dòng)過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、路易體型老年性癡呆、血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、休克、鐮狀細(xì)胞貧血、皮膚同種異體移植排斥、皮膚改變綜合征、小腸移植排斥、實(shí)體腫瘤、特異性心律失常、脊髓性共濟(jì)失調(diào)、脊髓小腦變性、鏈球菌肌炎、小腦結(jié)構(gòu)損傷、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統(tǒng)梅毒、全身性過敏反應(yīng)(systemic?anaphalaxis)、全身性炎性反應(yīng)綜合征、全身發(fā)作性青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、T細(xì)胞或FAB?ALL、毛細(xì)管擴(kuò)張、血栓閉塞性脈管炎(thromboangitis?obliterans)、血小板減少癥、毒性、移植、創(chuàng)傷/出血、III型超敏反應(yīng)、IV型超敏反應(yīng)、不穩(wěn)
定心絞痛、尿毒癥、尿膿毒病、蕁麻疹、
心臟瓣膜疾病、靜脈曲張、脈管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室顫動(dòng)、病毒和真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關(guān)性噬血細(xì)胞綜合征(vital-associated?
hemaphagocytic?syndrome)、韋尼克-科爾薩科夫綜合征(Wernicke-Korsakoff?
syndrome)、肝豆?fàn)詈俗冃?Wilson's?disease)及任何器官或組織的異種移植物排斥。
附圖說明
[0012] 圖1顯示各種IgG1克隆隨時(shí)間的結(jié)合。
具體實(shí)施方式
[0013] 本公開提供了以10-6M或更小的結(jié)合親和力結(jié)合CXCR5表位的IgG類的全人抗體,其具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的重鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合。優(yōu)選地,全人抗體具有重鏈和輕鏈兩者,其中所述抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2(本文中稱為52A9)、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4(本文中稱為52A10)、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6(本文中稱為52B10)、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8(本文中稱為52C6)、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10(本文中稱為52D6)、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12(本文中稱為
52D7)、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14(本文中稱為52D11)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16(本文中稱為52E1)、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18(本文中稱為52E10)、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20(本文中稱為52H9)、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22(本文中稱為PC12)、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24(本文中稱為PD10)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26(本文中稱為D3-4)、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28(本文中稱為E2-1)、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30(本文中稱為A4或
7A7)、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32(本文中稱為A8)、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34(本文中稱為A12)、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36(本文中稱為B3)、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38(本文中稱為C8)、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40(本文中稱為F8或10G9)、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42(本文中稱為G11)、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44(本文中稱為H3)、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46(本文中稱為H5)、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48(本文中稱為H6)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49(本文中稱為2D3)、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51(本文中稱為3A11)、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53(本文中稱為3B9)、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55(本文中稱為3D11)、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57(本文中稱為3D12或4E12)、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59(本文中稱為3E7)、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61(本文中稱為3E12)、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63(本文中稱為3F7)、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65(本文中稱為3G2)、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67(本文中稱為3G7)、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69(本文中稱為4A5)、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71(本文中稱為4E9)、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73(本文中稱為4F1)、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75(本文中稱為4F4)、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77(本文中稱為
4H2)、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79(本文中稱為5A8)、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81(本文中稱為5F1)、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83(本文中稱為6A4)、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85(本文中稱為6F9)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86(本文中稱為6G5)、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88(本文中稱為7B11或8B2)、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90(本文中稱為7H10)、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91(本文中稱為8D12)、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93(本文中稱為8H5)、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95(本文中稱為9A10)、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97(本文中稱為10A12)、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99(本文中稱為10B2)、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101(本文中稱為10C3)、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103(本文中稱為10C7)、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105(本文中稱為11E3)、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107(本文中稱為
11A12)、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109(本文中稱為11A7)、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111(本文中稱為11C3)、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113(本文中稱為11D3)、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115(本文中稱為11D4)、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117(本文中稱為
11D7)、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119(本文中稱為11F3)、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121(本文中稱為11G3)、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123(本文中稱為12A4)、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125(本文中稱為12B11或14E10)、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127(本文中稱為
12B4)、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129(本文中稱為12C1)、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131(本文中稱為12C6)、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133(本文中稱為12D11)、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135(本文中稱為12D3)、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137(本文中稱為12G10)、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139(本文中稱為13E10)、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140(本文中稱為13E4)、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142(本文中稱為13A3)、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144(本文中稱為13F8)、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146(本文中稱為13F9)、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148(本文中稱為13G9)、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150(本文中稱為
14E5)、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152(本文中稱為14B11)、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153(本文中稱為14B4)、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155(本文中稱為14C10)、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157(本文中稱為14C11)、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159(本文中稱為14C3)、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161(本文中稱為14D7)、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163(本文中稱為14F11)、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165(本文中稱為14F8)、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167(本文中稱為15C9)、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169(本文中稱為15D7)、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171(本文中稱為14D9)、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173(本文中稱為
15F9)、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175(本文中稱為15G11)、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177(本文中稱為15G7)、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178(本文中稱為15G9)、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180(本文中稱為15H10)、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182(本文中稱為
15H12)、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184(本文中稱為16E3)、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186(本文中稱為16A6)、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188(本文中稱為16A8)、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190(本文中稱為16B1)、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192(本文中稱為
16B7)、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194(本文中稱為16F8)、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196(本文中稱為16F9)及其組合。
[0014] 本公開提供了全人抗體Fab片段,其具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域,其中所述重鏈可變域序列與選自以下的氨基酸序列至少95%同一:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合。優(yōu)選地,全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者,其中所述抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196及其組合。
[0015] 本公開提供了單鏈人抗體,其具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域及連接所述重鏈和輕鏈可變域區(qū)域的肽接頭,其中所述重鏈可變域序列與選自以下的氨基酸序列至少95%同一:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合。優(yōu)選地,全人單鏈抗體具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者,其中所述單鏈全人抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196及其組合。
[0016] 本公開還提供了用于治療廣譜
哺乳動(dòng)物癌癥或炎性疾病或
自身免疫性疾病的方-6法,包括施用有效量的抗-CXCR5多肽,其中所述抗-CXCR5多肽選自以至少10 M的結(jié)合親和力結(jié)合CXCR5表位的IgG類的全人抗體、具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域的全人抗體Fab片段、具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域及連接所述重鏈和輕鏈可變域區(qū)域的肽接頭的單鏈人抗體,及其組合;
[0017] 其中全人抗體具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的重鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合;
[0018] 其中全人抗體Fab片段具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的重鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合;和
[0019] 其中單鏈人抗體具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的重鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.15、SEQ?ID?NO.17、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.21、SEQ?ID?NO.23、SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.27、SEQ?ID?NO.29、SEQ?ID?NO.31、SEQ?ID?NO.33、SEQ?ID?NO.35、SEQ?ID?NO.37、SEQ?ID?NO.39、SEQ?ID?NO.41、SEQ?ID?NO.43、SEQ?ID?NO.45、SEQ?ID?NO.47、SEQ?ID?NO.50、SEQ?ID?NO.52、SEQ?ID?NO.54、SEQ?ID?NO.56、SEQ?ID?NO.58、SEQ?ID?NO.60、SEQ?ID?NO.62、SEQ?ID?NO.64、SEQ?ID?NO.66、SEQ?ID?NO.68、SEQ?ID?NO.70、SEQ?ID?NO.72、SEQ?ID?NO.74、SEQ?ID?NO.76、SEQ?ID?NO.78、SEQ?ID?NO.80、SEQ?ID?NO.82、SEQ?ID?NO.84、SEQ?ID?NO.87、SEQ?ID?NO.89、SEQ?ID?NO.92、SEQ?ID?NO.94、SEQ?ID?NO.96、SEQ?ID?NO.98、SEQ?ID?NO.100、SEQ?ID?NO.102、SEQ?ID?NO.104、SEQ?ID?NO.106、SEQ?ID?NO.108、SEQ?ID?NO.110、SEQ?ID?NO.112、SEQ?ID?NO.114、SEQ?ID?NO.116、SEQ?ID?NO.118、SEQ?ID?NO.120、SEQ?ID?NO.122、SEQ?ID?NO.124、SEQ?ID?NO.126、SEQ?ID?NO.128、SEQ?ID?NO.130、SEQ?ID?NO.132、SEQ?ID?NO.134、SEQ?ID?NO.136、SEQ?ID?NO.138、SEQ?ID?NO.141、SEQ?ID?NO.143、SEQ?ID?NO.145、SEQ?ID?NO.147、SEQ?ID?NO.149、SEQ?ID?NO.151、SEQ?ID?NO.154、SEQ?ID?NO.156、SEQ?ID?NO.158、SEQ?ID?NO.160、SEQ?ID?NO.162、SEQ?ID?NO.164、SEQ?ID?NO.176、SEQ?ID?NO.179、SEQ?ID?NO.181、SEQ?ID?NO.183、SEQ?ID?NO.185、SEQ?ID?NO.187、SEQ?ID?NO.189、SEQ?ID?NO.191、SEQ?ID?NO.193、SEQ?ID?NO.195及其組合,且具有與選自以下的氨基酸序列至少95%同一的輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.196及其組合。
[0020] 優(yōu)選地,全人抗體具有重鏈和輕鏈兩者,其中所述抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196及其組合。優(yōu)選地,全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者,其中所述抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196及其組合。優(yōu)選地,全人單鏈抗體具有具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者,其中所述單鏈全人抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列:SEQ?ID?NO.1/SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3/SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5/SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7/SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9/SEQ?ID?NO.10、SEQ?ID?NO.11/SEQ?ID?NO.12、SEQ?ID?NO.13/SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.17/SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21/SEQ?ID?NO.22、SEQ?ID?NO.23/SEQ?ID?NO.24、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.26、SEQ?ID?NO.27/SEQ?ID?NO.28、SEQ?ID?NO.29/SEQ?ID?NO.30、SEQ?ID?NO.31/SEQ?ID?NO.32、SEQ?ID?NO.33/SEQ?ID?NO.34、SEQ?ID?NO.35/SEQ?ID?NO.36、SEQ?ID?NO.37/SEQ?ID?NO.38、SEQ?ID?NO.39/SEQ?ID?NO.40、SEQ?ID?NO.41/SEQ?ID?NO.42、SEQ?ID?NO.43/SEQ?ID?NO.44、SEQ?ID?NO.45/SEQ?ID?NO.46、SEQ?ID?NO.47/SEQ?ID?NO.48、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.49、SEQ?ID?NO.50/SEQ?ID?NO.51、SEQ?ID?NO.52/SEQ?ID?NO.53、SEQ?ID?NO.54/SEQ?ID?NO.55、SEQ?ID?NO.56/SEQ?ID?NO.57、SEQ?ID?NO.58/SEQ?ID?NO.59、SEQ?ID?NO.60/SEQ?ID?NO.61、SEQ?ID?NO.62/SEQ?ID?NO.63、SEQ?ID?NO.64/SEQ?ID?NO.65、SEQ?ID?NO.66/SEQ?ID?NO.67、SEQ?ID?NO.68/SEQ?ID?NO.69、SEQ?ID?NO.70/SEQ?ID?NO.71、SEQ?ID?NO.72/SEQ?ID?NO.73、SEQ?ID?NO.74/SEQ?ID?NO.75、SEQ?ID?NO.76/SEQ?ID?NO.77、SEQ?ID?NO.78/SEQ?ID?NO.79、SEQ?ID?NO.80/SEQ?ID?NO.81、SEQ?ID?NO.82/SEQ?ID?NO.83、SEQ?ID?NO.84/SEQ?ID?NO.85、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.86、SEQ?ID?NO.87/SEQ?ID?NO.88、SEQ?ID?NO.89/SEQ?ID?NO.90、SEQ?ID?NO.15/SEQ?ID?NO.91、SEQ?ID?NO.92/SEQ?ID?NO.93、SEQ?ID?NO.94/SEQ?ID?NO.95、SEQ?ID?NO.96/SEQ?ID?NO.97、SEQ?ID?NO.98/SEQ?ID?NO.99、SEQ?ID?NO.100/SEQ?ID?NO.101、SEQ?ID?NO.102/SEQ?ID?NO.103、SEQ?ID?NO.104/SEQ?ID?NO.105、SEQ?ID?NO.106/SEQ?ID?NO.107、SEQ?ID?NO.108/SEQ?ID?NO.109、SEQ?ID?NO.110/SEQ?ID?NO.111、SEQ?ID?NO.112/SEQ?ID?NO.113、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.115、SEQ?ID?NO.116/SEQ?ID?NO.117、SEQ?ID?NO.118/SEQ?ID?NO.119、SEQ?ID?NO.120/SEQ?ID?NO.121、SEQ?ID?NO.122/SEQ?ID?NO.123、SEQ?ID?NO.124/SEQ?ID?NO.125、SEQ?ID?NO.126/SEQ?ID?NO.127、SEQ?ID?NO.128/SEQ?ID?NO.129、SEQ?ID?NO.130/SEQ?ID?NO.131、SEQ?ID?NO.132/SEQ?ID?NO.133、SEQ?ID?NO.134/SEQ?ID?NO.135、SEQ?ID?NO.136/SEQ?ID?NO.137、SEQ?ID?NO.138/SEQ?ID?NO.139、SEQ?ID?NO.114/SEQ?ID?NO.140、SEQ?ID?NO.141/SEQ?ID?NO.142、SEQ?ID?NO.143/SEQ?ID?NO.144、SEQ?ID?NO.145/SEQ?ID?NO.146、SEQ?ID?NO.147/SEQ?ID?NO.148、SEQ?ID?NO.149/SEQ?ID?NO.150、SEQ?ID?NO.151/SEQ?ID?NO.152、SEQ?ID?NO.25/SEQ?ID?NO.153、SEQ?ID?NO.154/SEQ?ID?NO.155、SEQ?ID?NO.156/SEQ?ID?NO.157、SEQ?ID?NO.158/SEQ?ID?NO.159、SEQ?ID?NO.160/SEQ?ID?NO.161、SEQ?ID?NO.162/SEQ?ID?NO.163、SEQ?ID?NO.164/SEQ?ID?NO.165、SEQ?ID?NO.1664/SEQ?ID?NO.167、SEQ?ID?NO.168/SEQ?ID?NO.169、SEQ?ID?NO.170/SEQ?ID?NO.171、SEQ?ID?NO.172/SEQ?ID?NO.173、SEQ?ID?NO.174/SEQ?ID?NO.175、SEQ?ID?NO.176/SEQ?ID?NO.177、SEQ?ID?NO.19/SEQ?ID?NO.178、SEQ?ID?NO.179/SEQ?ID?NO.180、SEQ?ID?NO.181/SEQ?ID?NO.182、SEQ?ID?NO.183/SEQ?ID?NO.184、SEQ?ID?NO.185/SEQ?ID?NO.186、SEQ?ID?NO.187/SEQ?ID?NO.188、SEQ?ID?NO.189/SEQ?ID?NO.190、SEQ?ID?NO.191/SEQ?ID?NO.192、SEQ?ID?NO.193/SEQ?ID?NO.194、SEQ?ID?NO.195/SEQ?ID?NO.196及其組合。
[0021] 優(yōu)選地,待治療的廣譜哺乳動(dòng)物癌癥是CXCR5-陽性癌癥。優(yōu)選地,待治療的廣譜哺乳動(dòng)物癌癥選自癌瘤(cancinomas)、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、胃癌、頭頸癌和結(jié)腸癌。
[0022] “抗原結(jié)合蛋白”是包含與抗原結(jié)合的部分和,任選地,允許抗原結(jié)合部分采取促進(jìn)抗原結(jié)合蛋白與抗原的結(jié)合的構(gòu)象的骨架或
框架部分的
蛋白質(zhì)??乖Y(jié)合蛋白的例子包括抗體、抗體片段(例如,抗體的抗原結(jié)合部分)、抗體衍生物和抗體類似物。抗原結(jié)合蛋白可以包含,例如,具有移植的CDR或CDR衍生物的替代性蛋白質(zhì)骨架或人工骨架。這些骨架包括,但不限于抗體衍生的骨架(包含引入以例如使抗原結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的突變)以及完全合成的骨架(包含,例如,
生物相容性聚合物)。參見,例如,Korndorfer等,2003,Proteins:Structure,Function,and?Bioinformatics,第53卷,第1期:121-129;Roque等,2004,Biotechnol.Prog.20:639-654。此外,可以使用肽抗
體模擬物(“PAM”)以及基于抗體模擬物的骨架(利用纖維連接蛋白組分作為骨架)。
[0023] 抗原結(jié)合蛋白可以具有,例如,天然存在的免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)?!懊庖咔虻鞍住笔撬木垠w分子。在天然存在的免疫球蛋白中,每個(gè)四聚體由兩個(gè)相同的多肽鏈對組成,每對具有一條“輕”鏈(約25kDa)和一條“重”鏈(約50-70kDa)。每條鏈的氨基端部分包括主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的約100至110個(gè)或更多個(gè)氨基酸的可變區(qū)。每條鏈的羧基端部分限定主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。人輕鏈分類為κ或λ輕鏈。重鏈分類為μ、δ、γ、α或ε,并分別定義抗體同種型為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內(nèi),可變區(qū)和恒定區(qū)通過約12個(gè)或更多個(gè)氨基酸的“J”區(qū)連接,并且重鏈還包括約10個(gè)或更多個(gè)氨基酸的“D”區(qū)。通常參見,F(xiàn)undamental?Immunology,第7章(Paul,W.編輯,第二版,Raven出版社,N.Y.(1989))(通過引用結(jié)合其全部內(nèi)容用于所有目的)。每個(gè)輕/重鏈對的可變區(qū)形成抗體結(jié)合位點(diǎn),使得完整的免疫球蛋白具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。
[0024] 天然存在的免疫球蛋白鏈的可變區(qū)表現(xiàn)出相同的總體結(jié)構(gòu):具有通過三個(gè)高變區(qū)(也稱為互補(bǔ)決定區(qū)或CDR)連接的相對保守的框架區(qū)(FR)。從N端至C端,輕鏈和重鏈都包含結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。每個(gè)結(jié)構(gòu)域的氨基酸按照Kabat等在Sequences?of?Proteins?of?Immunological?Interest,第5版,US?Dept.ofHealth?and?Human?Services,PHS,NIH,NIH出版號(hào)91-3242,1991中的定義命名。免疫球蛋白鏈中氨基酸的其它編號(hào)系統(tǒng)包括IMGT.RTM.(國際ImMunoGeneTics信息系統(tǒng);Lefranc等,Dev.Comp.Immunol.29:185-203;2005)和AHo(Honegger和Pluckthun,J.Mol.Biol.309(3):
657-670;2001)。
[0025] 除非另有說明,“抗體”是指完整的免疫球蛋白或與完整抗體為特異性結(jié)合而競爭的其抗原結(jié)合部分??梢酝ㄟ^重組DNA技術(shù)或通過完整抗體的酶促或化學(xué)切割產(chǎn)生抗原結(jié)合部分??乖Y(jié)合部分包括,特別是,F(xiàn)ab、Fab'、F(ab')2、Fv、域抗體(dAb)和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、
嵌合抗體、雙抗體(diabodies)、三抗體(triabodies)、四抗體(tetrabodies)和含有至少足以賦予多肽特異性抗原結(jié)合的免疫球蛋白部分的多肽。
[0026] Fab片段為具有VL、VH、CL和CH1結(jié)構(gòu)域的單價(jià)片段;F(ab')2片段為具有通過在
鉸鏈區(qū)的二硫鍵連接的2個(gè)Fab片段的雙價(jià)片段;Fd片段具有VH和CH1結(jié)構(gòu)域;Fv片段具有抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域;并且dAb片段具有VH結(jié)構(gòu)域、VL結(jié)構(gòu)域或者VH或VL結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段(美國
專利號(hào)6,846,634、6,696,245,美國專利
申請公開號(hào)2002/02512、2004/0202995、2004/0038291、2004/0009507、2003/0039958和Ward等,Nature?341:544-546,1989)。
[0027] 單鏈抗體(scFv)為其中VL和VH區(qū)通過接頭(例如,合成的氨基酸殘基的序列)連接以形成連續(xù)的蛋白鏈(其中該接頭足夠長以允許蛋白鏈自身回折并形成單價(jià)抗原結(jié)合位點(diǎn))的抗體(Bird等,1988,Science? 242:423-26和Huston等,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA?85:5879-83)。雙抗體為包含2條多肽鏈的二價(jià)抗體,其中每條多肽鏈包含由接頭連接的VH和VL結(jié)構(gòu)域,該接頭太短而不允許相同鏈上的2個(gè)結(jié)構(gòu)域之間
配對,因此使得每個(gè)結(jié)構(gòu)域與在另一多肽鏈上的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(Holliger等,1993,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA?90:6444-48和Poljak等,1994,Structure?2:1121-23)。如果雙抗體的兩條多肽鏈?zhǔn)窍嗤?,那么由其配對產(chǎn)生的雙抗體將具有2個(gè)相同的抗原結(jié)合位點(diǎn)。
具有不同序列的多肽鏈可以用于形成具有2個(gè)不同抗原結(jié)合位點(diǎn)的雙抗體。類似地,三抗體和四抗體分別為包含3條和4條多肽鏈并分別形成3個(gè)和4個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)(其可以是相同的或不同的)的抗體。
[0028] 可以利用Kabat等(同上)、Lefranc等(同上)和/或Honegger和Pluckthun(同上)描述的系統(tǒng)確定給定抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和框架區(qū)(FR)??梢詫⒁粋€(gè)或多個(gè)CDR共價(jià)或非共價(jià)地整合到分子中以使其成為抗原結(jié)合蛋白??乖Y(jié)合蛋白可以使CDR作為較大多肽鏈的部分并入,可以共價(jià)地將CDR連接至另一多肽鏈,或可以非共價(jià)地整合CDR。CDR允許抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合特定的目標(biāo)抗原。
[0029] 抗原結(jié)合蛋白可以具有一個(gè)或多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。如果存在多于一個(gè)結(jié)合位點(diǎn),那么結(jié)合位點(diǎn)可以彼此相同或可以不同。例如,天然存在的人免疫球蛋白通常具有兩個(gè)相同的結(jié)合位點(diǎn),而“雙特異性”或“雙功能”抗體具有兩個(gè)不同的結(jié)合位點(diǎn)。
[0030] 術(shù)語“人抗體”包括具有源自人免疫球蛋白序列的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)和恒定區(qū)的所有抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中,所有的可變域和恒定域源自人免疫球蛋白序列(全人抗體)。這些抗體可以以多種方式制備,其實(shí)例如下文所述,包括通過用目標(biāo)抗原對小鼠(其經(jīng)遺傳修飾以表達(dá)來源于人重鏈和/或輕鏈編碼基因的抗體)進(jìn)行免疫。
[0031] 此外,框架區(qū)可以來源于相同抗-CXCR5抗體中的一個(gè)、源自一個(gè)或多個(gè)不同抗體(比如人抗體)或源自人源化抗體。在嵌合抗體的一個(gè)例子中,重鏈和/或輕鏈的一部分與來自特定物種或者屬于特定抗體類別或子類的抗體相同、同源或來源于該抗體,而鏈的其余部分與來自另一物種或者屬于另一抗體類別或子類的抗體相同、同源或來源于該抗體。也包括這些抗體的表現(xiàn)出所需生物活性(即,特異性結(jié)合CXCR5的能力)的片段。
[0032] “中和抗體”或“抑制性抗體”為使
用例如本文
實(shí)施例中描述的那些分析,在過量的抗-CXCR5抗體降低激活的量至少約20%時(shí)抑制CXCR5的激活的抗體。在各種實(shí)施方式中,抗原結(jié)合蛋白降低CXCR5的激活的量至少30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%和99.9%。
[0033] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本
說明書的教導(dǎo)并使用本領(lǐng)域已知技術(shù)容易地制備抗體片段或類似物。片段或類似物的優(yōu)選氨基端和羧基端存在于功能域的邊界附近。可以通過將核苷酸和/或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公共或?qū)S行蛄?a href='/zhuanli/list-14146-1.html' target='_blank'>數(shù)據(jù)庫比較來識(shí)別結(jié)構(gòu)域和功能域。計(jì)算機(jī)化的比較方法可用于識(shí)別在已知結(jié)構(gòu)和/或功能的其它蛋白質(zhì)中存在的序列基序或預(yù)測的蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)域。識(shí)別折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)序列的方法是已知的。參見,Bowie等,1991,Science?253:164。
[0034] “CDR移植抗體”是包含來源于特定物種或同種型的抗體的一個(gè)或多個(gè)CDR和相同或不同物種或同種型的另一抗體的框架的抗體。
[0035] “多特異性抗體”是識(shí)別在一個(gè)或多個(gè)抗原上的超過一個(gè)表位的抗體。這種類型的抗體的子類為“雙特異性抗體”,其識(shí)別在相同或不同抗原上的2個(gè)不同的表位。
[0036] 如果抗原結(jié)合蛋白以1納摩爾或更小的解離常數(shù)結(jié)合抗原(例如,人CXCR5),那么該抗原結(jié)合蛋白“特異性地結(jié)合”該抗原。
[0037] “抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域”、“抗原結(jié)合區(qū)”或“抗原結(jié)合位點(diǎn)”為含有與抗原相互作用并造成抗原結(jié)合蛋白對抗原的特異性和親和力的氨基酸殘基(或其它部分)的抗原結(jié)合蛋白的部分。對于特異性地結(jié)合其抗原的抗體,這包括其CDR域中至少一個(gè)的至少一部分。
[0038] “表位”為分子的被抗原結(jié)合蛋白(例如,抗體)結(jié)合的部分。表位可以包括分子的非連續(xù)部分(例如在多肽中,在多肽的一級序列中非連續(xù)的但在多肽的三級和四級結(jié)構(gòu)的情況下彼此足夠接近以被抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的氨基酸殘基)。
[0039] 兩個(gè)多核苷酸或兩個(gè)多肽序列的“百分同一性”通過利用GAP
計(jì)算機(jī)程序(GCG?Wisconsin?Package的部分,版本10.3(Accelrys,圣地亞哥,加利福尼亞州))使用其默認(rèn)參數(shù)比較該序列來確定。
[0040] 術(shù)語“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸”在全文中可互換地使用并包括DNA分子(例如,cDNA或基因組DNA)、RNA分子(例如,mRNA)、用核苷酸類似物(例如,肽核酸和非天然存在的核苷酸類似物)產(chǎn)生的DNA或RNA的類似物及其雜合體。核酸分子可以為單鏈或雙鏈的。在一個(gè)實(shí)施方式中,本發(fā)明的核酸分子包含編碼抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變體的連續(xù)開放閱讀框。
[0041] 如果兩個(gè)單鏈多核苷酸的序列可以按反平行定向?qū)R以使得一個(gè)多核苷酸中的每個(gè)核苷酸與另一多核苷酸中的其互補(bǔ)核苷酸相對的而沒有引入空位和在任一序列的5'或3'端沒有未配對的核苷酸,那么這兩個(gè)單鏈多核苷酸是彼此的“互補(bǔ)序列”。如果兩個(gè)多核苷酸可以在中等嚴(yán)格條件下彼此雜交,那么一個(gè)多核苷酸與另一多核苷酸“互補(bǔ)”。因此,多核苷酸可以與另一多核苷酸互補(bǔ)而不是其互補(bǔ)序列。
[0042] “載體”為可以用于將與其連接的另一核酸引入細(xì)胞中的核酸。一種類型的載體為“質(zhì)?!保渲傅氖强梢詫⒘硗獾暮怂崞谓雍现疗渲械木€性或環(huán)狀雙鏈DNA分子。另一類型的載體為病毒載體(例如,復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒),其中可將另外的DNA片段引入到病毒基因組中。某些載體能夠在其所引入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(例如,包含細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和附加型哺乳動(dòng)物載體)。其它載體(例如,非附加型哺乳動(dòng)物載體)在引入宿主細(xì)胞中后被整合到宿主細(xì)胞的基因組中,且由此與宿主基因組一起復(fù)制。“表達(dá)載體”為可以指導(dǎo)
選定多核苷酸的表達(dá)的載體類型。
[0043] 如果
調(diào)控序列影響核苷酸序列的表達(dá)(例如,表達(dá)的水平、時(shí)機(jī)或
位置),那么該核苷酸序列“可操作地連接”于調(diào)控序列?!罢{(diào)控序列”為影響其可操作地連接的核酸的表達(dá)(例如,表達(dá)的水平、時(shí)機(jī)或位置)的核酸。調(diào)控序列可以,例如,直接在所調(diào)節(jié)的核酸上,或通過一個(gè)或多個(gè)其它分子(例如,結(jié)合于該調(diào)控序列和/或該核酸的多肽)的作用施加其影響。調(diào)控序列的例子包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和其它表達(dá)控制元件(例如,聚腺苷
酸化信號(hào))。調(diào)控序列的另外的例子在,例如,Goeddel,1990,Gene?Expression?Technology:Methods?in?Enzymology?185,Academic?Press,San?Diego,Calif.和Baron等,1995,Nucleic?Acids?Res.23:3605-06中描述。
[0044] “宿主細(xì)胞”為可以用于表達(dá)核酸(例如,本發(fā)明的核酸)的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞,例如,大腸桿菌,或其可以是真核細(xì)胞,例如,單細(xì)胞真核生物(例如,
酵母或其它真菌)、植物細(xì)胞(例如,
煙草或番茄植物細(xì)胞)、動(dòng)物細(xì)胞(例如,人細(xì)胞、猴細(xì)胞、倉鼠細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、小鼠細(xì)胞或昆蟲細(xì)胞)或雜交瘤。宿主細(xì)胞的例子包括COS-7猴腎細(xì)胞系(ATCC?CRL?1651)(參見Gluzman等,1981,Cell?23:175)、L細(xì)胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCC?CCL?163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或其衍生物如Veggie?CHO和相關(guān)細(xì)胞系(其在無血清培養(yǎng)基中生長)(參見Rasmussen等,1998,Cytotechnology?28:31)或CHO株DX-B11(其為DHFR缺陷的)(參見Urlaub等,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA?77:4216-20)、HeLa細(xì)胞、BHK(ATCC?CRL?10)細(xì)胞系、來源于非洲綠猴腎細(xì)胞系CV1的CV1/EBNA細(xì)胞系(ATCC?CCL?70)(參見McMahan等,1991,EMBO?J.10:2821)、人胚腎細(xì)胞(比如293、293EBNA或MSR293)、人表皮A431細(xì)胞,人Colo205細(xì)胞、其它轉(zhuǎn)化的靈長類細(xì)胞系、正常二倍
體細(xì)胞、來源于原代組織、原代外植體的體外培養(yǎng)物的細(xì)胞株、HL-60、U937、HaK或Jurkat細(xì)胞。通常,宿主細(xì)胞是可用多肽編碼核酸(其隨后可以在宿主細(xì)胞中表達(dá))轉(zhuǎn)化或
轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞。短語“重組宿主細(xì)胞”可以用于表示已經(jīng)用待表達(dá)的核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞也可以為包含核酸,但除非將調(diào)控序列引入到該宿主細(xì)胞中以使該調(diào)控序列可操作地與該核酸連接,不以所需的水平表達(dá)該核酸的細(xì)胞。應(yīng)該理解,術(shù)語宿主細(xì)胞不僅僅指特定的受試細(xì)胞,還指這種細(xì)胞的后代或潛在的后代。因?yàn)樵诤罄m(xù)的世代中可能由于例如突變或環(huán)境影響而出現(xiàn)一些變化,因此實(shí)際上這類后代可能與親本細(xì)胞不相同,但仍然包含在本文使用的該術(shù)語的范圍內(nèi)。
[0045] 95%同源性
[0046] 本公開提供了結(jié)構(gòu)上特征為其可變結(jié)構(gòu)域區(qū)域的氨基酸序列的多種抗體。但是,氨基酸序列可以發(fā)生一些改變而同時(shí)保留它們與其特異性靶標(biāo)的高水平結(jié)合。更具體地,可變結(jié)構(gòu)域區(qū)域的許多氨基酸可以用保守置換進(jìn)行改變且可預(yù)期所得的抗體的結(jié)合特性與野生型抗體序列的結(jié)合特性沒有不同。抗體可變結(jié)構(gòu)域中具有許多不與抗原直接相互作用或影響抗原結(jié)合且對于確定抗體結(jié)構(gòu)不關(guān)鍵的氨基酸。例如,任何公開的抗體中預(yù)測的非關(guān)鍵氨基酸殘基優(yōu)選用來自同一類別的另一氨基酸殘基替換。
鑒別不消除抗原結(jié)合的氨基酸保守置換的方法是本領(lǐng)域中公知的(參見,例如,Brummell等,Biochem.32:1180-1187(1993);Kobayashi等Protein? Eng.12(10):879-884(1999)和Burks等Proc.Natl.Acad.Sci.USA?94:412-417(1997))。Near等Mol.Immunol.30:369-377,1993解釋了如何通過定點(diǎn)誘變影響或不影響結(jié)合。Near等僅突變他們認(rèn)為具有改變抗原結(jié)合的高可能性的殘基。大多數(shù)對結(jié)合親和力(Near等,表3)和與不同形式的地高辛的結(jié)合(Near等,表2)具有適度的或負(fù)面的影響。
[0047] 重組DNA也可以包括可以用于純化蛋白質(zhì)的任何類型的蛋白質(zhì)標(biāo)簽序列。蛋白質(zhì)標(biāo)簽的例子包括,但不限于組氨酸標(biāo)簽、FLAG標(biāo)簽、myc標(biāo)簽、HA標(biāo)簽或GST標(biāo)簽。用于細(xì)菌、真菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞宿主的合適的克隆和表達(dá)載體可以在Cloning?Vectors:A?Laboratory?Manual,(Elsevier,N.Y.,1985)中找到。
[0048] 利用適合于宿主細(xì)胞的方法將表達(dá)構(gòu)建體引入宿主細(xì)胞中。本領(lǐng)域已知將核酸引入宿主細(xì)胞中的多種方法,包括但不限于:電穿孔,采用
氯化鈣、氯化銣、
磷酸鈣、DEAE-葡聚糖或其它物質(zhì)的轉(zhuǎn)染,基因槍法,脂質(zhì)轉(zhuǎn)染和感染(其中載體是傳染劑)。合適的宿主細(xì)胞包括原核細(xì)胞、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞。合適的細(xì)菌包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性有
機(jī)體,例如,大腸桿菌或芽孢桿菌屬。酵母,優(yōu)選來自酵母屬物種,比如
釀酒酵母,也可用于產(chǎn)生多肽。各種哺乳動(dòng)物或昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)也可以用于表達(dá)重組蛋白。Luckow和Summers綜述了在昆蟲細(xì)胞中用于產(chǎn)生異源蛋白質(zhì)的桿狀病毒系統(tǒng)(Bio/Technology,6:47,1988)。合適的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的例子包括內(nèi)皮細(xì)胞、COS-7猴腎細(xì)胞、CV-1、L細(xì)胞、C127、3T3、中國倉鼠卵巢(CHO)、人胚腎細(xì)胞、HeLa、293、293T和BHK細(xì)胞系。純化的多肽通過培養(yǎng)合適的宿主/載體系統(tǒng)以表達(dá)重組蛋白來制備。對于許多應(yīng)用,本文公開的許多多肽的小尺寸使得在大腸桿菌中表達(dá)成為優(yōu)選的表達(dá)方法。然后從培養(yǎng)基或細(xì)胞提取物純化蛋白質(zhì)。
[0049] CXCR5-結(jié)合多肽也可以通過化學(xué)合成產(chǎn)生(例如,通過在Solid?Phase?Peptide?Synthesis,2nd?ed.,1984,The?Pierce?Chemical?Co.,Rockford,111中描述的方法)。也可以通過化學(xué)合成產(chǎn)生對蛋白質(zhì)的修飾。
[0050] 本公開的多肽可以通過蛋白質(zhì)化學(xué)領(lǐng)域公知的蛋白質(zhì)分離/純化方法進(jìn)行純化。非限制性例子包括萃取、重結(jié)晶、鹽析(例如,用
硫酸銨或硫酸鈉)、離心、透析、
超濾、
吸附色譜、離子交換色譜、疏水性色譜、正相色譜、反相色譜、凝膠過濾、凝膠滲透色譜、親和色譜、
電泳、逆流分布或這些的任意組合。純化后,可以通過本領(lǐng)域已知的多種方法中的任何一種,包括但不限于,過濾和透析,使多肽交換到不同的緩沖液中和/或濃縮。
[0051] 多肽的翻譯后修飾
[0052] 在某些實(shí)施方式中,本發(fā)明的結(jié)合多肽可以進(jìn)一步包括翻譯后修飾。示例性的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化、乙?;?、甲基化、ADP-核糖基化、泛素化、糖基化、羰基化、SUMO化、生物素化或者多肽
側(cè)鏈或疏水性基團(tuán)的添加。結(jié)果,修飾的可溶性多肽可含有非氨基酸成分,例如脂質(zhì)、多糖或單糖和磷酸類。糖基化的優(yōu)選形式是唾液酸化,其將一個(gè)或多個(gè)唾液酸部分與多肽綴合。唾液酸部分改善溶解性和血清
半衰期,同時(shí)還降低該蛋白質(zhì)的可能的免疫原性。參見Raju等,Biochemistry.2001,31;40(30):8868-76。
[0053] 在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,所述可溶性多肽的修飾形式包括將所述可溶性多肽連接至非蛋白質(zhì)性的聚合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,該聚合物為聚乙二醇("PEG")、聚丙二醇或聚
氧化烯類,以如美國專利號(hào)4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192或4,179,337中所述的方式。
[0054] PEG是可在市場上買到或可以根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法通過乙二醇的開環(huán)聚合制備(Sandler和Karo,Polymer?Synthesis,Academic?Press,New?York,Vol.3,138-161頁)的
水溶性聚合物。術(shù)語“PEG”廣泛地用于涵蓋任何聚乙二醇分子而不涉及大小或在PEG末端的修飾,并且可以由下式表示:X-O(CH2CH2O)n-1CH2CH2OH(1),其中n為20至2300,并且X為H或末端修飾,例如:C1-4烷基。在一個(gè)實(shí)施方式中,本發(fā)明的PEG在一端以羥基或甲氧基封端,即,X為H或CH3("甲氧基PEG")。PEG可以包含結(jié)合反應(yīng)所需的進(jìn)一步的化學(xué)基團(tuán),其由分子的化學(xué)合成產(chǎn)生,或者是使分子的部分具有最佳距離的間隔物。另外,這種PEG可以由一條或多條連接在一起的PEG側(cè)鏈組成。具有多于一條PEG鏈的PEG被稱為多臂或枝化PEG。枝化PEG可以通過,例如,將聚環(huán)氧乙烷添加到各種多元醇(包括甘油、季戊四醇和山梨糖醇)上而制備。例如,四臂的枝化PEG可以由季戊四醇和環(huán)氧乙烷制備。例如,EP-A0473084和美國專利號(hào)5,
932,462描述了枝化PEG。PEG的一種形式包括由賴氨酸的伯氨基基團(tuán)連接的兩個(gè)PEG側(cè)鏈(PEG2)(Monfardini等,Bioconjugate?Chem.6(1995)62-69)。
[0055] 雖然PEG是公知的,但這是首次證明PEG化的10Fn3多肽可以被PEG化并保留配體結(jié)合活性。在優(yōu)選的實(shí)施方式中,PEG化的10Fn3多肽通過定點(diǎn)PEG化產(chǎn)生,特別是通過PEG與N-或C-末端的半胱氨酸部分的偶聯(lián)。因此,本公開提供了具有改善的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的靶標(biāo)結(jié)合10Fn3多肽,該多肽包含:具有約80-約150個(gè)氨基酸的10Fn3結(jié)構(gòu)域,其中所述10Fn3結(jié)構(gòu)域的至少一個(gè)環(huán)參與靶結(jié)合;和共價(jià)結(jié)合的PEG部分,其中所述10Fn3多肽以小于100nM的KD結(jié)合靶標(biāo)并在哺乳動(dòng)物中具有小于30mL/hr/kg的清除率。PEG部分可以通過定點(diǎn)PEG化附接10F 10F
于 n3多肽,如通過附接于Cys殘基,其中該Cys殘基可以位于 n3多肽的N-末端或在N-末端與最N-末端的β或β-樣鏈之間或者位于10Fn3多肽的C-末端或在C-末端與最C-末端的β或β-樣鏈之間。Cys殘基也可以位于其它位置,特別是不參與靶標(biāo)結(jié)合的任何環(huán)。PEG部分也可以通過其它化學(xué)作用附接,包括通過與胺偶聯(lián)。
[0056] PEG與肽或蛋白質(zhì)的偶聯(lián)一般包括PEG的活化和活化的PEG-中間體直接與靶蛋白/肽或與接頭的偶聯(lián),接頭隨后活化并與靶蛋白/肽偶聯(lián)(參見Abuchowski等,J.Biol.Chem.,252,3571(1977)和J.Biol.Chem.,252,3582(1977),Zalipsky等和Harris等,in:Poly
(ethylene?glycol)Chemistry:Biotechnical?and?Biomedical?Applications;
(J.M.Harris?ed.)Plenum?Press:New?York,1992;第21和22章)。注意到包含PEG分子的結(jié)合多肽也稱為偶聯(lián)蛋白,而缺乏附接的PEG分子的蛋白可稱為未偶聯(lián)的。
[0057] 可以選擇多種分子量形式的PEG用于與CXCR5-結(jié)合多肽偶聯(lián),例如,約1,000道爾頓(Da)-100,000Da(n是20-2300)。PEG中重復(fù)單元的數(shù)目"n"對于以道爾頓描述的分子量是近似的。優(yōu)選的是活化的接頭上的PEG的總分子量適合于藥物用途。因此,在一個(gè)實(shí)施方式中,PEG分子的分子量不超過100,000Da。例如,如果三個(gè)PEG分子附接于接頭,其中各PEG分子具有12,000Da的相同分子量(各n為約270),則接頭上的PEG的總分子量為約36,000Da(總n為約820)。附接于接頭的PEG的分子量也可以不同,例如,在接頭上的三個(gè)分子中,兩個(gè)PEG分子各自可以是5,000Da(各n為約110)和一個(gè)PEG分子可以是12,000Da(n為約270)。
[0058] 在本公開的具體實(shí)施方式中,CXCR5結(jié)合多肽與下式的一個(gè)聚(乙二醇)基團(tuán)共價(jià)連接:-CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR,其中聚(乙二醇)基團(tuán)的-CO(即,羰基)與結(jié)合多肽的一個(gè)氨基形成酰胺鍵;R是低級烷基;x是2或3;m是約450-約950;且n和m選擇為使得偶聯(lián)物減去結(jié)合多肽的分子量為約10-40kDa。在一個(gè)實(shí)施方式中,結(jié)合多肽的賴氨酸的6-氨基是可用(游離)的氨基。
[0059] 以上偶聯(lián)物可以更具體地通過下式(II)表示:P-NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR(II),其中P是如本文所述的結(jié)合多肽的基團(tuán)(即,沒有如式(II)中所示與羰基形成酰胺鍵的一個(gè)或多個(gè)氨基基團(tuán));和其中R是低級烷基;x是2或3;m是約450-約950且選擇為使得偶聯(lián)物減去結(jié)合多肽的分子量是約10-約40kDa。如本文使用的,"m"的給定范圍具有定向的含義。"m"的范圍在任何情況下和精確地通過PEG基團(tuán)的分子量確定。
[0060] 在另一個(gè)實(shí)施方式中,本發(fā)明的PEG化結(jié)合多肽優(yōu)選保留至少25%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%或100%的與未修飾蛋白質(zhì)相關(guān)的生物活性。在一個(gè)實(shí)施方式中,生物活性是指其結(jié)合CXCR5的能力,如通過KD、kon或koff評價(jià)的。在一個(gè)具體實(shí)施方式中,PEG化結(jié)合多肽蛋白相對于未PEG化結(jié)合多肽顯示出與CXCR5的結(jié)合的提高。
[0061] 相對于未修飾的結(jié)合多肽的清除率,PEG修飾的多肽的血清清除率可以降低約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或甚至90%。PEG修飾的多肽的半衰期(t1/2)可以相對于未修飾蛋白質(zhì)的半衰期增加。相對于未修飾的結(jié)合多肽的半衰期,PEG結(jié)合多肽的半衰期可以增加至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、125%、
150%、175%、200%、250%、300%、400%或500%,或者甚至1000%。在一些實(shí)施方式中,在體外測定蛋白質(zhì)半衰期,比如,在緩沖鹽水溶液中或在血清中。在其它實(shí)施方式中,蛋白質(zhì)半衰期是體內(nèi)半衰期,比如在動(dòng)物的血清或其它體液中的蛋白質(zhì)半衰期。
[0062] 治療性制劑和施用方式
[0063] 本公開特征在于用于治療響應(yīng)于CXCR5生物活性的抑制的病癥或
預(yù)防前期病癥的方法。優(yōu)選的實(shí)例是特征為炎癥或細(xì)胞過度增殖的病癥。
[0064] 施用的技術(shù)和劑量根據(jù)特定多肽的類型和所治療的特定病癥而不同,但可以由技術(shù)人員容易地確定。通常,管理機(jī)構(gòu)要求用作治療劑的蛋白質(zhì)
試劑進(jìn)行配制以具有可接受的低熱
原水平。因此,治療性制劑與其它制劑的區(qū)別通常在于:其基本上是無熱原的,或者至少包含的熱原不超過由適當(dāng)?shù)墓芾頇C(jī)構(gòu)(例如,F(xiàn)DA)確定的可接受的熱原水平。
[0065] 本公開的治療性組合物可以以單位劑量形式與藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑一起施用。作為非限制性的例子,可以腸胃外(例如,靜脈內(nèi)、皮下)、口服或局部施用。此外,可以采用任何
基因治療技術(shù)(使用編碼本發(fā)明多肽的核酸),例如裸DNA遞送、重組基因和載體、基于細(xì)胞的遞送,包括患者細(xì)胞的離體操作,等。
[0066] 該組合物可以是用于口服施用的丸劑、片劑、膠囊、液體或持續(xù)釋放片劑,或者用于靜脈內(nèi)、皮下或腸胃外施用的液體,或者用于局部施用的凝膠、洗劑、
軟膏、霜?jiǎng)┗蛘呔酆衔锘蚱渌掷m(xù)釋放媒介的形式。
[0067] 在例如"Remington:The?Science?and?Practice?of?Pharmacy"(20thed.,A.R.Gennaro?A?R.編輯,2000,Lippincott?Williams&Wilkins,Philadelphia,Pa.)中可以找到本領(lǐng)域公知的用于制備制劑的方法。用于腸胃外施用的制劑可以,例如,含有賦形劑、無菌水、鹽水、聚烷撐二醇比如聚乙二醇、植物來源的油或氫化
萘類。生物相容性的、可
生物降解的交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可以用于控制化合物的釋放。納米顆粒制劑(例如,
可生物降解的納米顆粒、固體脂質(zhì)納米顆粒、脂質(zhì)體)可用于控制化合物的生物分布。其它潛在有用的腸胃外遞送體系包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物顆粒、滲透泵、可植入式輸注系統(tǒng)和脂質(zhì)體。制劑中化合物的濃度根據(jù)多種因素變化,包括待施用藥物的劑量和施用途徑。
[0068] 多肽可任選地作為藥學(xué)上可接受的鹽施用,比如在制藥工業(yè)中常用的無毒的
酸加成鹽或金屬復(fù)合物。酸加成鹽的例子包括
有機(jī)酸,比如乙酸、乳酸、撲酸、
馬來酸、
檸檬酸、蘋果酸、
抗壞血酸、
琥珀酸、苯
甲酸、棕櫚酸、辛二酸、水楊酸、
酒石酸、甲磺酸、
甲苯磺酸,或三氟乙酸等;聚合酸如
單寧酸、羧甲基
纖維素等;和
無機(jī)酸,如
鹽酸、
氫溴酸、硫酸、磷酸等。金屬復(fù)合物包括鋅、鐵等等。在一個(gè)實(shí)例中,多肽在乙酸鈉存在的情況下配制以提高熱
穩(wěn)定性。
[0069] 用于口服使用的制劑包括在與非毒性的藥學(xué)上可接受的賦形劑的混合物中包含活性成分的片劑。這些賦形劑可以是,例如,惰性稀釋劑或填充劑(例如,
蔗糖和山梨醇)、
潤滑劑、助流劑和抗粘劑(例如,
硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、
硅石、氫化
植物油或滑石)。
[0070] 用于口服使用的制劑也可以作為可咀嚼片劑,或作為硬明膠膠囊(其中活性成分與惰性固體稀釋劑混合)或作為軟明膠膠囊劑(其中活性成分與水或油介質(zhì)混合)提供。
[0071] 治療有效劑量是指產(chǎn)生施用所要達(dá)到的治療效果的劑量。確切的劑量取決于待治療的病癥,并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員利用已知技術(shù)確定。通常,多肽以每天約0.01g/kg至約50mg/kg,優(yōu)選每天0.01mg/kg至約30mg/kg,最優(yōu)選每天0.1mg/kg至約20mg/kg施用。多肽可以每天(例如,每天一次、二次、三次或四次)或優(yōu)選以較低
頻率(例如、每周、每兩周、每三周、每月或每季度)給予。此外,如本領(lǐng)域已知的,根據(jù)年齡以及體重、一般健康狀況、性別、飲食、
給藥時(shí)間、藥物相互作用和疾病的嚴(yán)重程度做出調(diào)整可能是必要的,并且將由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。
[0072] 示例性用途
[0073] 本文描述的CXCR5結(jié)合蛋白及其相關(guān)變體可用于多種治療和診斷應(yīng)用中。這些包括通過競爭或阻斷與CXCR5的結(jié)合抑制CXCR5的生物學(xué)活性以及向細(xì)胞(優(yōu)選表達(dá)CXCR5的細(xì)胞)遞送細(xì)胞毒性部分或成像部分。這些分子的小尺寸和穩(wěn)定結(jié)構(gòu)對于藥物的制造可能是特別有價(jià)值的,從身體的快速清除對于其中快速清除是希望的某些應(yīng)用或者使用具有這樣的特性的分子配制成合適的或改進(jìn)的新型遞送系統(tǒng)是特別有價(jià)值的。
[0074] 基于其作為CXCR5生物活性的
抑制劑的效力,本公開的多肽對于多種癌癥病癥以及由癌癥產(chǎn)生的并發(fā)癥如胸膜積液和腹水、結(jié)腸直腸癌、頭頸癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和胰腺癌是有效的。癌癥的非限制性實(shí)例包括膀胱癌、血癌、骨癌、腦癌、乳腺癌、軟骨癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、淋巴結(jié)癌、神經(jīng)組織癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、骨骼肌癌、皮膚癌、脊髓癌、脾癌、胃癌、睪丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、氣管癌、泌尿生殖道癌、輸尿管癌、尿道癌、子宮癌或
陰道癌。
[0075] 在某些實(shí)施方式中,可以單獨(dú)使用本發(fā)明的所述抗-CXCR5抗體劑?;蛘撸鏊巹┛梢耘c針對增殖性障礙(例如,腫瘤)的治療或預(yù)防的其他常規(guī)抗癌治療途徑組合使用。例如,這些方法可用于癌癥預(yù)防、癌癥術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的預(yù)防以及作為其他常規(guī)癌癥療法的
輔助治療。本公開認(rèn)為,常規(guī)癌癥療法(例如化療、放療、光療、免疫療法和手術(shù))的效力可以通過使用所述多肽治療劑來增強(qiáng)。
[0076] 眾多的常規(guī)化合物已被證明具有抗腫瘤活性。這些化合物已被用作化療中的藥劑以收縮實(shí)體腫瘤、預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移和進(jìn)一步生長或降低白血病或骨髓惡性腫瘤中的惡性細(xì)胞數(shù)量。雖然化療對治療各種類型的惡性腫瘤有效,但許多抗腫瘤化合物會(huì)導(dǎo)致有害
副作用。已證明,當(dāng)結(jié)合兩種或更多種不同治療時(shí),治療可能協(xié)同地作用并允許降低每種治療的劑量,由此降低每種化合物在較高劑量下產(chǎn)生的有害副作用。在其他情況中,難于以一種療法治療的惡性腫瘤可能響應(yīng)于兩種或更多種不同治療的組合療法。
[0077] 當(dāng)本發(fā)明的多肽治療劑伴隨地或相繼地與另一常規(guī)
抗腫瘤劑組合施用時(shí),這種治療劑可發(fā)現(xiàn)為提高抗腫瘤劑的療效或克服這種抗腫瘤劑的細(xì)胞抗性。這允許減小抗腫瘤劑的劑量,由此減輕有害副作用,或恢復(fù)抗腫瘤劑在抗性細(xì)胞中的效力。
[0078] 可用于組合抗腫瘤療法的藥物化合物包括(僅舉例說明):氨魯米特、安吖啶、阿那曲唑、天冬酰胺酶、卡介苗、比卡魯胺、博來霉素、布舍瑞林、白消安、喜樹
堿、卡培他濱、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、
順鉑、克拉屈濱、氯膦酸鹽、秋水仙堿、環(huán)磷酰胺、環(huán)丙孕
酮、阿糖胞苷、達(dá)卡巴嗪、更生霉素、柔紅霉素、雙烯雌酚、己烯雌酚、多西他賽、多柔比星、表柔比星、雌二醇、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、
氟達(dá)拉濱、氟氫可的松、氟尿嘧啶、氟甲睪酮、氟他胺、吉西他濱、染料木黃酮、戈舍瑞林、羥基脲、伊達(dá)比星、異環(huán)磷酰胺、伊馬替尼、干擾素、伊立替康、ironotecan、來曲唑、亞葉酸、亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、氮芥、甲羥孕酮、甲地孕酮、美法侖、巰基嘌呤、美司鈉、甲氨蝶呤、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼魯米特、諾考達(dá)唑、奧曲肽、奧沙利鉑、紫杉醇、帕米膦酸、噴司他丁、普卡霉素、卟吩姆、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔單抗、鏈佐星、蘇拉明、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、睪酮、硫鳥嘌呤、噻替派、二氯二茂
鈦、拓?fù)涮婵?、曲妥珠單抗、維甲酸、長春花堿、長春新堿、長春地辛和長春瑞濱。
[0079] 某些化療抗腫瘤化合物可以通過其作用機(jī)理分類到例如下列組中:抗
代謝物/抗癌劑如嘧啶類似物(5-氟尿嘧啶、氟尿苷、卡培他濱、吉西他濱和阿糖胞苷)和嘌呤類似物、葉酸拮抗劑和相關(guān)抑制劑(巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、噴司他丁和2-氯脫氧腺苷(克拉屈濱));抗增殖/抗有絲分裂劑,包括天然產(chǎn)物如長春花生物堿(長春花堿、長春新堿和長春瑞濱)、微管破壞劑如紫杉烷(紫杉醇、多西他賽)、長春新堿、長春花堿、諾考達(dá)唑、埃博霉素和諾維本、epidipodophyllotoxins(依托泊苷、替尼泊苷)、DNA損傷劑(放線菌素、安吖啶、蒽環(huán)類、博來霉素、白消安、喜樹堿、卡鉑、苯丁酸氮芥、順鉑、環(huán)磷酰胺、癌得星、更生霉素、柔紅霉素、多柔比星、表柔比星、六甲蜜胺、奧沙利鉑、異環(huán)磷酰胺、美法侖、氮芥(merchlorehtamine)、絲裂霉素、米托蒽醌、亞硝基脲、普卡霉素、丙卡巴肼、泰素、泰索帝、替尼泊苷、三亞乙基硫代磷酰胺和依托泊苷(VP16));抗生素類如更生霉素(放線菌素D)、柔紅霉素、多柔比星(阿霉素)、伊達(dá)比星、蒽環(huán)類、米托蒽醌、博來霉素、普卡霉素(光神霉素)和絲裂霉素;酶(L-天冬酰胺酶,其系統(tǒng)性地代謝L-天冬酰胺并剝奪無合成自身的天冬酰胺的能力的細(xì)胞);抗血小板藥物;抗增殖/抗有絲分裂烷化劑如氮芥類(氮芥、環(huán)磷酰胺和類似物、美法侖、苯丁酸氮芥)、乙烯亞胺類和甲基三聚氰胺類(六甲蜜胺和噻替派)、
烷基磺酸酯-白消安、亞硝基脲(卡莫司汀(BCNU)及類似物、鏈佐星)、trazenes-達(dá)卡巴嗪(DTIC);抗增殖/抗有絲分裂抗代謝物如葉酸類似物(甲氨蝶呤);鉑配位絡(luò)合物(順鉑、卡鉑)、丙卡巴肼、羥基脲、米托坦、氨魯米特;
激素類、激素類似物(雌激素、他莫昔芬、戈舍瑞林、比卡魯胺、尼魯米特)和芳香酶抑制劑(來曲唑、阿那曲唑);抗凝劑(肝素、合成肝素鹽和其他凝血酶抑制劑);纖維蛋白溶解劑(例如組織纖維溶酶原活化劑、鏈激酶和尿激酶)、阿司匹林、雙嘧達(dá)莫、噻氯匹定、氯吡格雷、阿昔單抗;抗遷移劑;抗分泌劑(breveldin);免疫抑制劑(環(huán)孢霉素、他克莫司(FK-506)、西羅莫司(雷帕霉素)、硫唑嘌呤、霉酚酸酯);抗血管生成化合物(TNP-470、染料木黃酮)和生長因子抑制劑(例如,VEGF抑制劑、
成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)抑制劑);血管緊張素受體阻斷劑;一氧化氮供體;反義寡核苷酸;抗體(曲妥珠單抗);
細(xì)胞周期抑制劑和分化誘導(dǎo)劑(維甲酸);mTOR抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(多柔比星(阿霉素)、安吖啶、喜樹堿、柔紅霉素、更生霉素、eniposide、表柔比星、依托泊苷、伊達(dá)比星和米托蒽醌、拓?fù)涮婵?、伊立替?、皮質(zhì)類固醇類(可的松、地塞米松、氫化可的松、甲基強(qiáng)的松龍、潑尼松和潑尼松龍);生長因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激酶抑制劑;線粒體功能障礙誘導(dǎo)劑和半胱天冬酶活化劑;和
染色質(zhì)破壞劑。
[0080] 根據(jù)組合療法的性質(zhì),可以在施用其他療法的同時(shí)和/或之后施用該多肽治療劑。多肽治療劑的施用可以以單劑量或多劑量進(jìn)行。在一些情況中,多肽治療劑的施用開始于常規(guī)療法之前的至少數(shù)天;而在其他情況中,施用在緊接傳統(tǒng)療法之前或在施用傳統(tǒng)療法的同時(shí)開始。
[0081] 在診斷應(yīng)用的一個(gè)實(shí)例中,來自疑似患有特征為不當(dāng)?shù)难苌傻牟“Y的患者的生物樣品如血清或組織活檢樣品與本公開的可檢測地標(biāo)記的多肽接觸以檢測CXCR5的水平。該檢測的CXCR5水平然后與也接觸標(biāo)記多肽的正常樣品中檢測的CXCR5水平比較。CXCR5水平的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的提高可以考慮為診斷指標(biāo)。
[0082] 在某些實(shí)施方式中,CXCR5結(jié)合多肽進(jìn)一步附接于能夠被檢測的標(biāo)記(例如,該標(biāo)記可以是
放射性同位素、
熒光化合物、酶或輔酶因子)?;钚圆糠挚梢允欠派浠钚栽噭?,例如43
放射性重金屬如鐵
螯合物,釓或錳的放射性螯合物,氧、氮、鐵、
碳或釓的
正電子發(fā)射體,K、52Fe、57Co、67Cu、67Ga、68Ga、123I、125I、131I、132I或99Tc??梢允褂霉潭ㄓ谶@樣的部分的結(jié)合劑來作為成像劑,并以對于哺乳動(dòng)物(例如人類)中的診斷目的有效的量來施用,然后檢測該成像劑的定位和累積??梢杂梅派湫蚤W爍攝影術(shù)、核
磁共振成像、計(jì)算機(jī)
斷層掃描或正電子成像術(shù)來檢測該成像劑的定位和累積。針對CXCR5的CXCR5結(jié)合多肽的免疫
閃爍成像可以用于檢測和/或診斷癌癥和脈管系統(tǒng)。例如,任何針對CXCR5的結(jié)合多肽,以99锝、111銦或125碘標(biāo)記的標(biāo)志物可以有效地用于這種成像。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的,待施用的放射性同位素的量取決于該放射性同位素。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地根據(jù)用作活性部分的給定
放射性核素的比活性和
能量來計(jì)算待施用的成像劑的量。典型地,施用每劑成像劑0.1-100毫居,優(yōu)選1-10毫居,最通常2-5毫居。因此,根據(jù)本發(fā)明可用作成像劑的組合物(其包含與放射性部分偶聯(lián)的靶向部分)包含0.1-100毫居,在一些實(shí)施方式中優(yōu)選為1-10毫居,在一些實(shí)施方式中優(yōu)選為2-5毫居,在一些實(shí)施方式中更優(yōu)選為1-5毫居。
[0083] CXCR5結(jié)合多肽還可用于向表達(dá)CXCR5的細(xì)胞或組織遞送另外的治療劑(包括但不限于藥物化合物、化療化合物和放療化合物)。在一個(gè)實(shí)例中,該CXCR5結(jié)合多肽與化療劑融合以將該化療劑靶向遞送至表達(dá)CXCR5的腫瘤細(xì)胞或組織。
[0084] CXCR5結(jié)合多肽可用于多種應(yīng)用中,包括研究、診斷和治療應(yīng)用。例如,其可用于分離和/或純化受體或其部分,以及用于研究受體結(jié)構(gòu)(例如構(gòu)象)和功能。
[0085] 在某些實(shí)施方式中,為了診斷的目的,可以標(biāo)記或不標(biāo)記結(jié)合多肽或其片段。通常,診斷分析需要檢測由結(jié)合多肽與CXCR5的結(jié)合產(chǎn)生的復(fù)合物的形成。與抗體類似,可以直接標(biāo)記結(jié)合多肽或片段??梢圆捎枚喾N標(biāo)記,包括,但不限于:放射性核素、熒光劑、酶、酶底物、酶輔因子、酶抑制劑和配體(如,生物素、半抗原)。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知許多合適的免疫分析法(參見,例如,美國專利號(hào)3,817,827、3,850,752、3,901,654和4,098,876)。在未標(biāo)記時(shí),結(jié)合多肽可以用于分析中,比如凝集分析。未標(biāo)記的結(jié)合多肽也可以與另外(一種或多種)合適的試劑結(jié)合使用,該試劑可以用于檢測結(jié)合多肽,比如,與結(jié)合多肽反應(yīng)的標(biāo)記抗體或其它合適的試劑(例如,標(biāo)記的蛋白A)。
[0086] 在一個(gè)實(shí)施方式中,本發(fā)明的結(jié)合多肽可以用于酶免疫分析法中,其中所述多肽與酶偶聯(lián)。當(dāng)包含CXCR5蛋白的生物樣品與所述結(jié)合多肽組合時(shí),在結(jié)合多肽和CXCR5蛋白之間發(fā)生結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中,含有表達(dá)CXCR5蛋白的細(xì)胞(例如,內(nèi)皮細(xì)胞)的樣品與所述抗體組合,并且在結(jié)合多肽和攜帶被該結(jié)合多肽識(shí)別的CXCR5蛋白的細(xì)胞之間發(fā)生結(jié)合。這些結(jié)合的細(xì)胞可以與未結(jié)合的試劑分離并且可以測定特異地結(jié)合細(xì)胞的結(jié)合多肽-酶偶聯(lián)物的存在,例如,通過將樣品與酶的底物(其在受到酶的作用時(shí)產(chǎn)生
顏色變化或其它可檢測的變化)接觸。在另一實(shí)施方式中,所述結(jié)合多肽可以是未標(biāo)記的,并且可以加入識(shí)別所述結(jié)合多肽的第二標(biāo)記多肽(例如,抗體)。
[0087] 在某些方面,還可以制備用于檢測生物樣品中CXCR5蛋白的存在的
試劑盒。這些試劑盒將包括與CXCR5蛋白或所述受體的部分結(jié)合的CXCR5結(jié)合多肽,以及一種或多種適于檢測結(jié)合多肽和受體蛋白或其部分之間的復(fù)合物的存在的輔助試劑。本發(fā)明的多肽組合物可以單獨(dú)地或與對于其它表位特異性的另外的抗體組合以凍干形式提供。結(jié)合多肽和/或抗體(其可以是標(biāo)記或未標(biāo)記的)可以與輔助成分(例如,緩沖劑如Tris、
磷酸鹽和碳酸鹽,穩(wěn)定劑,賦形劑,
殺生物劑和/或惰性蛋白質(zhì),例如,
牛血清
白蛋白)一起包括在試劑盒中。例如,結(jié)合多肽和/或抗體可以作為與輔助成分的凍干混合物提供,或輔助成分可以單獨(dú)地提供用于由使用者組合。一般地,這些輔助材料基于活性結(jié)合多肽或抗體的量以小于約5%重量存在,且通?;诙嚯幕蚩贵w濃度以至少約0.001%重量的總量存在。當(dāng)采用能夠與結(jié)合多肽結(jié)合的第二抗體時(shí),這種抗體可以在試劑盒中提供,例如在單獨(dú)的小瓶或容器中。第二抗體(如果存在)通常是標(biāo)記的,并且可以以與上文描述的抗體制劑相似的方式配制。
[0088] 類似地,本公開還提供了檢測和/或定量CXCR5的表達(dá)的方法,其中包含細(xì)胞或其部分(例如,膜部分)的組合物在適合于結(jié)合的條件下與結(jié)合CXCR5或受體的部分的結(jié)合多肽接觸,并監(jiān)測該結(jié)合。檢測到指示結(jié)合多肽與CXCR5或其部分之間的復(fù)合物的形成的結(jié)合多肽表明受體的存在。多肽與細(xì)胞的結(jié)合可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法測定,如工作實(shí)施例中描述的那些。該方法可用于檢測來自個(gè)體的細(xì)胞上的CXCR5表達(dá)。任選地,可以評估內(nèi)皮細(xì)胞表面上CXCR5的定量表達(dá),例如,通過流式細(xì)胞術(shù),且染色強(qiáng)度可與疾病易感性、進(jìn)展或風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)。
[0089] 本公開還提供了檢測哺乳動(dòng)物對某些疾病的易感性的方法。舉例來說,該方法可用于基于細(xì)胞上存在的CXCR5的量和/或哺乳動(dòng)物中CXCR5-陽性細(xì)胞的數(shù)量檢測哺乳動(dòng)物對進(jìn)展的疾病的易感性。
[0090] 使用標(biāo)準(zhǔn)的一字母或三字母的縮寫表示多肽序列。除非另有說明,每條多肽序列具有左側(cè)的氨基端和右側(cè)的羧基端;各單鏈核酸序列和各雙鏈核酸序列的頂部鏈具有左側(cè)的5'端和右側(cè)的3'端。還可以通過解釋特定多肽序列與參考序列如何不同來描述該特定多肽序列。
[0091] 抗原結(jié)合蛋白
[0092] 抗原結(jié)合蛋白(例如,抗體、抗體片段、抗體衍生物、抗體突變蛋白和抗體變體)為結(jié)合EGFR(優(yōu)選地,人CXCR5)的多肽。抗原結(jié)合蛋白包括抑制CXCR5的生物活性的抗原結(jié)合蛋白。
[0093] 包含一個(gè)或多個(gè)抗原結(jié)合蛋白的寡聚體可以用作CXCR5拮抗劑。寡聚體可以為共價(jià)連接或非共價(jià)連接的二聚體、三聚體或更高級的寡聚體的形式??紤]使用包含兩個(gè)或更多個(gè)抗原結(jié)合蛋白的寡聚體,一個(gè)例子是同源二聚體。其它寡聚體包括異源二聚體、同源三聚體、異源三聚體、同源四聚體、異源四聚體等。
[0094] 一個(gè)實(shí)施方式涉及包括通過在與抗原結(jié)合蛋白融合的肽部分之間的共價(jià)或非共價(jià)相互作用連接的多個(gè)抗原結(jié)合蛋白的寡聚體。這類肽可以是肽接頭(間隔物),或具有促進(jìn)低聚化的性質(zhì)的肽。亮氨酸
拉鏈和來源于抗體的某些多肽屬于能夠促進(jìn)與其連接的抗原結(jié)合蛋白的低聚化的肽,如下文更詳細(xì)描述的。
[0095] 在特定實(shí)施方式中,寡聚體包含兩個(gè)至四個(gè)抗原結(jié)合蛋白。寡聚體的抗原結(jié)合蛋白可以是任何形式的,如上述形式的任何一種,例如,變體或片段。優(yōu)選地,寡聚體包含具有CXCR5結(jié)合活性的抗原結(jié)合蛋白。
[0096] 在一個(gè)實(shí)施方式中,寡聚體使用源自免疫球蛋白的多肽制備。例如,Ashkenazi等,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA?88:10535、Byrn等,1990,Nature?344:677和Hollenbaugh等,1992"Construction?of?Immunoglobulin?Fusion?Proteins",in?Current?Protocols?in?Immunology,Suppl.4,第10.19.1-10.19.11頁已經(jīng)描述了包含與抗體來源的多肽的各個(gè)部分(包括Fc結(jié)構(gòu)域)融合的某些異源多肽的融合蛋白的制備。
[0097] 一個(gè)實(shí)施方式涉及通過將抗-CXCR5抗體的CXCR5結(jié)合片段與抗體的Fc區(qū)融合產(chǎn)生的包含兩個(gè)融合蛋白的二聚體??梢酝ㄟ^例如,將編碼融合蛋白的基因融合體插入合適的表達(dá)載體中,在用重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中表達(dá)該基因融合體和使表達(dá)的融合蛋白非常像抗體分子一樣組裝,由此在Fc部分之間形成鏈間二硫鍵以產(chǎn)生二聚體來制備該二聚體。
[0098] 術(shù)語“Fc多肽”包括源自抗體Fc區(qū)的多肽的天然和突變蛋白形式。也包括含有促進(jìn)二聚化的鉸鏈區(qū)的這種多肽的截短形式。包含F(xiàn)c部分的融合蛋白(以及由其形成的寡聚體)具有如下優(yōu)勢:易于通過在蛋白A或蛋白G柱上的親和色譜純化。
[0099] 制備低聚抗原結(jié)合蛋白的另一方法包括使用亮氨酸拉鏈。亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域?yàn)榇龠M(jìn)其中存在亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)的低聚化的肽。亮氨酸拉鏈最初在幾種DNA結(jié)合蛋白中識(shí)別(Landschulz等,1988,Science?240:1759),并且此后在多種不同的蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)。已知的亮氨酸拉鏈中有二聚化或三聚化的天然存在的肽及其衍生物。WO?94/10308描述了適于產(chǎn)生可溶性低聚蛋白質(zhì)的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域的例子,并且Hoppe等,1994,FEBS?Letters?344:191中描述了來源于肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉鏈。Fanslow等,1994,Semin.Immunol.6:267-78中描述了修飾的亮氨酸拉鏈的使用,該修飾的亮氨酸拉鏈允許與其融合的異源蛋白質(zhì)穩(wěn)定地三聚化。在一種方法中,在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)包含與亮氨酸拉鏈肽融合的抗CXCR5抗體片段或衍生物的重組融合蛋白,并從培養(yǎng)物上清液回收形成的可溶性低聚化抗-CXCR5抗體片段或衍生物。
[0100] 可以通過常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白的抗原結(jié)合片段。這些片段的例子包括,但不限于Fab和F(ab')2片段。
[0101] 本公開提供了結(jié)合CXCR5的單克隆抗體。單克隆抗體可以利用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)產(chǎn)生,例如,通過使在完成免疫方案后從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中收集的脾細(xì)胞永生化??梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何技術(shù)使脾細(xì)胞永生化,例如,通過使脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤。在產(chǎn)生雜交瘤的融合過程中使用的骨髓瘤細(xì)胞優(yōu)選為不產(chǎn)生抗體的,具有高融合效率和酶缺陷的(這使得該骨髓瘤細(xì)胞不能在僅支持期望的融合細(xì)胞(雜交瘤)生長的某些選擇培養(yǎng)基中生長)。在小鼠融合中使用的合適的細(xì)胞系的例子包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NS1/1.Ag?41、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG1.7和S194/5XX0Bul;在大鼠融合中使用的細(xì)胞系的例子包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和48210。
可用于細(xì)胞融合的其它細(xì)胞系為U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2和UC729-6。
[0102] 針對CXCR5的抗原結(jié)合蛋白可以用于例如,在體外或體內(nèi)檢測CXCR5多肽的存在的分析中。也可以采用該抗原結(jié)合蛋白通過免疫親和色譜來純化CXCR5蛋白。阻斷性抗原結(jié)合蛋白可以用于本文公開的方法中??梢允褂米鳛镃XCR5拮抗劑發(fā)揮作用的抗原結(jié)合蛋白治療任何CXCR5誘導(dǎo)的病癥,包括但不限于各種癌癥。
[0103] 抗原結(jié)合蛋白可以在體外過程中使用,或體內(nèi)施用以抑制CXCR5誘導(dǎo)的生物活性。因此,可以治療(直接或間接地)由CXCR5的蛋白
水解活化引起或惡化的病癥,本文提供了其實(shí)例。在一個(gè)實(shí)施方式中,本發(fā)明提供治療方法,包括對需要的哺乳動(dòng)物體內(nèi)施用有效降低CXCR5誘導(dǎo)的生物活性的量的CXCR5阻斷性抗原結(jié)合蛋白。
[0104] 抗原結(jié)合蛋白包括抑制CXCR5的生物活性的全人單克隆抗體。
[0105] 可以通過許多常規(guī)技術(shù)的任何一種制備抗原結(jié)合蛋白。例如,它們可以從天然表達(dá)該抗原結(jié)合蛋白的細(xì)胞純化(例如,抗體可以從產(chǎn)生抗體的雜交瘤純化),或利用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)在重組表達(dá)體系中產(chǎn)生。參見,例如,Monoclonal? Antibodies,Hybridomas:A?New?Dimension?in?Biological?Analyses,Kennet等(編輯),Plenum出版社,紐約(1980)和Antibodies:A?Laboratory?Manual,Harlow?and?Land(編輯),Cold?Spring?Harbor?Laboratory出版社,冷泉港實(shí)驗(yàn)室,紐約(1988)。
[0106] 可以使用本領(lǐng)域已知的任何表達(dá)系統(tǒng)制備本發(fā)明的重組多肽。通常,用包含編碼所需多肽的DNA的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。可以采用的宿主細(xì)胞包括原核細(xì)胞、酵母或高等真核細(xì)胞。原核細(xì)胞包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性有機(jī)體,例如,大腸桿菌或芽孢桿菌。高等真核細(xì)胞包括昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物來源的已建立細(xì)胞系。合適的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的例子包括COS-7系猴腎細(xì)胞(ATCC?CRL?1651)(Gluzman等,1981,Cell?23:175)、L細(xì)胞、293細(xì)胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCC?CCL?163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、BHK(ATCC?CRL?10)細(xì)胞系和如McMahan等,1991,EMBO?J.10:2821所述的源自非洲綠猴腎細(xì)胞系CV1的CV1/EBNA細(xì)胞系(ATCC?CCL?70)。Pouwels等(Cloning?Vectors:A?Laboratory?Manual,Elsevier,N.Y.,1985)描述了用于細(xì)菌、真菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞宿主的合適的克隆和表達(dá)載體。
[0107] 轉(zhuǎn)化的細(xì)胞可以在促進(jìn)多肽表達(dá)的條件下培養(yǎng),并且多肽通過常規(guī)蛋白質(zhì)純化過程回收。一種這樣的純化過程包括使用親和色譜,例如在CXCR5的全部或部分(例如,細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域)與其結(jié)合的基質(zhì)上。本文考慮使用的多肽包括基本上沒有污染的內(nèi)源物質(zhì)的基本上同源的重組哺乳動(dòng)物抗-CXCR5抗體多肽。
[0108] 可以通過許多已知技術(shù)中的任何一種制備抗原結(jié)合蛋白并針對所需的性質(zhì)進(jìn)行篩選。某些技術(shù)包括分離編碼目標(biāo)抗原結(jié)合蛋白(例如,抗-CXCR5抗體)的多肽鏈(或其部分)的核酸,和通過重組DNA技術(shù)操縱該核酸。例如,核酸可以另一目標(biāo)核酸融合,或被改變(例如,通過誘突或其它常規(guī)技術(shù))以添加、刪除或置換一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。
[0109] 單鏈抗體可以通過經(jīng)由氨基酸橋(短肽接頭)連接重鏈和輕鏈可變域(Fv區(qū))片段而得到單多肽鏈來形成。這樣的單鏈Fv(scFv)通過將編碼肽接頭的DNA融合在編碼兩個(gè)可變域多肽(VL和VH)的DNA之間制備。取決于在兩個(gè)可變域之間的柔性接頭的長度,得到的多肽可以本身回折以形成抗原結(jié)合
單體,或其可以形成多聚體(例如,二聚體、三聚體或四聚體)(Kortt等,1997,Prot.Eng.10:423;Kortt等,2001,Biomol.Eng.18:95-108)。通過將不同的包含VL和VH的多肽組合,可以形成結(jié)合不同表位的多聚scFv(Kriangkum等,2001,Biomol.Eng.18:31-40)。為產(chǎn)生單鏈抗體而開發(fā)的技術(shù)包括在美國專利4,946,778;Bird,1988,Science?242:423;Huston等,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA?85:5879;Ward等,
1989,Nature?334:544和de?Graaf等,2002,Methods?Mol.Biol.178:379-87中描述的那些技術(shù)。
[0110] 已知用于從目標(biāo)抗體衍生不同亞類或同種型的抗體(即,亞類轉(zhuǎn)換)的技術(shù)。因此,例如,可以從IgM抗體衍生IgG抗體,反之亦然。這些技術(shù)允許制備具有給定抗體(親本抗體)的抗原結(jié)合性質(zhì),但也展示與不同于親本抗體的抗體同種型或亞類相關(guān)的生物學(xué)性質(zhì)的新抗體??梢圆捎弥亟MDNA技術(shù)。在這些過程中可以采用編碼特定抗體多肽的克隆DNA,例如,編碼所需同種型的抗體的恒定結(jié)構(gòu)域的DNA(Lantto等,2002,Methods?Mol.Biol.178:303-16)。此外,如果IgG4是需要的,那么在鉸鏈區(qū)中引入點(diǎn)突變(CPSCP->CPPCP)(Bloom等,
1997,Protein?Science?6:407)以減輕形成H鏈內(nèi)二硫鍵(其可以導(dǎo)致IgG4抗體的異質(zhì)性)的趨勢也可能是理想的。
[0111] 在特定實(shí)施方式中,本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白對CXCR5的結(jié)合親和力(Ka)為至少106。在其它實(shí)施方式中,抗原結(jié)合蛋白的Ka為至少107、至少108、至少109或至少1010。在另一實(shí)施方式中,該抗原結(jié)合蛋白表現(xiàn)的Ka與本文實(shí)施例中描述的抗體的Ka基本上相同。
[0112] 在另一實(shí)施方式中,本公開提供了對CXCR5具有低解離速率的抗原結(jié)合蛋白。在一個(gè)實(shí)施方式中,該抗原結(jié)合蛋白的Koff為1×10-4至10-1或更小。在另一實(shí)施方式中,該Koff為5×10-5至10-1或更小。在另一實(shí)施方式中,該Koff與本文描述的抗體的Koff基本上相同。在另一實(shí)施方式中,該抗原結(jié)合蛋白以與本文描述的抗體基本上相同的Koff結(jié)合CXCR5。
[0113] 在另一方面,本公開提供抑制CXCR5的活性的抗原結(jié)合蛋白。在一個(gè)實(shí)施方式中,該抗原結(jié)合蛋白的IC50為1000nM或更小。在另一實(shí)施方式中,該IC50為100nM或更??;在另一實(shí)施方式中,該IC50為10nM或更小。在另一實(shí)施方式中,該IC50與在實(shí)施例中描述的抗體的IC50基本上相同。在另一實(shí)施方式中,該抗原結(jié)合蛋白以與本文描述的抗體基本上相同的IC50抑制CXCR5的活性。
[0114] 在另一方面,本公開提供了結(jié)合在細(xì)胞表面上表達(dá)的人CXCR5的抗原結(jié)合蛋白,且在如此結(jié)合時(shí),其抑制細(xì)胞中的CXCR5信號(hào)傳導(dǎo)活性而不導(dǎo)致細(xì)胞表面上CXCR5量的顯著下降。可以使用任何測定或估算細(xì)胞表面上和/或內(nèi)部的CXCR5量的方法。在其它實(shí)施方式中,抗原結(jié)合蛋白與CXCR5表達(dá)細(xì)胞的結(jié)合導(dǎo)致少于約75%、50%、40%、30%、20%、15%、10%、5%、1%或0.1%的細(xì)胞表面CXCR5內(nèi)化。
[0115] 在另一方面,本公開提供了在體外或體內(nèi)(例如,當(dāng)施用于人類受試者時(shí))具有至少一天的半衰期的抗原結(jié)合蛋白。在一個(gè)實(shí)施方式中,抗原結(jié)合蛋白的半衰期為至少三天。在另一實(shí)施方式中,抗原結(jié)合蛋白的半衰期為四天或更長。在另一實(shí)施方式中,該抗原結(jié)合蛋白的半衰期為八天或更長。在另一實(shí)施方式中,抗原結(jié)合蛋白被衍生化或修飾以使得其相比于未衍生化或未修飾的抗原結(jié)合蛋白具有更長的半衰期。在另一實(shí)施方式中,抗原結(jié)合蛋白含有一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)突變以增加血清半衰期,比如在WO00/09560中所述,該文獻(xiàn)通過引入并入本文。
[0116] 本公開進(jìn)一步提供了多特異性抗原結(jié)合蛋白,例如,雙特異性抗原結(jié)合蛋白,比如,通過兩個(gè)不同的抗原結(jié)合位點(diǎn)或區(qū)域結(jié)合CXCR5的兩個(gè)不同表位,或結(jié)合CXCR5的表位和另一分子的表位的抗原結(jié)合蛋白。此外,本文公開的雙特異性抗原結(jié)合蛋白可以包含來自本文描述的抗體之一的CXCR5結(jié)合位點(diǎn)和來自本文描述抗體中另一種(包括通過引用其它公開文獻(xiàn)在本文中描述的那些)的第二CXCR5結(jié)合位點(diǎn)??蛇x地,雙特異性抗原結(jié)合蛋白可以包含來自本文描述的抗體之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)和來自本領(lǐng)域已知的另一CXCR5抗體或來自通過已知的方法或本文描述的方法制備的抗體的第二抗原結(jié)合位點(diǎn)。
[0117] 本領(lǐng)域已知許多用于制備雙特異性抗體的方法。這些方法包括如Milstein等,1983,Nature?305:537描述的雜種-雜交瘤的使用及抗體片段的化學(xué)偶聯(lián)(Brennan等,
1985,Science?229:81;Glennie等,1987,J.Immunol.139:2367;美國專利號(hào)6,010,902)。此外。可以通過重組手段產(chǎn)生雙特性抗體,例如,通過利用亮氨酸拉鏈部分(即,來自Fos和Jun蛋白,其優(yōu)先形成異源二聚體;Kostelny等,1992,J.Immunol.148:1547)或如美國專利號(hào)5,
582,996中描述的其它“
鎖和鑰”相互作用的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)。另外的有用技術(shù)包括美國專利號(hào)
5,959,083和5,807,706中描述的那些技術(shù)。
[0118] 在另一方面,該抗原結(jié)合蛋白包括抗體的衍生物。衍生化的抗體可以包含任何賦予該抗體所需的性質(zhì)(比如,在特定用途中增加的半衰期)的分子或物質(zhì)。衍生化的抗體可以包含,例如,可檢測(或標(biāo)記)的部分(例如,放射性的、比色的、抗原的或酶的分子),可檢測的珠(例如,
磁珠或電子致密(例如,金)珠)或者結(jié)合另一分子的分子(例如,生物素或鏈霉親和素),治療或診斷部分(例如,放射性的、細(xì)胞毒性的或藥學(xué)活性的部分),增加抗體對特定用途(例如,施用于受試者如人類受試者,或其它體內(nèi)或體外用途)的適用性的分子??梢杂糜诳贵w衍生化的分子的例子包括白蛋白(例如,人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。可以利用本領(lǐng)域公知的技術(shù)制備白蛋白連接的和
聚乙二醇化的抗體衍生物。在一個(gè)實(shí)施方式中,抗體與轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)或TTR變體綴合或以其他方式連接。TTR或TTR變體可以用例如選自以下的化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)修飾:葡聚糖、聚(n-乙烯基吡咯烷酮)、聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇和聚乙烯醇。
[0119] 治療方法和抗原結(jié)合蛋白的施用
[0120] 本文所提供的某些方法包括向受試者施用CXCR5結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白,從而降低CXCR5誘導(dǎo)的在特定病癥中發(fā)揮作用的生物反應(yīng)。在特定實(shí)施方式中,本發(fā)明的方法包括使內(nèi)源性CXCR5與CXCR5結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白接觸,例如,通過施用于受試者或通過活體外過程。
[0121] 術(shù)語“治療”涵蓋緩解或預(yù)防障礙的至少一種癥狀或其他方面,或減輕疾病嚴(yán)重程度等??乖Y(jié)合蛋白不需要實(shí)現(xiàn)完全治愈或根除疾病的每一種癥狀或表現(xiàn)以構(gòu)成可行的治療劑。如相關(guān)領(lǐng)域所公認(rèn)的,用作治療劑的藥物可以減輕給定疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度,而不需要根除障礙的每一表現(xiàn)以被看作是有用的治療劑。
[0122] 類似地,預(yù)防性施用的治療不需要完全有效地預(yù)防病癥的發(fā)作以構(gòu)成可行的預(yù)防劑。只要降低疾病的影響(例如,通過降低其癥狀數(shù)量或嚴(yán)重程度,或通過提高另一治療的有效性,或通過產(chǎn)生另一有益效果),或降低受試者體內(nèi)疾病發(fā)生或惡化的可能性就足夠了。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式涉及包括向患者施用CXCR5拮抗劑的方法,其施用量和時(shí)間足以使得反映特定障礙的嚴(yán)重程度的指標(biāo)得到超過基線的持續(xù)改善。
[0123] 也設(shè)想抗原結(jié)合蛋白在活體外過程中的用途。例如,可以使患者的血液或其他體液在活體外與結(jié)合CXCR5的抗原結(jié)合蛋白接觸。該抗原結(jié)合蛋白可以與適當(dāng)?shù)牟蝗苄曰|(zhì)或固體支持材料結(jié)合。
[0124] 有利地,抗原結(jié)合蛋白以包含一種或多種附加組分(如生理學(xué)可接受的載體、賦形劑或稀釋劑)的組合物的形式施用。任選地,該組合物還包含一種或多種生理活性藥劑,例如,第二炎癥或免疫抑制物質(zhì)、抗血管生成物質(zhì)、
鎮(zhèn)痛物質(zhì)等等,本文中提供了其非窮盡的實(shí)例。在各種特定實(shí)施方式中,該組合物除EGFR結(jié)合抗原結(jié)合蛋白外,還包含1、2、3、4、5或6種生理活性藥劑。
[0125] 聯(lián)合療法
[0126] 在另一個(gè)方面,本公開提供了用CXCR5抑制性抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其他治療來治療受試者的方法。在一個(gè)實(shí)施方式中,這種聯(lián)合療法通過例如攻擊腫瘤中的多個(gè)位點(diǎn)或分子靶標(biāo)來實(shí)現(xiàn)協(xié)同效應(yīng)或累加效應(yīng)??梢耘c本發(fā)明結(jié)合使用的聯(lián)合療法的類型包括抑制或活化(在適宜情況下)單一疾病相關(guān)途徑中的多個(gè)
節(jié)點(diǎn)、靶細(xì)胞中的多個(gè)途徑或靶組織中的多個(gè)細(xì)胞類型。
[0127] 在另一個(gè)實(shí)施方式中,
聯(lián)合治療方法包括向受試者施用本文所述的2、3、4、5、6或更多種CXCR5激動(dòng)劑或拮抗劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中,該方法包括向受試者施用共同抑制或活化(直接或間接地)CXCR5介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的兩種或更多種治療。這些方法的實(shí)例包括使用兩種或更多種CXCR5抑制性抗原結(jié)合蛋白的組合、CXCR5抑制性抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其他具有抗癌性質(zhì)的治療部分(例如,細(xì)胞毒素劑和/或免疫調(diào)節(jié)劑)的組合,或CXCR5抑制性抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其他治療(例如,手術(shù)或放療)的組合。此外,可以將一種或多種抗CXCR5抗體或抗體衍生物與一種或多種分子或其他治療結(jié)合使用,其中所述其他分子和/或治療并不直接結(jié)合或影響CXCR5,但該組合有效地治療或預(yù)防所治療的病癥。在一個(gè)實(shí)施方式中,一種或多種分子和/或治療治療或預(yù)防在治療期間由一種或多種其他分子或治療引起的病癥,例如惡心、疲乏、脫發(fā)、惡病質(zhì)、
失眠等。在其中使用分子和/或其他治療的組合的每種情況中,單個(gè)分子和/或治療可以在有效的任意時(shí)間長度上以任意順序施用,例如同時(shí)、相繼或交替施用。在一個(gè)實(shí)施方式中,治療方法包括完成以第一分子或其他療法完成的第一
療程,接著開始第二療程。治療的第一療程結(jié)束和第二療程初始之間的時(shí)長可以是允許總療程有效的任意時(shí)長,例如數(shù)秒、數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)、數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月或甚至數(shù)年。
[0128] 在另一個(gè)實(shí)施方式中,該方法包括施用一種或多種本文所述的CXCR5拮抗劑和一種或多種其它治療(例如,治愈性或緩解性治療)。在方法包括向受試者施用超過一種治療的情況下,應(yīng)理解施用的順序、時(shí)機(jī)、次數(shù)、濃度和體積僅受到醫(yī)學(xué)需要和治療限度的限制,即,兩種治療可施用于受試者,例如,同時(shí)、相繼、交替或按照任何其它方案。
[0129] 實(shí)施例1
[0130] 本實(shí)施例描述了測定抗-CXCR5抗體與人CXCR5結(jié)合的EC50的細(xì)胞結(jié)合分析。本實(shí)施例顯示這些抗體在最大細(xì)胞結(jié)合和達(dá)到50%結(jié)合飽和(EC50)的濃度方面的結(jié)合特性。在本實(shí)施例中,CHO-CXCR5細(xì)胞使用非酶Cell?Dissociation?Buffer–基于PBS的(Life?Technologies#13151-014)從培養(yǎng)瓶脫離。細(xì)胞以1x?106細(xì)胞/ml重懸在FACS緩沖液(PBS中的2%胎牛血清)中且50μl(0.5x?105細(xì)胞)等分到96-孔板的孔中。鋪板的細(xì)胞離心并丟棄上清液。細(xì)胞一式三份地重懸在30μl的FACS緩沖液系列稀釋濃度的CXCR5IgG中。平板在4℃下孵育1hr且然后用FACS緩沖液洗滌2x。細(xì)胞重懸在50μl的FACS緩沖液中1:500稀釋的山羊抗-人IgG(γ-鏈特異性的)-PE偶聯(lián)二抗(Southern?Biotech#2040-09)中。平板在4℃下進(jìn)一步孵育30min且然后用FACS緩沖液洗滌1x。細(xì)胞重懸在最終體積30μl的FACS緩沖液中并使用Intellicyt?Flow?Cytometer分析。FL-2H通道中的中位熒光使用FlowJo
軟件確定且EC50值通過在GraphPad?Prism中對數(shù)據(jù)作圖和使用可變斜率非線性回歸分析來測定。結(jié)果顯示于表1中。
[0131] 表1.抗-CXCR5抗體對人CXCR5的EC50。N/A=很少可檢測的結(jié)合。
[0132]
[0133]
[0134]
[0135] 實(shí)施例2
[0136] 本實(shí)施例顯示測定抗-CXCR5抗體與鼠CXCR5結(jié)合的EC50的細(xì)胞結(jié)合分析。本實(shí)施例顯示這些抗體在最大細(xì)胞結(jié)合和達(dá)到50%結(jié)合飽和的濃度(EC50)方面的結(jié)合特性。在本實(shí)施例中,小鼠脾細(xì)胞從C57B1/6或無胸腺nu/nu小鼠
收獲。細(xì)胞在37℃下和5%CO2中在RPMI+10%FCS中用10微克/ml的LPS以2x106/ml培養(yǎng)最多4天。收獲細(xì)胞、洗滌和以1x?106細(xì)胞/ml重懸在FACS緩沖液(PBS中的2%胎牛血清)中且50μl(0.5x?105細(xì)胞)等分到96-孔板的孔中。鋪板的細(xì)胞離心且丟棄上清液。細(xì)胞一式三份重懸在含有系列稀釋濃度的CXCR5IgG的
30μl?FACS緩沖液中。平板在4℃下孵育1小時(shí)和然后用FACS緩沖液洗滌兩次。細(xì)胞重懸在在FACS緩沖液中以1:500稀釋的50μl山羊抗-人IgG(γ-鏈特異性的)-PE偶聯(lián)二抗
(SouthernBiotech#2040-09)中。細(xì)胞在4℃下再孵育30min且然后用FACS緩沖液洗滌1x。細(xì)胞重懸在30μl最終體積的FACS緩沖液中并使用Intellicyt?Flow?Cytometer分析。FL-2H通道中的中位熒光使用FlowJo軟件確定且EC50值通過在GraphPad?Prism中對數(shù)據(jù)作圖和使用可變斜率非線性回歸分析來確定。結(jié)果顯示于表2中。
[0137] 表2.抗-CXCR5抗體對鼠CXCR5的EC50。N/A=很少可檢測的結(jié)合。
[0138]
[0139]
[0140] 實(shí)施例3
[0141] 在本實(shí)施例中,CHO-CXCR5細(xì)胞使用非酶Cell?Dissociation?Buffer–基于PBS的6
(Life?Technologies#13151-014)從培養(yǎng)瓶脫離。細(xì)胞以1x?10 細(xì)胞/ml重懸在具有疊氮化鈉的FACS緩沖液(PBS中的2%胎牛血清)中且對于各抗體將800μl等分到管中。添加抗體到5μg/ml的終濃度并在室溫下孵育1h。樣品然后置于
冰上且在各個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)移除105μl等份并加入到96-孔板中的190μl?FACS緩沖液中和離心3min。丟棄上清液,細(xì)胞重懸于105μl的FACS緩沖液中,重復(fù)地等分(50μl)到含有150μl?FACS緩沖液的另一96-孔板中并在室溫下孵育。在收集所有時(shí)間點(diǎn)后,平板離心3min,丟棄上清液且細(xì)胞重懸于以1:500在FACS緩沖液中稀釋的50μl山羊抗-人IgG(γ-鏈特異性的)-PE偶聯(lián)二抗(Southern?Biotech#2040-
09)中。細(xì)胞在4℃下進(jìn)一步孵育30min且然后用FACS緩沖液洗滌1x。細(xì)胞重懸在30μl最終體積的FACS緩沖液中并使用Intellicyt?Flow?Cytometer分析。各種IgG1克隆隨時(shí)間的結(jié)合顯示于圖1中。
[0142] 實(shí)施例4
[0143] 本實(shí)施例顯示使用CHO-CXCR5細(xì)胞的鈣分析。CHO-CXCR5細(xì)胞(用人CXCR5基因轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞)用于鈣分析中。細(xì)胞(0.1x105)接種到384孔板(#781091,Greiner)每孔的20μl生長培養(yǎng)基中并孵育20小時(shí)。生長培養(yǎng)基是F-12K(#21127,Life?Technologies)加10%FBS。系列稀釋劑量的mAb(5μl)添加到20μl細(xì)胞中并在室溫下孵育20min。然后25μl的Calcium?4Assay試劑盒試劑(R8142,MolecularDevices),包括0.5mM丙磺舒(Sigma#P8761-25G),添加到與mAb預(yù)孵育的25μl細(xì)胞。在37℃、5%CO2下1h孵育接著在室溫下15分鐘孵育后,12.5μl的5X劑量的配體作為挑戰(zhàn)激動(dòng)劑在FlexStation3(Molecular?Devices)上檢測鈣反應(yīng)時(shí)添加到平板的各孔。分析中使用的配體的終濃度是9nM的CXCL13(#801-CX-025/CF,R&D)。表3中顯示的各mAb的IC50值通過Prism5計(jì)算。各IC50值代表平均值+S.D.(n=2)及具有相似結(jié)果的兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)之一。R&D?mAb(Cat#MAB190,R&D)用作對照抗-CXCR5抗體。抗體11A7是全人IgG1。
[0144] 表3:使用CHO-CXCR5細(xì)胞的鈣流分析中mAb的IC50[nM]
[0145]? R&DmAb 11A7
CXCL13 10 5
[0146] 實(shí)施例6
[0147] 本實(shí)施例顯示使用Sultan細(xì)胞的趨化分析。人B淋巴細(xì)胞SH-Sultan細(xì)胞系(CRL-1484,ATCC)用于趨化分析。趨化分析使用具有2個(gè)通過5-μm聚碳酸酯膜分隔的隔室的96-孔趨化室(ChemoTX;NeuroProbe,Gaithersburg,MD)建立。用于趨化性的分析緩沖液是RPMI加
0.5%FBS、0.5mM丙
酮酸鈉和0.5%BSA。系列稀釋濃度的mAb在室溫下與激活的T細(xì)胞(25μl分析緩沖液中的0.1x106細(xì)胞)預(yù)孵育20min。配體(CXCL13)以25nM加載到下室中的平板的孔中,而與mAb預(yù)孵育的細(xì)胞加載到膜的頂部上。在37℃,5%CO2下4h孵育后,下室中遷移的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到不透明的白色96-孔板并在室溫下用CellTiter?GLo(Cat#G7571,Promega)孵育
10min。由各孔中的細(xì)胞產(chǎn)生的發(fā)
光信號(hào)通過熒光板閱讀儀(FlexStation3,Molecular?Device)檢測。表4中所示的各mAb的IC50值通過Prism5計(jì)算。各IC50值表示平均值+S.D.(n=
3)及具有相似結(jié)果的兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)之一。在分析中用作對照的SAR113244抗體是表示為IgG1的Sanofi抗體。
[0148] 表4:使用HS-Sultan細(xì)胞的趨化分析中mAb的IC50[nM]
[0149]? SAR113244 11A7 R&D?mAb
CXCL13 4.7 4.8 4.1
[0151]
[0152]
[0153]
[0154]
[0155]
[0156]
[0157]
[0158]
[0159]
[0160]
[0161]