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一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿及其制備方法和應(yīng)用

閱讀：791發(fā)布：2020-05-12

專利匯可以提供一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿及其制備方法和應(yīng)用專利檢索，專利查詢，專利分析的服務(wù)。并且本 發(fā)明 提出了一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，所述糖漿至少包括甜菊葉提取物、營(yíng)養(yǎng)料提取物、 甜味劑 、 釀造 醋、果汁和增調(diào)劑，制備方法包括以下步驟：步驟(1)，將甜菊葉提取物、營(yíng)養(yǎng)料、甜味劑、釀造醋、果汁和增調(diào)劑混合，加 水 攪拌均勻使其充分溶解；步驟(2)，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，加水至規(guī)定量，文火熬制，邊熬邊攪拌，熬至相對(duì) 密度 為3-5，關(guān)火；步驟(3)，靜置24小時(shí)，灌裝，滅菌，即得。本發(fā)明活性提取物對(duì)化學(xué)性肝損傷和酒精性肝損傷具有明顯的肝臟保護(hù)作用。甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿降低了其糖漿的含糖量，其 甜菊糖 苷成分能夠明顯提高糖漿的 甜度 而不升高食用者的血糖含量，可供糖尿病患者、原發(fā)性 高血壓 患者、高血糖、高血脂患者食用。本發(fā)明解決了一般糖漿沒(méi)有保健價(jià)值的向題。，下面是一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿及其制備方法和應(yīng)用專利的具體信息內(nèi)容。

1.一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，其特征在于，所述糖漿至少包括甜菊葉提取物、營(yíng)養(yǎng)料提取物、甜味劑、釀造醋、果汁和增調(diào)劑，制備方法包括以下步驟：
步驟(1)，將甜菊葉提取物、營(yíng)養(yǎng)料、甜味劑、釀造醋、果汁和增調(diào)劑混合，加水攪拌均勻使其充分溶解；
步驟(2)，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，加水至規(guī)定量，文火熬制，邊熬邊攪拌，熬至相對(duì)密度為3-
5，關(guān)火；
步驟(3)，靜置24小時(shí)，灌裝，滅菌，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，其特征在于，所述甜菊葉提取物由以下方法制備：
S1.?將甜菊葉洗凈、剪碎，加入純水中浸泡，超聲波輔助提取30min，過(guò)濾，濾渣留用，濾液冷凍干燥，得到水提物凍干粉；
S2.?將步驟S1得到的濾渣裝入萃取釜中，打開(kāi)CO2鋼瓶，進(jìn)行超臨界流體萃取，萃取完成后打開(kāi)萃取釜閥門，收集萃取物，低溫干燥，得到超臨界流體萃取物；
萃取條件為：
萃取壓力：21-24MPa；萃取溫度：45-50℃；CO2流量：6-9L/h；萃取時(shí)間：2h；夾帶劑：水和乙醇，體積比為3:1；
S3.?將步驟S1得到的水提取凍干粉和步驟S2得到的超臨界流體萃取物混合均勻，得到甜菊葉提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，其特征在于，所述超聲波功率為1500-2000W，所述冷凍干燥條件為-15℃冷凍30min后降至-35℃冷凍10h，所述低溫干燥為-5℃干燥1h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，其特征在于，所述甜菊葉提取物、營(yíng)養(yǎng)料、甜味劑、釀造醋、果汁和增調(diào)劑的質(zhì)量比為100:（5-10）：2：（3-7）：（10-
20）：（2-5）。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，其特征在于，所述營(yíng)養(yǎng)料選自中藥提取物、維生素、動(dòng)物蛋白質(zhì)、植物蛋白質(zhì)、氨基酸中的一種或幾種混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，其特征在于，所述中藥提取物包括以下重量份的原料：甘草100-200份、甘蔗50-120份、鐵皮石斛10-20份。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，其特征在于，所述中藥提取物采用以下方法制備：
S1.?前處理：按比例稱取各原料藥材，洗凈，干燥，粉碎，得到中藥粉，備用；
S2.?提取：將中藥粉加入純水中，加入纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值和溫度，酶解0.5-1h后，滅酶，加入碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至中性，超聲波輔助提取1-3h后，離心，收集上清液，濃縮，冷凍干燥，得到中藥提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，其特征在于，所述pH值調(diào)節(jié)至5，所述溫度調(diào)節(jié)至45-60℃，所述滅酶方法為100℃加熱10min，所述超聲波功率為
1200-1500W，所述離心條件為4℃，10000-12000r/min離心5min，所述冷凍干燥條件為-10℃冷凍15min，-30℃冷凍12h，所述中藥粉與純水的質(zhì)量體積比為1：（5-10）；所述纖維素酶的添加量為1000-1200U/kg，所述濃縮方法為采用陶瓷膜超濾，陶瓷膜的孔徑為0.05-0.10μm，陶瓷膜超濾的操作條件為：跨膜壓差為0.17-0.30MPa，過(guò)濾溫度為52-57℃，膜面流速為7m/s-10m/s。
9.一種如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)權(quán)利要求所述方法制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿在制備防治肝損傷的藥物、保健食品或食品中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述應(yīng)用，其特征在于，所述肝損傷為化學(xué)性肝損傷或酒精性肝損傷。

說(shuō)明書全文

一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿及其制備方法和應(yīng)用

技術(shù)領(lǐng)域

[0001] 本發(fā)明涉及食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

[0002] 糖漿是通過(guò)煮或其他技術(shù)制成的、粘稠的、含高濃度的糖的溶液。制造糖漿的原材料可以是糖水、甘蔗汁、果汁或者其它植物汁等。由于糖漿含糖量非常高，在密封狀態(tài)下它不需要冷藏也可以保存比較長(zhǎng)的時(shí)間。糖漿可以用來(lái)調(diào)制飲料或者做甜食。
[0003] 本發(fā)明以糖漿為基礎(chǔ)，選取甜菊葉為原料，得到的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿食用后對(duì)肝損傷具有良好的保護(hù)作用，現(xiàn)有技術(shù)中制備了許多潤(rùn)肺糖漿、止咳糖漿、利咽糖漿等，但制備防治肝損傷的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿目前還未見(jiàn)報(bào)道。同時(shí)具有低脂低熱量的特點(diǎn)，混合營(yíng)養(yǎng)料如維生素、氨基酸、動(dòng)物蛋白質(zhì)、植物蛋白質(zhì)或中藥等，補(bǔ)充人體所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，制成健康和低熱量的糖漿，互補(bǔ)日常飲食不足，長(zhǎng)時(shí)間食用有利于人們的健康。
[0004] 甜菊屬菊科，又名甜葉菊、甜草，是一種多年生菊科野生草本植物。甜菊葉中含有大量的甜菊糖苷，其含量占10％左右，是一種天然的甜味劑，在國(guó)際上被授予“植物糖王”、“最佳天然甜味劑”等稱號(hào)。它可替代食糖和糖精等化學(xué)合成的各種甜味劑，廣泛應(yīng)用于食品、飲料、醫(yī)藥、日用化工、釀酒、化妝品等行業(yè)。用其制成的食品飲料長(zhǎng)期食用不會(huì)使人發(fā)胖，特別適宜肥胖病、糖尿病、高血壓、動(dòng)脈硬化、齲齒病等患者食用。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)甜菊葉的研究主要集中在甜菊糖苷的提取和應(yīng)用上，而對(duì)甜菊葉保護(hù)化學(xué)性損傷肝、防治肝損傷的能力研究，還未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

[0005] 本發(fā)明提供一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿及其制備方法，其目的在于，提供一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿，通過(guò)采用水浸泡和超臨界流體萃取制備其活性提取物，提出來(lái)的甜菊葉提取物，混合中藥提取物、維生素、動(dòng)物蛋白質(zhì)、植物蛋白質(zhì)、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)料，可用于制備防治多種類型肝保護(hù)保健品或食品，并且能夠明顯提高糖漿的甜度而不升高食用者的血糖含量，可供糖尿病患者、原發(fā)性高血壓患者、高血糖、高血脂患者食用。本發(fā)明解決了一般糖漿沒(méi)有保健價(jià)值的向題。
[0006] 本發(fā)明提供一種甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿的制備方法，所述糖漿至少包括甜菊葉提取物、營(yíng)養(yǎng)料提取物、甜味劑、釀造醋、果汁和增調(diào)劑，制備方法包括以下步驟：
[0007] 步驟(1)，將甜菊葉提取物、營(yíng)養(yǎng)料、甜味劑、釀造醋、果汁和增調(diào)劑混合，加水?dāng)嚢杈鶆蚴蛊涑浞秩芙猓?/div>
[0008] 步驟(2)，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，加水至規(guī)定量，文火熬制，邊熬邊攪拌，熬至相對(duì)密度為3-5，關(guān)火；
[0009] 步驟(3)，靜置24小時(shí)，灌裝，滅菌，即得。
[0010] 優(yōu)選地，在所述步驟(3)之后還包括：步驟(4a)，將所述甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿混合于純水、牛奶、水果汁、杏仁汁、豆?jié){、奶油、淡奶油、酸奶油、乳酪、酸奶、雪羔、醋、果醋、紅茶、奶茶、咖啡、可可粉飲料、中藥液、西藥液、天然果汁、人造果汁、阿薩姆紅茶、錫蘭紅茶、伯爵紅茶、立頓紅茶、普洱茶、紅茶粉、粗茶中的一種中并攪拌均勻。
[0011] 優(yōu)選地，在所述步驟(3)之后還包括：步驟(4b)，將所述糖漿混合于糖水果凍、牛奶果凍、杏仁果凍、豆?jié){果凍、紅茶果凍、奶茶果凍、咖啡果凍、可可粉果凍、中藥液果凍中的一種中并混合均勻。
[0012] 優(yōu)選地，在所述步驟(3)之后還包括：步驟(4c)，將所述糖漿混合于蛋糕、餅干、花生醬、果醬、醬酒中的一種中并混合均勻。
[0013] 優(yōu)選地，所述滅菌的方法為巴氏滅菌，具體為將糖漿加熱至62-65℃，保持30min。
[0014] 優(yōu)選地，所述甜味劑選自菊粉、羅漢果甜苷、赤藻糖醇、麥芽糖漿、雪蓮果糖漿、山梨糖醇中的一種或幾種混合；所述釀造醋選自糯米醋、黑醋、紅醋、柿子醋、蘋果醋、紅棗醋、玫瑰花醋、桃花醋、洛神花醋中的一種或幾種混合；所述果汁選自檸檬汁、橘子汁、蘋果汁、西瓜汁、葡萄汁、西柚汁、百香果汁、藍(lán)莓汁中的一種或幾種混合；所述增調(diào)劑選自阿拉伯膠、羅望子多糖膠、田菁膠、瓊脂、卡拉膠、黃原膠、β-環(huán)狀糊精和藻酸丙二醇酯中的一種或幾種。
[0015] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述甜菊葉提取物由以下方法制備：
[0016] S1.將甜菊葉洗凈、剪碎，加入純水中浸泡，超聲波輔助提取30min，過(guò)濾，濾渣留用，濾液冷凍干燥，得到水提物凍干粉；
[0017] S2.將步驟S1得到的濾渣裝入萃取釜中，打開(kāi)CO2鋼瓶，進(jìn)行超臨界流體萃取，萃取完成后打開(kāi)萃取釜閥門，收集萃取物，低溫干燥，得到超臨界流體萃取物；
[0018] 萃取條件為：
[0019] 萃取壓力：21-24MPa；萃取溫度：45-50℃；CO2流量：6-9L/h；萃取時(shí)間：2h；夾帶劑：水和乙醇，體積比為3:1；
[0020] S3.將步驟S1得到的水提取凍干粉和步驟S2得到的超臨界流體萃取物混合均勻，得到甜菊葉提取物。
[0021] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述超聲波功率為1500-2000W，所述冷凍干燥條件為-15℃冷凍30min后降至-35℃冷凍10h，所述低溫干燥為-5℃干燥1h。
[0022] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述甜菊葉提取物、營(yíng)養(yǎng)料、甜味劑、釀造醋、果汁和增調(diào)劑的質(zhì)量比為100:(5-10)：2：(3-7)：(10-20)：(2-5)。
[0023] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述營(yíng)養(yǎng)料選自中藥提取物、維生素、動(dòng)物蛋白質(zhì)、植物蛋白質(zhì)、氨基酸中的一種或幾種混合。
[0024] 優(yōu)選地，所述維生素選自維生素A、維生素C、維生素E、B族維生素、維生素D、維生素K中的一種或幾種混合。
[0025] 優(yōu)選地，所述氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸中的一種或幾種混合。
[0026] 優(yōu)選地，所述動(dòng)物蛋白質(zhì)選自乳清蛋白、膠原蛋白、牛肉粉、豬肉粉、雞肉粉中的一種或幾種混合。豬肉粉和雞肉粉為將新鮮豬肉或雞肉烘干至含水量小于5％后打粉得到。
[0027] 優(yōu)選地，所述植物蛋白質(zhì)選自豆蛋白質(zhì)、豌豆蛋白、玉米蛋白、水解小麥蛋白、花生蛋白中的一種或幾種混合。
[0028] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述中藥提取物包括以下重量份的原料：甘草100-200份、甘蔗50-120份、鐵皮石斛10-20份。
[0029] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述中藥提取物采用以下方法制備：
[0030] S1.前處理：按比例稱取各原料藥材，洗凈，干燥，粉碎，得到中藥粉，備用；
[0031] S2.提?。簩⒅兴幏奂尤爰兯校尤?a href='/zhuanli/list-23836-1.html' target='_blank'>纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值和溫度，酶解0.5-1h后，滅酶，加入碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至中性，超聲波輔助提取1-3h后，離心，收集上清液，濃縮，冷凍干燥，得到中藥提取物。
[0032] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述pH值調(diào)節(jié)至5，所述溫度調(diào)節(jié)至45-60℃，所述滅酶方法為100℃加熱10min，所述超聲波功率為1200-1500W，所述離心條件為4℃，10000-12000r/min離心5min，所述冷凍干燥條件為-10℃冷凍15min，-30℃冷凍12h，所述中藥粉與純水的質(zhì)量體積比為1：(5-10)；所述纖維素酶的添加量為1000-1200U/kg，所述濃縮方法為采用陶瓷膜超濾，陶瓷膜的孔徑為0.05-0.10μm，陶瓷膜超濾的操作條件為：跨膜壓差為
0.17-0.30MPa，過(guò)濾溫度為52-57℃，膜面流速為7m/s-10m/s。
[0033] 本發(fā)明進(jìn)一步保護(hù)一種上述甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿在制備防治肝損傷的保健食品或食品中的應(yīng)用。
[0034] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)，所述肝損傷為化學(xué)性肝損傷或酒精性肝損傷。
[0035] 優(yōu)選地，將保健食品制備成片劑、注射劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、湯劑、糖漿劑、合劑。
[0036] 本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明在甜菊葉原有化學(xué)成分和傳統(tǒng)功效的研究基礎(chǔ)上，同時(shí)采用水浸泡和超臨界流體萃取制備其活性提取物，和現(xiàn)有技術(shù)相比，提出來(lái)的甜菊葉提取物可以顯著降低CCl4或酒精致肝損傷的模型小鼠血清中的ALT、AST活性及肝組織MDA含量，增強(qiáng)肝臟SOD活性，表明該活性提取物對(duì)化學(xué)性肝損傷和酒精性肝損傷具有明顯的肝臟保護(hù)作用。因此，甜菊葉提取物有望開(kāi)發(fā)成為新一代安全有效，用于防治多種類型肝保護(hù)的藥物、保健品或食品。
[0037] 本發(fā)明新提供的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿降低了其糖漿的含糖量，其甜菊糖苷成分能夠明顯提高糖漿的甜度而不升高食用者的血糖含量，可供糖尿病患者、原發(fā)性高血壓患者、高血糖、高血脂患者食用，進(jìn)一步具有降血壓、降血糖、降血脂等功效，具有廣闊的應(yīng)用前景。附圖說(shuō)明
[0038] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0039] 圖1為為本發(fā)明測(cè)試?yán)?中各組小鼠不同時(shí)期血糖值對(duì)比圖。

具體實(shí)施方式

[0040] 下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0041] 下列實(shí)施例中未注明具體條件的試驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0042] 粉碎操作由濰坊拓日環(huán)?？萍加邢薰咎峁┑腡RM系列機(jī)械沖擊式粉碎機(jī)處理。干燥操作由常州步遠(yuǎn)干燥設(shè)備有限公司提供的SZG雙錐回轉(zhuǎn)真空干燥機(jī)處理。冷凍干燥操作由上海東富龍科技股份有限公司提供的真空冷凍干燥劑處理；離心操作由無(wú)錫市龍?zhí)┗C(jī)械設(shè)備有限公司提供的PZ平板直聯(lián)式離心機(jī)處理；超聲處理由山東百禾生物技術(shù)有限公司提供的超聲波提取罐處理。超臨界流體萃取操作由海安華安超臨界設(shè)備有限公司提供的超臨界流體萃取設(shè)備處理，濃縮操作由南京朋潤(rùn)膜科技有限公司提供的陶瓷膜設(shè)備處理。
[0043] 甜菊葉由濟(jì)寧奧星甜菊制品有限公司提供。
[0044] 纖維素酶，CAS號(hào)9012-54-8由上海阿拉丁生化科技股份有限公司提供。
[0045] 山梨糖醇，CAS號(hào)50-70-4；菊粉，CAS號(hào)9005-80-5；赤藻糖醇，CAS號(hào)149-32-6；麥芽糖漿，CAS號(hào)69-79-4。
[0046] 乳清蛋白，CAS號(hào)84082-51-9；膠原蛋白，CAS號(hào)9064-67-9；豌豆蛋白，CAS號(hào)222400-29-5；牛肉粉，CAS號(hào)68990-09-0；水解小麥蛋白，CAS號(hào)70084-87-6。
[0047] 阿拉伯膠，CAS號(hào)9000-01-5；羅望子多糖膠，CAS號(hào)39386-78-2；田菁膠，CAS號(hào)12493-90；瓊脂，CAS號(hào)9002-18-0；卡拉膠，CAS號(hào)11114-20-8。
[0048] 各種維生素、各種氨基酸由浙江康普達(dá)生物科技有限公司提供。
[0049] 各種釀造醋、各種果汁由福州康達(dá)食品有限公司提供。
[0050] 甘蔗，味甘性平，具有除熱止渴，和中，寬隔，行水。主治發(fā)熱口干，肺燥咳嗽，咽喉腫痛，心胸?zé)幔次竾I吐，妊娠水腫的功效。屬于藥食同源材料，由廣東省藥材公司中藥飲片廠提供。
[0051] 甘草，味甘性平，歸心、肺、脾、胃經(jīng)，具有補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥。用于脾胃虛弱，倦怠乏力，心悸氣短，咳嗽痰多，脘腹、四肢攣急疼痛，癰腫瘡毒，緩解藥物毒性、烈性的效果。屬于藥食同源材料，由廣東省藥材公司中藥飲片廠提供。
[0052] 實(shí)施例1甜菊葉提取物的制備
[0053] 一種甜菊葉提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0054] S1.純水提?。簩⑻鹁杖~洗凈、剪碎，加入純水中浸泡，超聲波輔助提取30min，超聲波功率為1500W，過(guò)濾，濾渣留用，濾液冷凍干燥，冷凍干燥條件為-15℃冷凍30min后降至-35℃冷凍10h，得到水提物凍干粉；
[0055] S2.超臨界流體萃取：將步驟S1得到的濾渣裝入萃取釜中，打開(kāi)CO2鋼瓶，進(jìn)行超臨界流體萃取，萃取完成后打開(kāi)萃取釜閥門，收集萃取物，低溫干燥，低溫干燥為-5℃干燥1h，得到超臨界流體萃取物；
[0056] 萃取條件為：
[0057] 萃取壓力：21MPa；萃取溫度：45℃；CO2流量：6L/h；萃取時(shí)間：2h；夾帶劑：水和乙醇，體積比為3:1；
[0058] S3.將步驟S1得到的水提取凍干粉和步驟S2得到的超臨界流體萃取物混合均勻，得到甜菊葉提取物，得率82％。
[0059] 實(shí)施例2甜菊葉提取物的制備
[0060] 一種甜菊葉提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0061] S1.純水提?。簩⑻鹁杖~洗凈、剪碎，加入純水中浸泡，超聲波輔助提取30min，超聲波功率為1500W，過(guò)濾，濾渣留用，濾液冷凍干燥，冷凍干燥條件為-15℃冷凍30min后降至-35℃冷凍10h，得到水提物凍干粉；
[0062] S2.超臨界流體萃取：將步驟S1得到的濾渣裝入萃取釜中，打開(kāi)CO2鋼瓶，進(jìn)行超臨界流體萃取，萃取完成后打開(kāi)萃取釜閥門，收集萃取物，低溫干燥，低溫干燥為-5℃干燥1h，得到超臨界流體萃取物；
[0063] 萃取條件為：
[0064] 萃取壓力：24MPa；萃取溫度：50℃；CO2流量：9L/h；萃取時(shí)間：2h；夾帶劑：水和乙醇，體積比為3:1；
[0065] S3.將步驟S1得到的水提取凍干粉和步驟S2得到的超臨界流體萃取物混合均勻，得到甜菊葉提取物，得率85％。
[0066] 實(shí)施例3甜菊葉提取物的制備
[0067] 一種甜菊葉提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0068] S1.純水提?。簩⑻鹁杖~洗凈、剪碎，加入純水中浸泡，超聲波輔助提取30min，超聲波功率為1700W，過(guò)濾，濾渣留用，濾液冷凍干燥，冷凍干燥條件為-15℃冷凍30min后降至-35℃冷凍10h，得到水提物凍干粉；
[0069] S2.超臨界流體萃?。簩⒉襟ES1得到的濾渣裝入萃取釜中，打開(kāi)CO2鋼瓶，進(jìn)行超臨界流體萃取，萃取完成后打開(kāi)萃取釜閥門，收集萃取物，低溫干燥，低溫干燥為-5℃干燥1h，得到超臨界流體萃取物；
[0070] 萃取條件為：
[0071] 萃取壓力：22MPa；萃取溫度：47℃；CO2流量：7L/h；萃取時(shí)間：2h；夾帶劑：水和乙醇，體積比為3:1；
[0072] S3.將步驟S1得到的水提取凍干粉和步驟S2得到的超臨界流體萃取物混合均勻，得到甜菊葉提取物，得率90％。
[0073] 對(duì)比例1
[0074] 與實(shí)施例3相比，實(shí)驗(yàn)工藝參數(shù)不同。
[0075] 一種甜菊葉提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0076] S1.純水提?。簩⑻鹁杖~洗凈、剪碎，加入純水中浸泡，超聲波輔助提取10min，超聲波功率為500W，過(guò)濾，濾渣留用，濾液冷凍干燥，冷凍干燥條件為-15℃冷凍10min后降至-35℃冷凍10h，得到水提物凍干粉；
[0077] S2.超臨界流體萃?。簩⒉襟ES1得到的濾渣裝入萃取釜中，打開(kāi)CO2鋼瓶，進(jìn)行超臨界流體萃取，萃取完成后打開(kāi)萃取釜閥門，收集萃取物，低溫干燥，低溫干燥為-5℃干燥30min，得到超臨界流體萃取物；
[0078] 萃取條件為：
[0079] 萃取壓力：12MPa；萃取溫度：27℃；CO2流量：3L/h；萃取時(shí)間：1h；夾帶劑：水和乙醇，體積比為1:1；
[0080] S3.將步驟S1得到的水提取凍干粉和步驟S2得到的超臨界流體萃取物混合均勻，得到甜菊葉提取物，得率20％。
[0081] 實(shí)施例4
[0082] 步驟(1)，將100g實(shí)施例1制備甜菊葉提取物、5g營(yíng)養(yǎng)料、2g菊粉、3g紅醋、10g檸檬汁和2g卡拉膠混合，加水?dāng)嚢杈鶆蚴蛊涑浞秩芙猓?/div>
[0083] 營(yíng)養(yǎng)料包括維生素A、乳清蛋白、豌豆蛋白、甘氨酸、丙氨酸，質(zhì)量比為1：50:30:1:2。
[0084] 步驟(2)，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，加水至規(guī)定量，文火熬制，邊熬邊攪拌，熬至相對(duì)密度為3，關(guān)火；
[0085] 步驟(3)，靜置24小時(shí)，灌裝，滅菌，滅菌的方法為巴氏滅菌，具體為將糖漿加熱至62℃，保持30min，即得。
[0086] 實(shí)施例5
[0087] 步驟(1)，將100g實(shí)施例2制備的甜菊葉提取物、10g營(yíng)養(yǎng)料、2g羅漢果甜苷、7g蘋果醋、20g蘋果汁和5g瓊脂混合，加水?dāng)嚢杈鶆蚴蛊涑浞秩芙猓?/div>
[0088] 營(yíng)養(yǎng)料包括維生素C、維生素E、膠原蛋白、牛肉粉、水解小麥蛋白、豌豆蛋白、酪氨酸、絲氨酸，質(zhì)量比為3:1:10:20:15:22:1:2。
[0089] 步驟(2)，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，加水至規(guī)定量，文火熬制，邊熬邊攪拌，熬至相對(duì)密度為5，關(guān)火；
[0090] 步驟(3)，靜置24小時(shí)，灌裝，滅菌，滅菌的方法為巴氏滅菌，具體為將糖漿加熱至65℃，保持30min，即得。
[0091] 步驟(4)，將所述甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿混合于牛奶中并攪拌均勻。
[0092] 實(shí)施例6
[0093] 步驟(1)，將100g實(shí)施例3制備甜菊葉提取物、6g營(yíng)養(yǎng)料、2g赤藻糖醇、4g柿子醋、12g葡萄汁和3g田菁膠混合，加水?dāng)嚢杈鶆蚴蛊涑浞秩芙猓?br>
[0094] 營(yíng)養(yǎng)料包括中藥提取物、維生素C、乳清蛋白、色氨酸、酪氨酸，質(zhì)量比為10:2:12:1:2。
[0095] 中藥提取物包括以下重量份的原料：甘草100份、甘蔗50份、鐵皮石斛10份。
[0096] 中藥提取物采用以下方法制備：
[0097] S1.前處理：按比例稱取各原料藥材，洗凈，干燥，粉碎，得到中藥粉，備用；
[0098] S2.提取：將10g中藥粉加50mL入純水中，加入纖維素酶，添加量為1000U/kg，用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5，調(diào)節(jié)溫度至45℃，酶解0.5h后，滅酶，滅酶方法為100℃加熱
10min，加入碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至中性，1200W超聲波輔助提取1h后，離心，離心條件為4℃，
10000r/min離心5min，收集上清液，濃縮，所述濃縮方法為采用陶瓷膜超濾，陶瓷膜的孔徑為0.10μm，陶瓷膜超濾的操作條件為：跨膜壓差為0.30MPa，過(guò)濾溫度為57℃，膜面流速為
10m/s，冷凍干燥，冷凍干燥條件為-10℃冷凍15min，-30℃冷凍12h，得到中藥提取物。
[0099] 步驟(2)，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，加水至規(guī)定量，文火熬制，邊熬邊攪拌，熬至相對(duì)密度為3.5，關(guān)火；
[0100] 步驟(3)，靜置24小時(shí)，灌裝，滅菌，滅菌的方法為巴氏滅菌，具體為將糖漿加熱至63℃，保持30min，即得。
[0101] 步驟(4)，將所述糖漿混合于紅茶果凍中并混合均勻。
[0102] 實(shí)施例7
[0103] 步驟(1)，將100g實(shí)施例3制備甜菊葉提取物、9g營(yíng)養(yǎng)料、2g麥芽糖漿、6g黑醋、18g百香果汁和4g羅望子多糖膠混合，加水?dāng)嚢杈鶆蚴蛊涑浞秩芙猓?/div>
[0104] 營(yíng)養(yǎng)料包括中藥提取物、B族維生素、乳清蛋白、豌豆蛋白、脯氨酸，質(zhì)量比為12:1:15:5:1:2，B族維生素包括維生素B1、維生素B12、葉酸，質(zhì)量比為5:1:1。
[0105] 中藥提取物包括以下重量份的原料：甘草200份、甘蔗120份、鐵皮石斛20份。
[0106] 中藥提取物采用以下方法制備：
[0107] S1.前處理：按比例稱取各原料藥材，洗凈，干燥，粉碎，得到中藥粉，備用；
[0108] S2.提?。簩?0g中藥粉加100mL入純水中，加入纖維素酶，添加量為1200U/kg，用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5，調(diào)節(jié)溫度至60℃，酶解1h后，滅酶，滅酶方法為100℃加熱
10min，加入碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至中性，1500W超聲波輔助提取3h后，離心，離心條件為4℃，
12000r/min離心5min，收集上清液，濃縮，所述濃縮方法為采用陶瓷膜超濾，陶瓷膜的孔徑為0.05μm，陶瓷膜超濾的操作條件為：跨膜壓差為0.17MPa，過(guò)濾溫度為52℃，膜面流速為
7m/sm/s，冷凍干燥，冷凍干燥條件為-10℃冷凍15min，-30℃冷凍12h，得到中藥提取物。
[0109] 步驟(2)，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，加水至規(guī)定量，文火熬制，邊熬邊攪拌，熬至相對(duì)密度為4.5，關(guān)火；
[0110] 步驟(3)，靜置24小時(shí)，灌裝，滅菌，滅菌的方法為巴氏滅菌，具體為將糖漿加熱至64℃，保持30min，即得。
[0111] 步驟(4)，將所述糖漿混合于花生醬中并混合均勻。
[0112] 實(shí)施例8
[0113] 步驟(1)，將100g實(shí)施例3制備甜菊葉提取物、7g營(yíng)養(yǎng)料、2g山梨糖醇、5g糯米醋、15g藍(lán)莓汁和3g阿拉伯膠混合，加水?dāng)嚢杈鶆蚴蛊涑浞秩芙猓?br>
[0114] 營(yíng)養(yǎng)料包括中藥提取物、維生素A、維生素C、乳清蛋白、半胱氨酸，質(zhì)量比為10:1:2:10:1。
[0115] 中藥提取物包括以下重量份的原料：甘草150份、甘蔗70份、鐵皮石斛15份。
[0116] 中藥提取物采用以下方法制備：
[0117] S1.前處理：按比例稱取各原料藥材，洗凈，干燥，粉碎，得到中藥粉，備用；
[0118] S2.提?。簩?0g中藥粉加70mL入純水中，加入纖維素酶，添加量為1100U/kg，用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5，調(diào)節(jié)溫度至55℃，酶解1h后，滅酶，滅酶方法為100℃加熱
10min，加入碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至中性，1350W超聲波輔助提取2h后，離心，離心條件為4℃，
11000r/min離心5min，收集上清液，濃縮，所述濃縮方法為采用陶瓷膜超濾，陶瓷膜的孔徑為0.07μm，陶瓷膜超濾的操作條件為：跨膜壓差為0.22MPa，過(guò)濾溫度為55℃，膜面流速為
8m/s，冷凍干燥，冷凍干燥條件為-10℃冷凍15min，-30℃冷凍12h，得到中藥提取物。
[0119] 步驟(2)，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，加水至規(guī)定量，文火熬制，邊熬邊攪拌，熬至相對(duì)密度為4，關(guān)火；
[0120] 步驟(3)，靜置24小時(shí)，灌裝，滅菌，滅菌的方法為巴氏滅菌，具體為將糖漿加熱至63℃，保持30min，即得。
[0121] 步驟(4)，將所述糖漿與輔料混合均勻，壓片制得甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿片。
[0122] 對(duì)比例2
[0123] 與實(shí)施例8相比，實(shí)施例3制備的甜菊葉提取物由對(duì)比例1制備的甜菊葉提取物替代，其他原料和制備方法與實(shí)施例8相同。
[0124] 對(duì)比例3
[0125] 與實(shí)施例8相比，實(shí)施例3制備的甜菊葉提取物由普通甜菊葉提取物替代，其他原料和制備方法與實(shí)施例8相同。普通甜菊葉提取物由陜西富恒生物科技有限公司提供。
[0126] 對(duì)比例4
[0127] 與實(shí)施例8相比，營(yíng)養(yǎng)料中未添加中藥提取物，其他原料和制備方法與實(shí)施例8相同。
[0128] 營(yíng)養(yǎng)料包括維生素A、維生素C、乳清蛋白、半胱氨酸，質(zhì)量比為1:2:20:1。
[0129] 對(duì)比例5
[0130] 與實(shí)施例8相比，營(yíng)養(yǎng)料中未添加乳清蛋白，其他原料和制備方法與實(shí)施例8相同。
[0131] 營(yíng)養(yǎng)料選自中藥提取物、維生素A、維生素C、半胱氨酸，質(zhì)量比為20:1:2:1。
[0132] 測(cè)試?yán)?抗肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究
[0133] 一、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑
[0134] 1、實(shí)驗(yàn)材料
[0135] 甜菊葉采自江蘇省東臺(tái)市新曹農(nóng)場(chǎng)，按實(shí)施例1-3和對(duì)比例1方法制備得到甜菊葉提取物。甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿按照實(shí)施例4-8和對(duì)比例2-5方法制備得到的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿。
[0136] 2、實(shí)驗(yàn)儀器
[0137] TG16-WS臺(tái)式高速離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋，天津泰斯特儀器有限公司；連續(xù)光譜掃描式酶標(biāo)儀SpectraMaxPlus384美國(guó)分子生物儀器公司。
[0138] 3、實(shí)驗(yàn)試劑
[0139] CCl4，無(wú)水乙醇，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；食用豆油，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒以及SOD試劑盒、MDA試劑盒，考馬斯亮藍(lán)試劑盒，南京建成生物工程研究所。
[0140] 4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0141] 清潔級(jí)雄性ICR小鼠，體重(20±2)g。
[0142] 二、實(shí)驗(yàn)方法
[0143] 1、對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷的影響
[0144] 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，期間自由進(jìn)食飲水。一周之后，按照體重隨機(jī)分為14組，每組10只，分別為：正常對(duì)照組，CCl4模型組，實(shí)施例1-3制備的甜菊葉提取物低劑量組(50mg/kg/d)，中劑量組(100mg/kg/d)，高劑量組(200mg/kg/d)，對(duì)比例1制備的甜菊葉提取物組(100mg/kg/d)，實(shí)施例4制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，實(shí)施例5制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，實(shí)施例6制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，實(shí)施例7制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，實(shí)施例8制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，對(duì)比例2制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，對(duì)比例3制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，對(duì)比例4制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，對(duì)比例5制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，聯(lián)苯雙酯組(陽(yáng)性對(duì)照組，150mg/kg/d)，所有藥物均用生理鹽水溶解，超聲助溶。除正常對(duì)照組和模型組按體重灌胃等量的生理鹽水外，其他各給藥組均按體重灌胃給予相應(yīng)藥物。每天灌胃1次，連續(xù)給藥7天。于給藥第6天晚上禁食不禁水12h，次日正常給藥1h后，除正常對(duì)照組外，其余各組腹腔注射10％的CCl4豆油溶液，造成急性CCl4肝損傷。6h后眼球取血，血清于4200rpm離心10min，取上清液于4℃冰箱中保存。取血后，立即勁椎脫臼處死小鼠，解剖取肝臟和脾，稱重后，用生理鹽水清洗掉肝臟表面血跡，拭去表面生理鹽水后，部分肝臟用10％的福爾馬林浸泡固定，另一部分用錫紙包好后，立即放入-80℃冰箱中保存。
[0145] 血清學(xué)及肝臟指標(biāo)檢測(cè)：離心完的血清分別按照ALT，AST試劑盒的說(shuō)明書于96孔板中加樣，酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，計(jì)算出小鼠血清中ALT，AST的活性。
[0146] 稱取一定重量的凍存肝臟，按照重量體積比1:9加冷生理鹽水進(jìn)行勻漿，于冷凍離心機(jī)中4200rpm離心10min，取上清液得10％的肝勻漿，制備肝勻漿均在低溫條件下操作。取少量10％的肝勻漿，用冷生理鹽水稀釋成1％的肝勻漿。
[0147] 按照考馬斯亮藍(lán)試劑盒和SOD，MDA試劑盒的說(shuō)明分別于96孔板中加樣，酶標(biāo)儀測(cè)定各自的OD值，分別計(jì)算出1％肝勻漿中肝蛋白濃度和肝臟中SOD的活性以及10％肝勻漿中MDA的濃度。
[0148] 2、對(duì)酒精致小鼠急性肝損傷的影響
[0149] 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，期間自由進(jìn)食飲水。一周之后，按照體重隨機(jī)分為14組，每組10只，分別為：正常對(duì)照組，酒精模型組，實(shí)施例1-3制備的甜菊葉提取物低劑量組(50mg/kg/d)，中劑量組(100mg/kg/d)，高劑量組(200mg/kg/d)，對(duì)比例1制備的甜菊葉提取物組(100mg/kg/d)，實(shí)施例4制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，實(shí)施例5制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，實(shí)施例6制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，實(shí)施例7制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，實(shí)施例8制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，對(duì)比例2制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，對(duì)比例3制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，對(duì)比例4制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，對(duì)比例5制備的甜菊葉混合營(yíng)養(yǎng)料糖漿組(100mg/kg/d)，聯(lián)苯雙酯組(陽(yáng)性對(duì)照組，150mg/kg/d)，所有藥物均用生理鹽水溶解，超聲助溶。除空白對(duì)照組和模型組按體重灌胃等量的生理鹽水外，其他各給藥組均按體重灌胃給予相應(yīng)藥物。每天灌胃1次，連續(xù)給藥7天。于給藥第6天晚上禁食不禁水12h，次日正常給藥1h后，除空白對(duì)照組外，其余各組按按12ml/kg劑量灌胃50％乙醇造成急性酒精肝損傷。12h后，眼球取血，血清于4200rpm離心10min，取上清液于4℃冰箱中保存。取血后，立即勁椎脫臼處死小鼠，解剖取肝臟和脾，稱重后，用生理鹽水清洗掉肝臟表面血跡，拭去表面生理鹽水后，部分肝臟用10％的福爾馬林浸泡固定，另一部分用錫紙包好后，立即放入-80℃冰箱中保存。
[0150] 血清學(xué)及肝臟指標(biāo)檢測(cè)：離心完的血清分別按照ALT，AST試劑盒的說(shuō)明書于96孔板中加樣，酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，計(jì)算出小鼠血清中ALT，AST的活性。
[0151] 稱取一定重量的凍存肝臟，按照重量體積比1:9加冷生理鹽水進(jìn)行勻漿，于冷凍離心機(jī)中4200rpm離心10min，取上清液得10％的肝勻漿，制備肝勻漿均在低溫條件下操作。取少量10％的肝勻漿，用冷生理鹽水稀釋成1％的肝勻漿。
[0152] 按照考馬斯亮藍(lán)試劑盒和SOD，MDA試劑盒的說(shuō)明分別于96孔板中加樣，酶標(biāo)儀測(cè)定各自的OD值，分別計(jì)算出1％肝勻漿中肝蛋白濃度和肝臟中SOD的活性以及10％肝勻漿中MDA的濃度。
[0153] 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0154] 1、對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷的影響
[0155] 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)CCl4注射后，模型組小鼠ALT和AST明顯升高，高于正常對(duì)照組，提示造模成功(p<0.05)，高劑量、中劑量組，以及實(shí)施例4-6給藥組與模型組比較，均能降低血清中增加的ALT和AST活性，具有顯著性差異(p<0.05)，實(shí)施例7-8具有極顯著的差異(p<0.01)；同時(shí)，甜菊葉提取物高、中劑量組以及實(shí)施例4-6組可以有效降低肝組織MDA水平，升高肝組織SOD水平，具有顯著性差異(p<0.05)，實(shí)施例7-8具有極顯著的差異(p<0.01)，對(duì)比例1-5組具有降低趨勢(shì)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。具體結(jié)果見(jiàn)表1。
[0156] 表1甜菊葉提取物對(duì)CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST及肝臟SOD、MDA的影響[0157]
[0158]
[0159] 注釋：#，給藥組vs模型組，p<0.05；﹡，給藥組vs模型組，p<0.05，**，給藥組vs模型組，p<0.01。
[0160] 2、對(duì)酒精致小鼠急性肝損傷的影響
[0161] 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)50％酒精灌胃后，模型組小鼠ALT和AST明顯升高，高于正常對(duì)照組，提示造模成功(p<0.05)，高劑量和中劑量組，以及實(shí)施例4-6給藥組與模型組比較，均能降低血清中增加的ALT和AST活性，具有顯著性差異(p<0.05)，實(shí)施例7-8具有極顯著的差異(p<0.01)；同時(shí)，甜菊葉提取物高、中劑量組以及實(shí)施例4-6組可以有效降低肝組織MDA水平，升高肝組織SOD水平，具有顯著性差異(p<0.05)，實(shí)施例7-8具有極顯著的差異(p<0.01)，對(duì)比例1-5組具有降低趨勢(shì)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。具體結(jié)果見(jiàn)表2。
[0162] 表2甜菊葉提取物對(duì)酒精致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST及肝臟SOD、MDA的影響[0163]
[0164]
[0165] 注釋：#，給藥組vs模型組，p<0.05；﹡，給藥組vs模型組，p<0.05，**，給藥組vs模型組，p<0.01。
[0166] 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0167] 本發(fā)明實(shí)施例1-3制備的甜菊葉提取物、實(shí)施例4-8制備的甜菊葉糖漿可以顯著降低CCl4或酒精致肝損傷的模型小鼠血清中的ALT、AST活性及肝組織MDA含量，增強(qiáng)肝臟SOD活性，表明該活性提取物對(duì)化學(xué)性肝損傷和酒精性肝損傷具有明顯的肝臟保護(hù)作用。
[0168] 對(duì)比例1制備工藝以本發(fā)明實(shí)施例3不同，制得的甜菊葉提取物得率較低，且保護(hù)肝臟的活性較差，雖有恢復(fù)肝臟各項(xiàng)指標(biāo)趨勢(shì)，但不明顯。
[0169] 對(duì)比例2采用對(duì)比例1制備的甜菊葉提取物制備得到的甜菊葉糖漿，其保護(hù)肝臟的活性也較差。
[0170] 對(duì)比例3與實(shí)施例8相比，采用普通甜菊葉提取物替代實(shí)施例3制備的甜菊葉提取物，幾乎沒(méi)有保護(hù)肝臟的活性。
[0171] 對(duì)比例4和5與實(shí)施例8相比，分別未添加中藥提取物和乳清蛋白，其保護(hù)肝臟的活性較差，雖有恢復(fù)肝臟各項(xiàng)指標(biāo)趨勢(shì)，但不明顯，與實(shí)施例6相比，明顯活性大幅度下降。因此，中藥提取物和乳清蛋白兩者具有協(xié)同增效的作用。
[0172] 測(cè)試?yán)?甜菊葉提取物的降糖實(shí)驗(yàn)
[0173] 1材料與方法
[0174] 1.1材料
[0175] SPF級(jí)KM小鼠，雄性，(22±2)g，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)試驗(yàn)動(dòng)物有限公司，試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(湘)2018-0020，普通甜菊葉提取物由陜西富恒生物科技有限公司提供。
[0176] 1.2實(shí)驗(yàn)方法
[0177] 1.2.1高血糖小鼠模型的方法建立
[0178] 將SPF級(jí)KM雄性小鼠，22g左右，自由飲食，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d。禁食16h，測(cè)其空腹血糖值和體重，按照體重值確定所需鏈脲佐菌素量，配置溶液，腹腔注射50mg·kg-1，連續(xù)注射5d，每天1次。最后一次注射結(jié)束后，禁食16h，測(cè)定血糖值，血糖值高于11.1mmoL·L-1視為造模成功；同時(shí)觀察記錄小鼠的體重、飲水、飲食等生理變化。
[0179] 1.2.2動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0180] 以建立的高血糖小鼠模型方法為基礎(chǔ)，將42只SPF級(jí)KM小鼠在22-25℃條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，稱重，隨機(jī)取6只作為正常組，其余小鼠進(jìn)行造模，將36只造模成功小鼠隨機(jī)分為模型組、甜菊葉提取物高劑量組(劑量為700mg·kg-1·d-1)、甜菊葉提取物中劑量組(劑量為350mg·kg-1·d-1)、甜菊葉提取物低劑量組(劑量為175mg·kg-1·d-1)、普通甜菊葉提取物高劑量組、鹽酸二甲雙胍片組，每組6只。正常組與模型組均灌喂等體積水，灌喂體積為10mL·kg-1·d-1，連續(xù)灌喂28d，在7、14、21、28d分別測(cè)定各組小鼠血糖值。
[0181] 1.2.3數(shù)據(jù)處理采用SPSS?22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±sd)”表示。采用單因素方差分析(ONE-WAY?ANOVA)，Duncan多重比較分析組間差異性，p＜0.05表示差異顯著，p＜0.01表示差異極顯著。相關(guān)性分析采用Pearson’s法。
[0182] 2.對(duì)高血糖小鼠血糖的影響
[0183] 結(jié)果如圖1，注：與正常組比較，**表示有顯著性差異(p＜0.01)；與模型組比較，#表示有顯著性差異(p＜0.05)，##表示有極顯著性差異(p＜0.01)。
[0184] 由圖1可知，與正常組相比，造模前的各組小鼠血糖值均處于正常水平，造模后的各組小鼠空腹血糖含量極顯著升高(P＜0.01)，血糖值均高于11.1mmoL·L-1，說(shuō)明高血糖模型造模成功。灌喂28d后，與模型組比較，甜菊葉提取物高、中劑量組和鹽酸二甲雙胍組的血糖水平極顯著降低(P＜0.01)，低劑量組有顯著降低(P＜0.05)，由此說(shuō)明甜菊糖漿具有顯著的降血糖效果。普通甜菊糖漿組小鼠血糖也稍有下降，與模型組差異不顯著，說(shuō)明普通甜菊糖漿不具有顯著的降血糖效果。
[0185] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明在甜菊葉原有化學(xué)成分和傳統(tǒng)功效的研究基礎(chǔ)上，同時(shí)采用水浸泡和超臨界流體萃取制備其活性提取物，和現(xiàn)有技術(shù)相比，提出來(lái)的甜菊葉提取物可以顯著降低CCl4或酒精致肝損傷的模型小鼠血清中的ALT、AST活性及肝組織MDA含量，增強(qiáng)肝臟SOD活性，表明該活性提取物對(duì)化學(xué)性肝損傷和酒精性肝損傷具有明顯的肝臟保護(hù)作用。因此，甜菊葉提取物有望開(kāi)發(fā)成為新一代安全有效，用于防治多種類型肝保護(hù)的藥物、保健品或食品。
[0186] 本發(fā)明新提供的甜菊葉糖漿降低了其糖漿的含糖量，其甜菊糖苷成分能夠明顯提高糖漿的甜度而不升高食用者的血糖含量，可供糖尿病患者、原發(fā)性高血壓患者、高血糖、高血脂患者食用，進(jìn)一步具有降血壓、降血糖、降血脂等功效，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0187] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
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