技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本
發(fā)明屬于生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑及其應(yīng)用。
背景技術(shù)
[0002] 近年來，重金屬污染已成為全球性的環(huán)境問題。2014年《全國
土壤污染狀況調(diào)查
公報》顯示，鎘(Cd)的點位超標(biāo)率居重金屬污染物之首，引起人們的廣泛關(guān)注。由于采礦
冶煉、農(nóng)業(yè)污
水灌溉及
農(nóng)藥化肥施用，大量的鎘被釋放到土壤中，加劇了土壤鎘污染問題。一方面，鎘會破壞
植物的葉綠體結(jié)構(gòu)，造成光合作用受阻，降低植物的代謝，嚴(yán)重抑制植物，特別是葉菜類蔬菜的生長。另一方面，鎘的
水溶性高，蔬菜莖葉可食用部分容易累積人為進(jìn)入
土壤耕作層的鎘，進(jìn)而通過食物鏈傳遞到動物及人體內(nèi)，嚴(yán)重威脅人類健康與生存。因此，如何緩解或抑制植物受鎘毒害，減少植物體內(nèi)吸收傳輸鎘成為目前迫切要解決的課題。
[0003] 葉菜類蔬菜在我國有廣泛種植，其在從土壤中汲取大量水分的同時易富集土壤中的鎘，且其對土壤中鎘造成的生理脅迫十分敏感，因此，如何緩解葉菜類蔬菜的鎘脅迫，降低其可食用部分的鎘積累具有十分重要的意義。目前微
生物修復(fù)在Cd污染的治理方面具有很大的潛在應(yīng)用前景，成為目前重金屬污染治理的重要研究方向?？莶菅堪麠U菌(Bacillus?subtilis)是一種廣泛分布的需
氧性細(xì)菌，其在防治植物病蟲害方面發(fā)揮了多種有益作用。研究顯示，枯草芽孢桿菌作為優(yōu)勢種的
微生物肥料，可以降低Cd的酸提取態(tài)，使有機(jī)結(jié)合態(tài)增加，從而減少Cd的遷移、轉(zhuǎn)化，減少重金屬被植物吸收轉(zhuǎn)化進(jìn)而進(jìn)入食物鏈的生態(tài)
風(fēng)險，而且在修復(fù)Cd污染的土壤-微生物-植物
生態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。
[0004] 緩解植物鎘脅迫的方法有許多，而原位外源添加劑則由于其應(yīng)用性高而被廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，硒(Se)可通過抑制自由基的形成、與鎘離子形成螯合蛋白、抑制植物對鎘的吸收途徑減輕鎘對植物的毒性效應(yīng)，并抑制鎘向地上部分的運(yùn)輸。同時，Se也是植物生長的有益元素和人體必需的微量元素，還能夠促進(jìn)植物的生長，提升可食用植物的品質(zhì)。目前應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的硒主要有硒酸鈉、亞硒酸鈉、硒礦粉等無機(jī)硒類和
氨基酸硒肥、腐植酸硒肥等有機(jī)硒類，二者雖然能夠提高食品中硒含量，但都存在成本較高、肥效流失嚴(yán)重等問題。尤其是無機(jī)硒類大部分具有較強(qiáng)的毒性，有益濃度范圍窄，易對土壤及植物本身造成二次毒害。
[0005] 納米硒是近年來納米科技的新產(chǎn)品，其最大的特點是安全性高，
穩(wěn)定性高，易于被植物體吸收和利用。但檢索發(fā)現(xiàn)利用可以在土壤中固氮的枯草芽孢桿菌168制備的生物納米零價硒與枯草芽孢桿菌按比例水溶稀釋制備的緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑及其應(yīng)用還未見報道。
發(fā)明內(nèi)容
[0006] 針對土壤鎘污染及硒應(yīng)用現(xiàn)狀，本發(fā)明要解決的問題是提供一種緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑及其應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明所述的緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑，其特征是：
[0008] 所述生物制劑由采用枯草芽孢桿菌168生物法制得的納米硒與枯草芽孢桿活菌數(shù)量≥1×109/g的枯草芽孢桿菌在水中均勻混合制成，其混合比例是：每15L水中混有300mL～700mL的濃度為200～400mg?L-1納米硒水溶液和1kg～4kg枯草芽孢桿菌。
[0009] 上述緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑，進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式是：所述納米硒與枯草芽孢桿混合比例是：每15L水中混有500mL的濃度為300mg?L-1納米硒水溶液和4kg枯草芽孢桿菌。
[0010] 其中，所述采用枯草芽孢桿菌168生物法制得的納米硒以如下步驟制備：
[0011] (1)在滅菌后的添加了50～600mmol?L-1亞硒酸鈉的LB培養(yǎng)基中，按體積比的量接種4～10％的枯草芽孢桿菌168活菌體，然后將培養(yǎng)瓶置30±2℃的搖瓶
培養(yǎng)箱中在150-300轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行好氧培養(yǎng)0.5～7d，之后以4000g～4500g離心10～20分鐘，收集沉淀即獲得枯草芽孢桿菌與其代謝產(chǎn)物納米硒的混合物；
[0012] (2)用0.9％NaCl溶液洗滌所得的沉淀，然后加入液氮并杵打使沉淀
破碎；再以100-300W條件超聲處理5～10分鐘使沉淀混合物粒徑達(dá)到200nm以下，用Tris-HCl緩沖液以
10000g，5min條件連續(xù)離心洗滌破碎產(chǎn)物2-3次；將離心洗滌收集到的產(chǎn)物懸浮于去離子水中，即得到含有納米硒和菌細(xì)胞碎片的懸浮液；
[0013] (3)將步驟(2)制得的懸浮液轉(zhuǎn)移到試管中，按體積比1:2～2:1加入正辛醇混合；在4℃靜置沉淀14～24h；液體出現(xiàn)分層：上層是正辛醇，兩相界面是菌細(xì)胞碎片，下層是納米硒顆粒懸濁液；分離出下層的納米硒顆粒懸濁液，3500g離心10min，沉淀物用氯仿、
乙醇和蒸餾水分別洗滌至完全去除菌細(xì)胞碎片后得到納米硒；將清潔后的納米硒粒子在去離子水中定量為200-400mg/L的濃度制得納米硒水溶液，儲存在4℃?zhèn)溆谩?br>
[0014] 上述采用枯草芽孢桿菌168生物法制備納米硒的方法中，優(yōu)選的實施方式是：
[0015] 步驟(1)中所述添加亞硒酸鈉的濃度是300～500mmol?L-1。
[0016] 步驟(1)中所述搖瓶培養(yǎng)的條件是在30℃，200-250轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行好氧培養(yǎng)0.7～2d。
[0017] 步驟(2)中所述超聲條件為100-200W處理5分鐘。
[0018] 步驟(3)中所述懸濁液與正辛醇的體積比是2:1。
[0019] 本發(fā)明所述緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑在緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫中的應(yīng)用。
[0020] 其中：所述葉菜類蔬菜優(yōu)選是小白菜或油菜；所述生物制劑在緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫中的應(yīng)用方法是：選擇一
塊種植小白菜或油菜的菜地，分為3片區(qū)域先預(yù)處理土壤，使土壤中重金屬鎘濃度分別為0、10mg/kg、20mg/kg，放置兩周，期間保持土壤濕度恒定；然后以每0.1平方米面積種植16～20棵菜的比例種植小白菜，一周后間苗至每0.1平方米面積12棵；期間準(zhǔn)備上述所述的生物制劑在出苗后7-12天進(jìn)行第一次葉面噴施，在生長期第15-20天進(jìn)行第二次葉面噴施，在
收獲前5-10天第三次葉面噴施；將收獲的小白菜或油菜用蒸餾水清洗干凈根部及
葉片，檢測根部及葉片的鎘含量以評價所述生物制劑緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的狀況。
[0021] 上述應(yīng)用中：所述生物制劑組分中納米硒與枯草芽孢桿混合比例優(yōu)選是：每15L水中混有500mL的濃度為300mg?L-1納米硒水溶液納米硒和4kg活菌數(shù)量≥1×109/g的枯草芽孢桿菌；所述土壤中重金屬鎘濃度優(yōu)選設(shè)置為20mg/kg。
[0022] 本發(fā)明公開了一種緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑，其主要組分是利用可以在土壤中固氮的枯草芽孢桿菌168制備的生物納米零價硒，生物功能性強(qiáng)且環(huán)境友好性高，同時配合使用了一定量的枯草芽孢桿菌，可以更好的適應(yīng)葉菜類蔬菜生長的需要，在緩解鎘脅迫的同時提高了植物品質(zhì)、產(chǎn)量和對病蟲害的抗性。
[0023] 本發(fā)明所述的生物制劑在緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的應(yīng)用中，整個過程只需葉面噴施，可實現(xiàn)Cd(II)脅迫的高效緩解。本發(fā)明的特色在于該生物制劑在葉面噴施時既可以為植物補(bǔ)充硒元素，防治病蟲害又可以顯著的抑制鎘從地下部分到地上部分的遷移，而且在修復(fù)Cd污染的土壤-微生物-植物生態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。
[0024] 本發(fā)明基于生物制劑優(yōu)勢，環(huán)境友好度高，不易造成土壤二次污染與植物的二次傷害。由于生物法制得的納米硒價態(tài)與粒徑都發(fā)生了極大的變化，其物理化學(xué)性質(zhì)也相應(yīng)地被改變。也使得本發(fā)明的緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑及其應(yīng)用極大的擴(kuò)增了現(xiàn)行農(nóng)業(yè)中對硒的應(yīng)用及硒添加的范圍，預(yù)示在農(nóng)業(yè)應(yīng)用方面有較大的應(yīng)用前景。
[0025] 綜上，本發(fā)明的突出優(yōu)點和效果是：
[0026] 1、生物功能性強(qiáng)。本發(fā)明中含的生物制納米硒可以促進(jìn)作物的生長發(fā)育并提高其產(chǎn)
質(zhì)量。在低濃度施用時可以很好地緩解鎘造成的生理抑制，而高濃度施用時也不會造成植物生長的二次毒害。
[0027] 2、防治病蟲害。本發(fā)明中含有枯草芽孢桿菌，可以在改善土壤微生物環(huán)境的同時有效防治病蟲害。
[0028] 3、抑制鎘傳輸能
力強(qiáng)。本發(fā)明提供的生物菌劑可以很好地抑制鎘從地下部分到地上部分的傳輸，極大地降低鎘的遷移率。從而減少葉菜類蔬菜如小白菜或油菜可食用部分鎘的含量，降低人體食用風(fēng)險。同時可以降低土壤內(nèi)酸提取態(tài)鎘的含量，改善土壤重金屬污染。
[0029] 4、環(huán)境友好度高。本發(fā)明所使用的枯草芽孢桿菌已被證明可以安全引入生態(tài)環(huán)境中，而生物法制得的納米硒可以避免無機(jī)硒直接施用造成的土壤二次污染。
附圖說明
[0030] 圖1本發(fā)明所述生物法制得的納米硒掃描
電子顯微鏡成像(上圖)與
X射線衍射圖譜(下圖)。
[0031] 圖2本發(fā)明所述生物制劑掃描電子顯微鏡(SEM)特寫圖片。
[0032] 圖3不同濃度納米硒的本發(fā)明所述生物制劑對小白菜
幼苗生長的影響。
[0033] 圖4不同濃度納米硒的本發(fā)明所述生物制劑對鎘脅迫下油菜生長的影響。
[0034] 其中：Control為空白對照，Cd組為
營養(yǎng)液中鎘濃度50μmol?L-1，Se1、Se2和Se3組分別為在Cd組
基礎(chǔ)上(即營養(yǎng)液中鎘濃度為50μmol?L-1)葉施生物制劑，三組施用的生物制劑組分量分別是稀釋后含26.7mg/L枯草芽孢桿菌的5、10、20mg/L納米硒。
[0035] 圖5不同濃度本發(fā)明所述含納米硒的生物制劑與含亞硒酸鈉的生物制劑的添加對鎘脅迫下小白菜生長的影響。
[0036] 其中：A為不同濃度生物制劑添加對20mg/kg鎘濃度下葉片中鎘含量的影響；B為不同濃度生物制劑添加對20mg/kg鎘濃度下根中鎘含量的影響。
[0037] 圖6不同濃度本發(fā)明所述含納米硒的生物制劑與含亞硒酸鈉的生物制劑的添加對鎘脅迫下油菜生長的影響。
[0038] 其中，A為不同濃度生物制劑添加對50μM鎘濃度下葉片中鎘含量的影響；B為不同濃度生物制劑添加對50μM鎘濃度下根中鎘含量的影響。Control為空白對照，Cd組為營養(yǎng)液中鎘濃度50μmol?L-1，Se1、Se2和Se3組分別為在Cd組基礎(chǔ)上(即營養(yǎng)液中鎘濃度為50μmol?L-1)葉施生物制劑，三組施用的生物制劑組分量分別是稀釋后含26.7mg/L枯草芽孢桿菌的5、10、20mg/L納米硒。
[0039] 圖7不同濃度含購買納米硒的生物制劑的添加對鎘脅迫下油菜生長的影響。
[0040] 其中：Control為空白對照，Cd組為營養(yǎng)液中鎘濃度50μmol?L-1，Se-NPs1、Se-NPs2、Se-NPs3和Se-NPs4組分別為在Cd組基礎(chǔ)上(即營養(yǎng)液中鎘濃度為50μmol?L-1)葉施生物制劑，四組施用的生物制劑組分量分別是稀釋后含26.7mg/L枯草芽孢桿菌的5、10、15、25mg/L納米硒。
具體實施方式
[0041] 下面結(jié)合具體
實施例對本發(fā)明內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。如下所述例子僅是本發(fā)明的較佳實施方式而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對實施方式所做的任何簡單
修改，等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
[0042] 本發(fā)明以下實施例中所用的枯草芽孢桿菌168或枯草芽孢桿菌均購自廣東省微生物研究所或河南省龍燈生物科技有限公司，所用化學(xué)
試劑均為常規(guī)市售試劑。
[0043] 實施例1
[0044] 一種緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑及其應(yīng)用，具體步驟如下：
[0045] (1)在滅菌后的添加了400mmol?L-1亞硒酸鈉的LB培養(yǎng)基中，按體積比的量接種10％的枯草芽孢桿菌168活菌體，然后將培養(yǎng)瓶置30℃的搖瓶培養(yǎng)箱中在150轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行好氧培養(yǎng)24h，之后以4000g離心10分鐘，收集沉淀即獲得枯草芽孢桿菌與其代謝產(chǎn)物納米硒的混合物；
[0046] 其中，所述LB(Luria-Bertani)的配方是：10g/L胰蛋白胨，5g/L
酵母提取物和10g/L
氯化鈉，調(diào)節(jié)pH值為7.0-7.5，滅菌。
[0047] (2)用0.9％NaCl溶液洗滌所得的沉淀，然后加入液氮并杵打使沉淀破碎；再以200W條件超聲處理5分鐘使沉淀混合物粒徑達(dá)到200nm以下，用含1％十二烷基
硫酸鈉的
1.5molL-1、pH?8.3的Tris-HCl緩沖液以10000g，5min條件連續(xù)離心洗滌破碎產(chǎn)物3次；將離心洗滌收集到的產(chǎn)物懸浮于去離子水中，即得到含有納米硒和菌細(xì)胞碎片的懸浮液。
[0048] (3)將步驟(2)制得的懸浮液轉(zhuǎn)移到試管中，按體積比2:1加入正辛醇混合；在4℃靜置沉淀24h；液體出現(xiàn)分層：上層是正辛醇，兩相界面是菌細(xì)胞碎片，下層是納米硒顆粒懸濁液；分離出下層的納米硒顆粒懸濁液，3500g離心10min，沉淀物用氯仿、乙醇和蒸餾水分別洗滌至完全去除菌細(xì)胞碎片后得到納米硒；制得的納米硒掃描電子顯微鏡成像與X射線衍射圖譜見圖1和圖2。
[0049] 將清潔后的納米硒粒子在去離子水中定量為300mg/L的濃度制得納米硒水溶液，按每15L水中混有500mL的濃度為300mg?L-1納米硒水溶液和枯草芽孢桿活菌數(shù)量≥1×109/g的4kg枯草芽孢桿菌均勻混合制成一種緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑。
[0050] (4)生物制劑在緩解小白菜種植土壤鎘脅迫中的應(yīng)用：選擇一塊種植小白菜或油菜的菜地，分為3片區(qū)域先預(yù)處理土壤，使土壤中重金屬鎘濃度分別為0、10mg/kg、20mg/kg，放置兩周，期間保持土壤濕度恒定；然后將土壤分別裝盆，以每個花盆種植16棵菜的比例種植小白菜，一周后間苗至每盆12棵；期間準(zhǔn)備生物制劑①1.25mg/kg納米硒+26.7mg/kg枯草芽孢桿菌②12.5mg/kg納米硒+26.7mg/kg枯草芽孢桿菌，對比實驗制劑③1.25mg/kg亞硒酸鈉+26.7mg/kg枯草芽孢桿菌④12.5mg/kg亞硒酸鈉+26.7mg/kg枯草芽孢桿菌；在出苗后10天進(jìn)行第一次葉面噴施，在生長期第20天進(jìn)行第二次葉面噴施，在收獲前5天第三次葉面噴施；每次施入的硒的量相同，在整個小白菜生長期保持室內(nèi)濕度恒定；將收獲的小白菜用蒸餾水清洗干凈根部及葉片，檢測根部及葉片的鎘含量以評價所述生物制劑緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的狀況。
[0051] 以預(yù)處理土壤中重金屬鎘濃度為20mg/kg的實驗組為例，結(jié)果表明：
[0052] 從農(nóng)藝性狀來看，本發(fā)明所述含納米硒的生物制劑緩解小白菜種植土壤鎘脅迫的作用表現(xiàn)突出，見圖3。與單獨鎘處理的對照相比，在20mg/kg鎘污染土壤中生長的①和②組小白菜生物量比對照分別提高40.21％、37.54％。而在20mg/kg鎘污染土壤中生長的③和④組小白菜生物量比對照提高10.34％、27.59％。見圖5。
[0053] 實施例2
[0054] 一種緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑及其應(yīng)用，具體步驟如下：
[0055] (1)在滅菌后的添加了500mmol?L-1亞硒酸鈉的LB培養(yǎng)基中，按體積比的量接種6％的枯草芽孢桿菌168活菌體，然后將培養(yǎng)瓶置32℃的搖瓶培養(yǎng)箱中在200轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行好氧培養(yǎng)14h，之后以4500g離心15分鐘，收集沉淀即獲得枯草芽孢桿菌與其代謝產(chǎn)物納米硒的混合物；
[0056] (2)用0.9％NaCl溶液洗滌所得的沉淀，然后加入液氮并杵打使沉淀破碎；再以100W條件超聲處理10分鐘使沉淀混合物粒徑達(dá)到200nm以下，用1.5mol?L-1、pH?8.3的Tris-HCl緩沖液以10000g，5min條件連續(xù)離心洗滌破碎產(chǎn)物3次；將離心洗滌收集到的產(chǎn)物懸浮于去離子水中，即得到含有納米硒和菌細(xì)胞碎片的懸浮液；
[0057] (3)將(2)制得的懸浮液轉(zhuǎn)移到試管中，按體積比1:1加入正辛醇混合；在4℃靜置沉淀20h；液體出現(xiàn)分層：上層是正辛醇，兩相界面是菌細(xì)胞碎片，下層是納米硒顆粒懸濁液；分離出下層的納米硒顆粒懸濁液，3500g離心10min，沉淀物用氯仿、乙醇和蒸餾水分別洗滌至完全去除菌細(xì)胞碎片后得到納米硒；將清潔后的納米硒粒子在去離子水中定量為250mg/L的濃度制得純凈納米硒水溶液，儲存在4℃?zhèn)溆谩?br>
[0058] 按每15L水中混有700mL的濃度為250mg?L-1納米硒水溶液和枯草芽孢桿活菌數(shù)量≥1×109/g的3kg枯草芽孢桿菌均勻混合制成一種緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的生物制劑。
[0059] (4)生物制劑在緩解油菜種植土壤鎘脅迫中的應(yīng)用：油菜前期育苗兩周，轉(zhuǎn)
水培裝置。用1/2Hoagland營養(yǎng)液緩苗三天，轉(zhuǎn)Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)一周后開始添加含鎘溶液(50μmolL-1)。期間準(zhǔn)備生物制劑分別是稀釋后含26.7mg/L枯草芽孢桿菌的5、10mg/L、20mg/L納米硒，對比實驗制劑分別是稀釋后含26.7mg/L枯草芽孢桿菌的5、10mg/L、20mg/L亞硒酸鈉，添加含鎘溶液之后在油菜苗生長后8天在油菜葉片進(jìn)行第一次葉面均勻噴施，在生長期第17天進(jìn)行第二次葉面噴施，在收獲前5天第三次葉面噴施；每次施入的硒的量相同，在整個油菜生長期保持室內(nèi)濕度恒定；將收獲的油菜用蒸餾水清洗干凈根部及葉片，檢測根部及葉片的鎘含量以評價所述生物制劑緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的狀況。
[0060] 結(jié)果表明：從農(nóng)藝性狀來看，本發(fā)明所述含納米硒的生物制劑緩解油菜種植土壤鎘脅迫的作用表現(xiàn)突出，見圖4。與單獨鎘處理的對照相比，三種納米硒濃度分別處理的油菜植株干重分別提高了63.6％、65.9％和105.2％。從油菜葉片與根部的鎘含量來看，納米硒的添加顯著降低了油菜從地下部分到地上部分的遷移率。見圖6。
[0061] 實施例3
[0062] 本發(fā)明所述采用枯草芽孢桿菌168生物法制得的納米硒制備的生物制劑與利用市售納米硒制備的生物制劑緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的效果比較
[0063] (1)從東明小麥合作社購入500mL規(guī)格
發(fā)酵納米硒營養(yǎng)液(硒含量250mg/L)，加入133.3g枯草芽孢桿菌制備生物制劑。
[0064] (2)油菜前期育苗兩周，轉(zhuǎn)水培裝置。用1/2Hoagland營養(yǎng)液緩苗三天，轉(zhuǎn)Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)一周后開始添加含鎘溶液(50μmol?L-1)。之后在油菜苗生長后8天在油菜葉片進(jìn)行第一次葉面均勻噴施，具體是分別將稀釋后含26.7mg/L枯草芽孢桿菌的5、10、15、25mg/L納米硒均勻噴灑于油菜葉片，在生長期第17天進(jìn)行第二次葉面噴施，在收獲前5天第三次葉面噴施；每次施入的硒的量相同，在整個油菜生長期保持室內(nèi)濕度恒定；將收獲的油菜用蒸餾水清洗干凈根部及葉片，檢測根部及葉片的鎘含量以評價所述生物制劑緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的狀況。
[0065] 結(jié)果表明：與單獨鎘處理的對照相比，利用四種納米硒濃度制得的生物制劑分別處理的油菜植株干重顯著提高了23.5-61.9％。見圖7。本發(fā)明所述采用枯草芽孢桿菌168生物法制得的納米硒制備的生物制劑應(yīng)用效果見實施例2。
[0066] 結(jié)果顯示使用直接購買的納米硒也可制備本發(fā)明生物制劑緩解油菜鎘脅迫，但不及本發(fā)明所述采用枯草芽孢桿菌168生物法制得的納米硒制備的生物制劑緩解葉菜類蔬菜種植土壤鎘脅迫的效果好。
