促進(jìn)玉米根系發(fā)育的阿氏芽孢桿菌及其應(yīng)用
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專利匯可以提供促進(jìn)玉米根系發(fā)育的阿氏芽孢桿菌及其應(yīng)用專利檢索，專利查詢，專利分析的服務(wù)。并且本 發(fā)明 涉及 根際 促生菌(PGPR)領(lǐng)域，具體涉及一株促進(jìn)玉米根系發(fā)育的阿氏芽孢桿菌及其應(yīng)用。菌株為阿氏芽孢桿菌(Bacillus?aryabhattai)LAD，以保藏于中國 微 生物 菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地點(diǎn)為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCC?NO?18653，保藏日期為2019年10月10日，阿氏芽孢桿菌在促進(jìn)玉米根系發(fā)育中的應(yīng)用。本發(fā)明中阿氏芽孢桿菌Bacillus?aryabhattai?LAD能在 土壤 中穩(wěn)定存在，具有固氮、產(chǎn)糖、解 淀粉 和產(chǎn)生 植物 激素 等特性，并促進(jìn)玉米 幼苗 生長(zhǎng) 及根系發(fā)育，且阿氏芽孢桿菌具有較強(qiáng)的抗逆性，因此，可用于作物生產(chǎn)中。，下面是促進(jìn)玉米根系發(fā)育的阿氏芽孢桿菌及其應(yīng)用專利的具體信息內(nèi)容。
1.一種促進(jìn)玉米根系發(fā)育的阿氏芽孢桿菌，其特征在于：菌株為阿氏芽孢桿菌(Bacillus?aryabhattai)LAD，以保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地點(diǎn)為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCC?NO?18653，保藏日期為
2019年10月10日。
2.一種權(quán)利要求1所述阿氏芽孢桿菌在促進(jìn)玉米根系發(fā)育中的應(yīng)用。
3.一種玉米促生長(zhǎng)劑，其特征在于：玉米促生長(zhǎng)劑含權(quán)利要求1所述阿氏芽孢桿菌LAD。
4.按權(quán)利要求3所述的玉米促生長(zhǎng)劑，其特征在于，所述阿氏芽孢桿菌LAD為該菌株的培養(yǎng)物、培養(yǎng)濃縮物或培養(yǎng)菌懸液。
5.按權(quán)利要求4所述的玉米促生長(zhǎng)劑，其特征在于，所述培養(yǎng)液中阿氏芽孢桿菌LAD活菌數(shù)不小于105cfu/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述玉米促生長(zhǎng)劑，其特征在于，所述發(fā)酵液為將所述菌活化后，將活化后的菌液按2wt％接種量接入50ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，180r/min，37℃條件下振蕩培養(yǎng)24h-72h，即得所述培養(yǎng)液；
所述培養(yǎng)濃縮物為將上述發(fā)酵液經(jīng)過離心分離、陽離子交換樹脂D101吸附、75％乙醇解吸附、乙酸乙酯萃取，即可得培養(yǎng)濃縮物。
7.一種權(quán)利要求3所述玉米促生長(zhǎng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述促生長(zhǎng)劑在促進(jìn)玉米根系發(fā)育中的應(yīng)用。
8.一種土壤調(diào)理劑，其特征在于，土壤調(diào)理劑含權(quán)利要求1所述阿氏芽孢桿菌LAD。
促進(jìn)玉米根系發(fā)育的阿氏芽孢桿菌及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
背景技術(shù)
[0002] 阿氏芽孢桿菌發(fā)現(xiàn)于21世紀(jì)初，屬于革蘭氏陽性菌、芽孢桿菌屬菌落光滑，大小為5-10mm。阿氏芽孢桿菌研究方向包括大分子降解、產(chǎn)物合成和促進(jìn)植物生長(zhǎng)等。阿氏芽孢桿菌在自然界中分布廣泛，且抗逆性很強(qiáng)，在動(dòng)物腸道、植物根際、深海以及高原均有發(fā)現(xiàn)。阿氏押寶桿菌不僅能降解或合成大分子化合物，包括脫色、污水降解、合成香料、合成生物絮凝劑和抗白血病特效藥物；還能與植物共生并促進(jìn)植物生長(zhǎng)，包括合成激素、抗逆和增加作物產(chǎn)量。從2009發(fā)現(xiàn)并分離出第一株阿氏芽孢桿菌至今菌種資源仍較為匱乏，且由于阿氏芽孢桿菌存在廣泛，有些種類并不適宜在農(nóng)作物中應(yīng)用，同時(shí)僅能體現(xiàn)單一的效果，且并未有從玉米中分離得到的阿氏芽孢桿菌的相關(guān)報(bào)道，同時(shí)不能實(shí)現(xiàn)多功能。
發(fā)明內(nèi)容
[0003] 本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有研究的不足，提供一株能夠促進(jìn)根系發(fā)育的阿氏芽孢桿菌及其應(yīng)用。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述目的，所提供以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
[0005] 一株促生阿氏芽孢桿菌(Bacillus?aryabhattai)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地點(diǎn)為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCC?NO?18653，保藏日期為2019年10月10日。
[0006] 本發(fā)明中阿氏芽孢桿菌Bacillus?aryabhattai?LAD的生物學(xué)特性為革蘭氏染色陽性桿菌，具有固氮、產(chǎn)糖及促進(jìn)玉米苗期苗長(zhǎng)及根系發(fā)育等特性。Bacillus?aryabhattai?LAD在培養(yǎng)至72h后，菌體濃度在?OD600nm＝1.4～1.5時(shí)，稀釋發(fā)酵液對(duì)玉米進(jìn)行浸種24h后培養(yǎng)，在菌體濃度為102時(shí)，水培使玉米地上部分苗長(zhǎng)增加107％，最長(zhǎng)根增加?197％，主根粗增加22，總根長(zhǎng)增加97％，總根表面積增加96％，根體積增加76％；土培使玉米總根長(zhǎng)增加48％，總根表面積增加43％，根體積增加46％。
[0007] 本發(fā)明中阿氏芽孢桿菌的獲取方法是：在棕壤長(zhǎng)期定位試驗(yàn)站采集土壤，稱取采集的新鮮土壤樣品10g，放入盛有90mL無菌水并帶有少量小玻璃珠的搖瓶中，放置在搖床上180r/min振蕩培養(yǎng)30min，使土樣均勻地分散在稀釋液中制成10-1稀釋液。吸取1mL?10-1稀-2
釋液于裝有9mL無菌水的玻璃試管中，振蕩混勻制成10 稀釋液。依次類推，連續(xù)稀釋，直至稀釋到10-6。本研究選取10-3、10-4、10-5三個(gè)稀釋梯度的土壤稀釋液，分別吸取0.1mL稀釋液在分離用選擇性培養(yǎng)基上均勻涂布，直至固體培養(yǎng)基表面變干，每個(gè)稀釋度設(shè)置3次重復(fù)。
將平板置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7d。待平板上微生物菌落長(zhǎng)出后，通過觀察菌落的形態(tài)特征，挑取少許長(zhǎng)勢(shì)良好且表面濕潤(rùn)、光滑凸起、有粘液的不同細(xì)菌的單菌落，劃線轉(zhuǎn)接于分離用選擇性培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)5-7d。依此方法連續(xù)劃線純化培養(yǎng)3次以上，鏡檢其純度，直至獲得純培養(yǎng)，劃線于試管斜面，并置于4℃冰箱中保藏備用。
釋液于裝有9mL無菌水的玻璃試管中，振蕩混勻制成10 稀釋液。依次類推，連續(xù)稀釋，直至稀釋到10-6。本研究選取10-3、10-4、10-5三個(gè)稀釋梯度的土壤稀釋液，分別吸取0.1mL稀釋液在分離用選擇性培養(yǎng)基上均勻涂布，直至固體培養(yǎng)基表面變干，每個(gè)稀釋度設(shè)置3次重復(fù)。
將平板置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7d。待平板上微生物菌落長(zhǎng)出后，通過觀察菌落的形態(tài)特征，挑取少許長(zhǎng)勢(shì)良好且表面濕潤(rùn)、光滑凸起、有粘液的不同細(xì)菌的單菌落，劃線轉(zhuǎn)接于分離用選擇性培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)5-7d。依此方法連續(xù)劃線純化培養(yǎng)3次以上，鏡檢其純度，直至獲得純培養(yǎng)，劃線于試管斜面，并置于4℃冰箱中保藏備用。
[0008] 本發(fā)明利用固氮及產(chǎn)糖性狀分離出阿氏芽孢桿菌Bacillus?aryabhattai?LAD。提取Bacillus?aryabhattai?LAD的全基因序列，并通過16S?rDNA擴(kuò)增引物27F(SEQ?ID?NO：1)和1492R(SEQ?ID?NO：?2)擴(kuò)增其16S?rDNA序列。通過在NCBI比對(duì)發(fā)現(xiàn)，該序列與芽孢桿菌屬(Bacillus?sp.)的16S?rDNA序列的同源性最高，為99％，系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果顯示，Bacillus?aryabhattai?strain在同一分支上，親緣關(guān)系較近，因此可以推斷LAD菌為阿氏芽孢桿菌，命名為Bacillus?aryabhattai?LAD。
[0009] 本發(fā)明的有益效果：
[0010] 本發(fā)明中阿氏芽孢桿菌Bacillus?aryabhattai?LAD分離自棕壤長(zhǎng)期定位試驗(yàn)站玉米種植土壤中，其能在土壤中穩(wěn)定存在，具有固氮、產(chǎn)糖、解淀粉和產(chǎn)生植物激素等特性，并促進(jìn)玉米幼苗生長(zhǎng)及根系發(fā)育，且阿氏芽孢桿菌具有較強(qiáng)的抗逆性，因此，可用于作物生產(chǎn)中，不僅可以幫助化肥減施改善環(huán)境，并且對(duì)作物增產(chǎn)抗逆提供可行性。附圖說明
[0011] 圖1為本發(fā)明是實(shí)例提供的LAD菌16S?rDNA?PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)結(jié)果；其中M為5000bp?DNA?marker，1，2，3，4為L(zhǎng)AD菌株的16S?rDNA?PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
[0012] 圖2為本發(fā)明是實(shí)例提供的基于16S?rDNA序列同源性的LAD?系統(tǒng)發(fā)育樹。
[0013] 圖3為本發(fā)明是實(shí)例提供的Bacillus?aryabhattai?LAD的生長(zhǎng)曲線。
[0014] 圖4為本發(fā)明是實(shí)例提供的LAD菌nif?H基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)結(jié)果；其中M為5000bp?DNA?marker，1，2道為L(zhǎng)AD菌nif?H?基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
[0015] 圖5為本發(fā)明是實(shí)例提供的LAD菌解淀粉陽性反應(yīng)圖像。
[0016] 圖6為本發(fā)明是實(shí)例提供的LAD菌處理后，水培14d和大田實(shí)驗(yàn)60d玉米幼苗根系分析儀測(cè)量圖。
[0017] 圖7為本發(fā)明是實(shí)例提供的LAD菌處理后，大田實(shí)驗(yàn)60d玉米根系發(fā)育情況。
[0018] 圖8為本發(fā)明是實(shí)例提供的不同處理對(duì)土壤水穩(wěn)定性團(tuán)聚體的影響效果圖。
具體實(shí)施方式
[0019] 以下結(jié)合實(shí)施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。
[0020] 本試驗(yàn)從玉米長(zhǎng)期定位試驗(yàn)田中，篩選出一株阿氏芽孢桿菌，探究其促生功能，并探究了其對(duì)玉米根系形態(tài)發(fā)育的影響。因此，篩選具有促生功能阿氏芽孢桿菌為相關(guān)研究提供菌種資源。
[0021] 實(shí)施例1固氮阿氏芽孢桿菌的分離及初步鑒定
[0022] 在棕壤長(zhǎng)期定位試驗(yàn)站采集土壤，稱取采集的新鮮土壤樣品10?g，放入盛有90mL無菌水并帶有少量小玻璃珠的搖瓶中，放置在搖床上180r/min振蕩培養(yǎng)30min，使土樣均勻地分散在稀釋液中制成?10-1稀釋液。吸取1mL?10-1稀釋液于裝有9mL無菌水的玻璃試管中，-2 -6 -3 -4 -5振蕩混勻制成10 稀釋液。依次類推，連續(xù)稀釋，直至稀釋到10 。本研究選取10 、10 、10三個(gè)稀釋梯度的土壤稀釋液，分別吸取?0.1mL稀釋液在分離用Ashby培養(yǎng)基上均勻涂布，直至固體培養(yǎng)基表面變干，每個(gè)稀釋度設(shè)置3次重復(fù)。將平板置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-
7d。待平板上微生物菌落長(zhǎng)出后，通過觀察菌落的形態(tài)特征，挑取少許長(zhǎng)勢(shì)良好且表面濕潤(rùn)、光滑凸起、有粘液的不同細(xì)菌的單菌落，劃線轉(zhuǎn)接于分離用選擇性培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)
5-7d。依此方法連續(xù)劃線純化培養(yǎng)3次以上，鏡檢其純度，直至獲得純培養(yǎng)，劃線于試管斜面，并置于4℃冰箱中保藏備用。結(jié)果表明，從土壤中分離到1株革蘭氏染色陽性、接觸酶陽性的桿菌，命名為L(zhǎng)AD，菌落整齊、表面濕潤(rùn)、有光澤、透明、有粘液等特征。初步鑒定其為芽孢桿菌，于4℃冰箱中保存。
7d。待平板上微生物菌落長(zhǎng)出后，通過觀察菌落的形態(tài)特征，挑取少許長(zhǎng)勢(shì)良好且表面濕潤(rùn)、光滑凸起、有粘液的不同細(xì)菌的單菌落，劃線轉(zhuǎn)接于分離用選擇性培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)
5-7d。依此方法連續(xù)劃線純化培養(yǎng)3次以上，鏡檢其純度，直至獲得純培養(yǎng)，劃線于試管斜面，并置于4℃冰箱中保藏備用。結(jié)果表明，從土壤中分離到1株革蘭氏染色陽性、接觸酶陽性的桿菌，命名為L(zhǎng)AD，菌落整齊、表面濕潤(rùn)、有光澤、透明、有粘液等特征。初步鑒定其為芽孢桿菌，于4℃冰箱中保存。
[0023] 實(shí)施例2阿氏芽孢桿菌的分子鑒定
[0024] 1.總DNA的提取
[0025] 挑取實(shí)施例1中單菌落接入液體牛肉膏培養(yǎng)基中，37℃，180rpm?培養(yǎng)24h，取培養(yǎng)好的菌液利用Ezup柱式細(xì)菌基因組DNA抽提試劑盒進(jìn)行DNA提取。
[0026] 2.16S?rDNA的PCR擴(kuò)增
[0027] 以16S?rDNA擴(kuò)增引物27F(SEQ?ID?NO：1)和1492R(SEQ?ID?NO：2)為上下游引物，LAD菌總DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系為：LAD菌總DNA?1.5μL；2×Taq?MasterMix?12.5μL；上下游引物(10μmol/L)各0.5μL；無菌水10μL。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，60℃退火1min，72℃延伸90s，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。PCR獲得的產(chǎn)物于4℃保存?zhèn)溆谩?br>
[0028] 3.PCR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)
[0029] 稱取0.4g瓊脂糖粉末，加入40mL?1×TAE緩沖液中，加熱至瓊脂糖完全溶解后加入2μL?DNA染色液Goldview，混合均勻，趁熱倒入制膠槽中，并插上梳板，室溫靜置20min以上，待完全凝固后垂直拔去梳板，將制備好的瓊脂糖凝膠放入盛有1×TAE緩沖液的電泳槽中，緩沖液應(yīng)沒過膠面，吸取2μL與上樣Buffer混勻的PCR產(chǎn)物加入瓊脂糖凝膠的點(diǎn)樣孔，在其中一個(gè)點(diǎn)樣孔中加入DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(DNA?marker)，接通電源在5V/cm條件下電泳30min，電泳結(jié)束后，取出瓊脂糖凝膠，輕輕地置于紫外透射儀上成像，根據(jù)DNA?分子量標(biāo)準(zhǔn)(DNA?marker)判斷擴(kuò)增條帶的濃度及大小。如圖1所示，在1500bp處出現(xiàn)與預(yù)期一致的特異性條帶，說明16S?rDNA擴(kuò)增成功。
[0030] 阿氏芽孢桿菌Bacillus?aryabhattai?LAD的16S?rDNA序列如下：
[0031] catgcagtcgagcgaactgattagaagcttgcttctatgacgttagcggcggacgggtga?gtaacacgtgggcaacctgcctgtaagactgggataacttcgggaaaccgaagctaatac?cggataggatcttctccttcatgggagatgattgaaagatggtttcggctatcacttaca?gatgggcccgcggtgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaacgatgca?tagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacg?ggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtg?agtgatgaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttagggaagaacaagtacgagagta?actgctcgtaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagcc?gcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcaggc?ggtttcttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtggagggtcattggaaactgg?ggaacttgagtgcagaagagaaaagcggaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagaga?tgtggaggaacaccagtggcgaaggcggctttttggtctgtaactgacgctgaggcgcga?aagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgc?taagtgttagagggtttccgccctttagtgctgcagctaacgcattaagcactccgcctg?gggagtacggtcgcaagactgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtgg?agcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctgac?aactctagagatagagcgttccccttcgggggacagagtgacaggtggtgcatggttgtc?gtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatctta?gttgccagcatttagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtg?gggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggat?ggtacaaagggctgcaagaccgcgaggtcaagccaatcccataaaaccattctcagttcg?gattgtaggctgcaactcgcctacatgaagctggaatcgctagtaatcgcggatcagcat?gccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgt?aacacccgaagtcggtggagtaaccgtaaggagctagccgcctaaggt
[0032] 4.序列比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
[0033] 將經(jīng)電泳檢測(cè)的16S?rDNA?PCR產(chǎn)物送生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果在GenBank中進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果顯示，通過在NCBI比對(duì)發(fā)現(xiàn)，該序列與芽孢桿菌屬(Bacillus?sp.)的?16S?rDNA序列的同源性最高，為99％，系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果顯示，Bacillus?aryabhattai?strain在同一分支上，親緣關(guān)系較近，因此可以推斷LAD?菌為阿氏芽孢桿菌，命名為Bacillus?aryabhattai?LAD。
[0034] 實(shí)施例3阿氏芽孢桿菌Bacillus?aryabhattai?LAD生物學(xué)性質(zhì)測(cè)定
[0035] 1.LAD菌株活化
[0036] 挑取保存的LAD菌株于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，37℃，180?r/min培養(yǎng)24h，使LAD菌株處于活躍狀態(tài)。
[0037] 2.生長(zhǎng)曲線測(cè)定
[0038] 將活化后的菌液按2wt％接種量接入50ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，180r/min，37℃條件下培養(yǎng)。每隔2h測(cè)定菌液OD600值，直至?OD值趨于穩(wěn)定，做三組平行，以空白培養(yǎng)基為對(duì)照，繪制生長(zhǎng)曲線。如圖所示，LAD菌株在接種0-4h內(nèi)處于遲緩期，4h后進(jìn)入對(duì)數(shù)期，此階段菌株生長(zhǎng)較快，12h開始生長(zhǎng)緩慢，到32h趨于穩(wěn)定。
[0039] 3.niLADH固氮基因測(cè)定
[0040] 利用PCR擴(kuò)增LAD菌Nif?H基因，擴(kuò)增引物?P1(TTATACTACAGGAGCTTCAG)和為上下游引物?P2(ATGACAGACGAAAACATTAG)，LAD菌總DNA為模板進(jìn)行PCR?擴(kuò)增。反應(yīng)體系為：LAD菌總DNA?1.5μL；2×Taq?MasterMix?12.5μL；上下游引物(10μmol/L)各0.5μL；無菌水10μL。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，60℃退火1min，72℃延伸90s，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。PCR獲得的產(chǎn)物于4℃保存?zhèn)溆?。如圖所示，Nif?H擴(kuò)增產(chǎn)物約為350b?p。由此可見，本發(fā)明阿氏芽孢桿菌Bacillus?aryabhattai?LAD含有固氮基因，進(jìn)而其具有相應(yīng)特性。
[0041] 4.解淀粉能力測(cè)定
[0042] 采用淀粉培養(yǎng)基兩點(diǎn)接種，在30℃條件下培養(yǎng)48h.，形成菌落后，在平板上滴加入少量碘液，并緩慢旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使碘液均勻鋪滿至整個(gè)平板。立即觀察結(jié)果，若菌落周圍出現(xiàn)透明圈說明淀粉已被水解，則為陽性反應(yīng)，透明圈的大小能說明菌株水解淀粉能力的大小，也能說明產(chǎn)生胞外淀粉酶活力的高低。如圖所示，LAD的菌落周圍均出現(xiàn)了透明圈，為陽性反應(yīng)。
[0043] 5.促進(jìn)玉米生長(zhǎng)
[0044] 將活化后的LAD培養(yǎng)72h，測(cè)得OD600nm為1.4-1.5，對(duì)培養(yǎng)得到的LAD菌懸液用蒸餾水經(jīng)水以10倍濃度進(jìn)行梯度稀釋，分別得到稀釋10、102、103、104、105、106的LAD菌懸液，在人工氣候室中，模擬玉米生長(zhǎng)條件，分別采用土培和水培方式對(duì)玉米進(jìn)行促生實(shí)驗(yàn)。用得到的菌懸液對(duì)玉米種子進(jìn)行水培，以水為空白對(duì)照。并將玉米種子分別用不同濃度LAD菌懸液和水浸種24h。取4kg過20目篩網(wǎng)土于盆栽盆中，將浸種后的玉米種子均勻種植在盆栽盆中。每組三個(gè)平行，培養(yǎng)14d后觀察并記錄玉米幼苗生長(zhǎng)情況。
[0045] 水培14d后，玉米生長(zhǎng)情況如圖所示，玉米幼苗數(shù)據(jù)如表1和圖?6，從圖表中可以明顯看出，在稀釋倍數(shù)為102的條件下，玉米從根長(zhǎng)、及苗長(zhǎng)生長(zhǎng)狀況均較為良好，而針對(duì)主根粗，我們從數(shù)據(jù)中可以看出，實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，而實(shí)驗(yàn)組之間變化并不是特別明顯。因此將102確定為促進(jìn)玉米幼苗生長(zhǎng)發(fā)育的最適濃度。
[0046] 表1水培玉米幼苗14d生長(zhǎng)數(shù)據(jù)
[0047]
[0048] 選取稀釋至菌體濃度為102的LAD菌懸液對(duì)玉米種子進(jìn)行浸種處理，常溫浸種24h后，分別于實(shí)驗(yàn)室水培及大田中播種。培養(yǎng)后利用根系分析儀測(cè)定根部發(fā)育情況，分別對(duì)水培14d和大田實(shí)驗(yàn)60d?的玉米幼苗根際進(jìn)行測(cè)定。將水培14d和大田播種60d的玉米幼苗根系處理后，經(jīng)根系根系分析儀測(cè)定，在圖中根據(jù)根系分析儀獲得圖像，可以明顯看出，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)水培及大田實(shí)驗(yàn)播種培養(yǎng)后處理組根系均明顯較對(duì)照組發(fā)達(dá)，其中圖7中獲得的玉米幼苗根系圖像中，我們可以明顯看出，處理組根系豐富度及粗細(xì)明顯高于對(duì)照組。根據(jù)表2?中，根系分析儀獲得的根系數(shù)據(jù)同樣證明以上兩點(diǎn)。
[0049] 表2根系分析儀根系分析數(shù)據(jù)
[0050]
[0051] 6.土壤團(tuán)聚體：
[0052] 土壤團(tuán)聚體濕篩法測(cè)定土壤水穩(wěn)定性大團(tuán)聚體具體方法為：將?LAD菌株處理和對(duì)照組土壤分別轉(zhuǎn)移至孔徑為0.25mm的篩子中，慢慢加水使土壤浸潤(rùn)，再將篩子放入水中；保持篩子的上邊緣保持高于水面，輕輕地上下移動(dòng)浸在水中的篩子，保持一致的頻率上下移動(dòng)，直至篩子上的土壤顆粒在水面清晰可見且不再透過篩子。分別收集?>0.25mm和<0.25mm的土壤樣品，然后烘干稱重，計(jì)算各級(jí)團(tuán)聚體的質(zhì)量百分比(參見圖8)。
[0053] 圖8表示供試菌株的不同處理對(duì)土壤水穩(wěn)定性團(tuán)聚體的影響可知，LAD菌株的不同處理對(duì)土壤水穩(wěn)定性團(tuán)聚體比例也存在不同的影響。與對(duì)照組相比，接含活菌體發(fā)酵液和不含菌體發(fā)酵液分別提高了1.87倍和1.23倍，差異顯著(P<0.05)。
[0054] 綜上所述，本發(fā)明LAD菌不單具有某一項(xiàng)促生特性，在固氮，產(chǎn)糖，解淀粉，溶磷等方面均有較好效果，同時(shí)其能明顯增加玉米根系豐富度。LAD菌株分離自玉米長(zhǎng)期定位土壤，重新接種回玉米種植土壤，最大程度降低了對(duì)土壤微生態(tài)的影響，同時(shí)，其具有多種促生特性，代替菌種單一功能的弊端。
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