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無需熱處理生產(chǎn)油菜蛋白分離物

閱讀：2發(fā)布：2021-03-13

專利匯可以提供無需熱處理生產(chǎn)油菜蛋白分離物專利檢索，專利查詢，專利分析的服務(wù)。并且處理由油菜蛋白微膠粒團沉積產(chǎn)生的上清液以提供一種油菜蛋白分離物，其可溶于 水 相酸性環(huán)境。，下面是無需熱處理生產(chǎn)油菜蛋白分離物專利的具體信息內(nèi)容。

1.一種制備具有基于干重至少90 wt%（N x 6.25）蛋白含量的油菜蛋白分離物的方法，其特征在于：
（a） 任選（i）部分濃縮油菜蛋白微膠粒團沉淀產(chǎn)生的上清液至濃度50 g/L或以下，或者
（ii）將油菜蛋白微膠粒團沉淀產(chǎn)生的上清液濃縮至濃度至少50 g/L；
（bi）在不進行任選的步驟（a）下，將鈣鹽加入到油菜蛋白微膠粒團沉淀產(chǎn)生的上清液中，以使傳導(dǎo)率為5到30 mS以形成在上清液中的植酸鈣沉淀，或者
（bii）在進行任選的步驟（a）下，將鈣鹽加入到部分濃縮的上清液或濃縮的上清液中以使傳導(dǎo)率為2到30 mS以形成植酸鈣沉淀,
（c）在不去除植酸鈣沉淀的情況下調(diào)節(jié)所得溶液的pH至2.0到4.0，以溶解所述沉淀并形成pH調(diào)節(jié)的澄清溶液，
（di）在不進行任選步驟（aii）并且進行任選步驟（ai）下，將pH調(diào)節(jié)的澄清溶液濃縮至蛋白濃度至少50 g/L，以產(chǎn)生澄清的濃縮油菜蛋白溶液，或者
（dii） 在不進行任選的步驟（a）下，將pH調(diào)節(jié)的澄清溶液濃縮至蛋白濃度至少50 g/L，以產(chǎn)生澄清的濃縮油菜蛋白溶液，
（e） 任選滲濾所述澄清的濃縮油菜蛋白溶液，
（f）任選對任選滲濾的澄清濃縮油菜蛋白溶液進行脫色步驟，以及
（g） 干燥所述任選脫色且任選滲濾的澄清濃縮油菜蛋白溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在任選步驟（aii）中，或在步驟（di）中，或在步驟（dii）中，所得到的溶液的濃度為50到500 g/L。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述濃度為100到250 g/L。
4.如權(quán)利要求1到3中任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，在步驟（bi）中，所述鈣鹽為氯化鈣，并加入到上清液中以使傳導(dǎo)率為8到10 mS，或者，在步驟（bii）中，所述鈣鹽為氯化鈣，并加入到部分濃縮或濃縮的上清液中以使傳導(dǎo)率為4到10 mS。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到4中任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，在步驟（c）中，將pH調(diào)節(jié)至 2.9到3.2。

說明書全文

無需熱處理生產(chǎn)油菜蛋白分離物

[0001] 本申請是2009年8月18日提交的題為“無需熱處理生產(chǎn)油菜蛋白分離物”的國家申請號為200980142164.5(PCT/CA2009/001147)的發(fā)明專利申請的分案申請。
[0002] 相關(guān)申請的參考
[0003] 本申請根據(jù)35USC119(e)要求2008年8月18日提交的美國臨時專利申請61/136,193的優(yōu)先權(quán)。

技術(shù)領(lǐng)域

[0004] 本發(fā)明涉及生產(chǎn)油菜(canola)蛋白分離物。

背景技術(shù)

[0005] 具有至少100wt％(N x6.25)蛋白含量的油菜油籽蛋白分離物可通過如共同待審的2002年5月3日提交的美國專利申請10/137,391(美國專利申請公布說明書2003-0125526Al和WO02/089597)和2004年6月9日提交的美國專利申請10/476,230(美國專利申請公布說明書2004-0254353Al)中所述的過程從油籽粕中產(chǎn)生，所述專利申請轉(zhuǎn)讓給其受讓人，且其公開通過引用結(jié)合到本文中。所述步驟涉及一種多步方法，其包含使用一種鹽水溶液提取油菜油籽粕，從殘余油籽粕中分離所產(chǎn)生的蛋白水溶液，通過使用選擇性膜技術(shù)提高所述水溶液的蛋白濃度到至少約200g/L同時保持離子強度基本不變，稀釋所得到的濃縮蛋白溶液到冷水中以引起蛋白微膠粒形成，沉降所述蛋白微膠粒以形成一種無定形、粘性、膠狀、類谷蛋白的蛋白微膠粒團(PMM)，以及從具有至少約100wt％(N x6.25)蛋白含量的上清液中回收所述蛋白微膠粒團。當(dāng)用于本文時，蛋白含量基于干重測定。所回收的PMM可干燥。
[0006] 在所述方法的一個實施方案中，處理來自PMM沉降步驟的上清液以從所述上清液中回收油菜蛋白分離物。該步驟可通過使用超濾膜初始濃縮所述上清液和干燥所述濃縮物實現(xiàn)。所得到的油菜蛋白分離物具有至少約90wt％，優(yōu)選地至少約100wt％(N x6.25)的蛋白含量。
[0007] 美國專利申請10/137,391中所述的步驟主要是批量步驟。在共同待審的2002年11月19日提交的美國專利申請10/298,678(美國專利申請公布說明書2004-0039174Al和WO03/043439)和2005年3月5日提交的美國專利申請10/496,071(美國專利申請公布說明書2003-0015910Al)中，描述了一種生產(chǎn)油菜蛋白分離物的連續(xù)過程，所述專利申請轉(zhuǎn)讓給其受讓人，且其公開通過引用結(jié)合到本文中。根據(jù)該過程，油菜油籽粕與一種鹽水溶液連續(xù)混合，混合物通過管道輸送同時從油菜油籽粕中提取蛋白以形成蛋白水溶液，所述蛋白水溶液通過選擇性膜操作連續(xù)輸送以提高所述蛋白水溶液的蛋白含量到至少約50g/L，同時保持離子強度基本不變，所得到的濃縮蛋白溶液與冷水連續(xù)混合以引起蛋白微膠粒形成，所述蛋白微膠粒不斷沉降同時上清液不斷溢出直至沉降容器中積累所需數(shù)量的PMM。所述PMM從沉降容器中回收并可以干燥。所述PMM的蛋白含量至少約90wt％(N x6.25)，優(yōu)選地至少約100wt％。可處理溢出的上清液以回收其中的油菜蛋白分離物，如上所述。
[0008] 已知油菜種子包含約10到約30wt％蛋白，并且已鑒定多種不同蛋白成分。這些蛋白包括一種12S球蛋白，稱為十字花科蛋白，一種7S蛋白和一種2S儲藏蛋白，稱為油菜小蛋白。如共同待審的2003年4月15日提交的美國專利申請10/413,371(美國專利申請公布說明書2004-0034200Al和WO03/088760)和2005年4月29日提交的美國專利申請10/510，766(美國專利申請公布說明書2005-0249828Al)所述，涉及濃縮蛋白水溶液稀釋以形成PMM和處理上清液以回收另外蛋白的上述步驟可回收不同蛋白譜的分離物，所述專利申請轉(zhuǎn)讓給其受讓人，且其公開通過引用結(jié)合到本文中。
[0009] 在這方面，源于PMM的油菜蛋白分離物的蛋白成分組成為約60到約98wt％的7S蛋白，約1到約15wt％的12S蛋白和0到約25wt％的2S蛋白。源于上清液的油菜蛋白分離物的蛋白成分組成為約60到約95wt％的2S蛋白，約5到約40wt％的7S蛋白和0到約5wt％的12S蛋白。因此，源于PMM的油菜蛋白分離物主要為7S蛋白，而源于上清液的油菜蛋白分離物主要為2S蛋白。如上述美國專利申請10/413,371所述，所述2S蛋白的分子量為約14,000道爾頓，所述7S蛋白的分子量為約145,000道爾頓，所述12S蛋白的分子量為約290,000道爾頓。
[0010] 在共同待審的2005年1月21日提交的美國專利申請11/038,086(美國專利公布說明書2005-0181112Al和WO2005/067729)和2008年6月20日提交的美國專利申請12/213,500中，描述了一種步驟，其中上清液被熱處理以沉積7S蛋白并產(chǎn)生富集2S蛋白的蛋白水溶液，所述專利申請轉(zhuǎn)讓給其受讓人，且其公開通過引用結(jié)合到本文中。所述蛋白水溶液可干燥以產(chǎn)生富集2S的油菜蛋白分離物。所述油菜蛋白分離物具有多種益處，包括在廣泛酸性pH值范圍內(nèi)的可溶性和在水相介質(zhì)中的澄清性，例如使制備蛋白強化飲料成為可能，尤其是在酸性pH值，其中添加油菜蛋白分離物不損害澄清度。
[0011] 油菜也稱為油菜籽或蕓苔(oil seed rape)。

發(fā)明內(nèi)容

[0012] 現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)可無需熱處理步驟制備與富集2S蛋白的油菜蛋白分離物性質(zhì)相同的產(chǎn)品。去除熱處理步驟可改進顏色和味道并提高總產(chǎn)量，因為7S蛋白無需從上清液中去除。所得到的油菜蛋白分離物不僅在低pH下的水中完全可溶、透明、并且熱穩(wěn)定，而且通常植酸含量低。在低pH的溶液中熱穩(wěn)定允許熱處理例如熱灌裝應(yīng)用。所述油菜蛋白分離物可用于人類消費的產(chǎn)品，例如用于尤其是軟飲料和運動飲料，以及其它水相系統(tǒng)的蛋白強化，而無蛋白沉淀。所述油菜蛋白分離物也可用于非人類食品應(yīng)用，例如寵物食品和水產(chǎn)業(yè)。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種制備具有基于干重的至少約90wt％(Nx6.25)蛋白含量的油菜蛋白分離物的方法，其包含：
[0014] 向油菜蛋白微膠粒團沉淀產(chǎn)生的上清液中加入鈣鹽，優(yōu)選為氯化鈣，以提供約5mS到約30mS的傳導(dǎo)率，優(yōu)選約8到約10mS，以形成植酸鈣沉淀，
[0015] 從所得到的溶液中去除沉淀的植酸鈣以產(chǎn)生澄清溶液，
[0016] 任選調(diào)節(jié)所述澄清溶液的pH值至約2.0到約4.0，優(yōu)選約2.9到約3.2，例如通過加入鹽酸，
[0017] 將任選調(diào)節(jié)pH的澄清溶液濃縮至蛋白含量至少約50g/L，優(yōu)選約50到約500g/L，更優(yōu)選約100到約250g/L，以產(chǎn)生澄清的濃縮油菜蛋白溶液，
[0018] 任選滲濾所述澄清的濃縮油菜蛋白溶液，例如使用多倍體積的pH3的水，[0019] 任選進行脫色步驟，例如顆粒活性碳處理，以及
[0020] 干燥所述濃縮蛋白溶液。
[0021] 在加入鈣鹽之前上清液可部分濃縮至中間濃度。去除所形成的沉淀，所得到的溶液如上所述酸化，進一步濃縮至終濃度，然后任選滲濾并干燥。
[0022] 備選地，上清液可首先濃縮至終濃度，向濃縮上清液中加入鈣鹽，去除所得到的沉淀，酸化溶液，然后任選滲濾并干燥。
[0023] 在上述方法的另一種變型中，起初向上清液中加入少量鈣鹽，使其不形成沉淀，酸化溶液并部分濃縮至中間濃度，向部分濃縮的上清液中加入另外數(shù)量的鈣鹽并形成沉淀。
[0024] 去除沉淀，濃縮溶液至其終濃度并任選滲濾并干燥。
[0025] 在上述步驟中一種選擇為省略去除沉淀，這導(dǎo)致產(chǎn)品中的植酸鹽含量更高。在此步驟中，向上清液加入鈣鹽，部分濃縮上清液或完全濃縮上清液并且不去除沉淀。酸化導(dǎo)致沉淀再溶解。
[0026] 另一種選擇為省略酸化并在自然pH下進行溶液處理。在這種選擇中，向上清液加入鈣鹽，部分濃縮上清液或濃縮上清液以形成沉淀并去除。然后如上所述處理所得到的溶液而沒有酸化步驟。
[0027] 當(dāng)上清液在加入鈣鹽之前部分濃縮和去除沉淀之后完全濃縮時，所述上清液首先濃縮至蛋白濃度約50g/L或以下，并且在去除沉淀之后，再濃縮至濃度至少約50g/L，優(yōu)選約50到約500g/L，更優(yōu)選約100到約250g/L。
[0028] 在本發(fā)明的一個實施方案中，鈣鹽可在兩個階段加入。在此實施方案中，向上清液加入少量鈣以使傳導(dǎo)率為約1mS到約3.5mS，優(yōu)選約1mS到約2mS，其不足以引起沉淀形成。
[0029] 酸化所得到的溶液并在上述條件下部分濃縮。向部分濃縮的溶液中加入剩余的鈣鹽以使傳導(dǎo)率為約4mS到約30mS，優(yōu)選約4到約10mS，以引起沉淀形成。然后去除沉淀。然后在上述條件下濃縮所得到的澄清溶液。
[0030] 根據(jù)本文所述方法生產(chǎn)的油菜蛋白分離物可用于蛋白分離物的常規(guī)應(yīng)用，例如，加工食品和飲料的蛋白強化，油的乳化，烘焙商品的成型劑和含氣產(chǎn)品的發(fā)泡劑。另外，所述油菜蛋白分離物可形成蛋白纖維，用于人造肉，在蛋白用作粘合劑的食物產(chǎn)品中可用作蛋白替代物或膨脹劑。所述油菜蛋白分離物可用作營養(yǎng)補充劑。所述油菜蛋白分離物的其它用途還在寵物食品、動物飼料，工業(yè)和化妝品應(yīng)用，以及個人護理產(chǎn)品中體現(xiàn)。
[0031] 詳細說明
[0032] 提供油菜蛋白分離物的方法的起始步驟涉及從油菜油籽粕中溶解蛋白原料。從油菜籽粕中回收的蛋白原料可為油菜種子中天然存在的蛋白，或者所述蛋白原料可為基因操作修飾的蛋白但具有天然蛋白的特征性疏水和極性性質(zhì)。所述油菜粕可為從含有不同水平的非變性蛋白的油菜油籽中去除油菜油產(chǎn)生的任何油菜粕，例如由熱正已烷提取或冷油壓榨方法產(chǎn)生。從油菜油籽中去除油菜油通常作為本文所述的蛋白分離物回收步驟中的一個單獨操作進行。
[0033] 蛋白溶解最有效地通過使用食品級鹽溶液進行，因為鹽的存在增強可溶性蛋白從油籽粕中去除。當(dāng)油菜蛋白分離物意在用于非食品用途，可使用非食品級化學(xué)品。所述鹽通常為氯化鈉，盡管可使用其它鹽，例如氯化鉀。所述鹽溶液的離子強度至少約0.05，優(yōu)選至少約0.10，以進行大量蛋白的溶解。隨著鹽溶液離子強度升高，油籽粕中蛋白的溶解程度開始增加直至達到最大值。離子強度的任何隨后升高不增加溶解的總蛋白。達到最大蛋白溶解的食品級鹽溶液的離子強度隨相關(guān)鹽和選擇的油籽粕變化。
[0034] 鑒于升高離子強度的蛋白沉淀需要更大程度的稀釋，通常優(yōu)選使用低于約0.8的離子強度值，更優(yōu)選約0.1到約0.15的值。
[0035] 在分批過程中，蛋白的鹽溶解在約5℃到約75℃溫度進行，優(yōu)選地伴隨攪拌以減少溶解時間，通常約10到約60分鐘。優(yōu)選進行溶解以從油籽粕中提取基本上盡可能多的蛋白，由此產(chǎn)生總體高產(chǎn)品產(chǎn)率。
[0036] 選擇約5℃的低溫限度是因為低于此溫度溶解慢得不切實際，而選擇約75℃的優(yōu)選高溫限度是由于某些現(xiàn)有蛋白的變性溫度。
[0037] 在連續(xù)方法中，從油菜油籽粕中提取蛋白以符合實現(xiàn)從油菜油籽粕中連續(xù)提取蛋白的任何方式進行。在一個實施方案中，油菜油籽粕與食品級鹽溶液連續(xù)混合，所述混合物通過管道或導(dǎo)管輸送，其長度和流速使停留時間足以根據(jù)本文所述參數(shù)進行所需提取。在這種連續(xù)過程中，鹽溶解步驟在長達約10分鐘的時間內(nèi)快速進行，優(yōu)選地進行溶解以從油菜油籽粕中提取基本上盡可能多的蛋白。在連續(xù)過程中的溶解在約10℃到約75℃之間，優(yōu)選約15℃到約35℃之間的溫度下進行。
[0038] 所述食品級鹽水溶液通常pH約5到約6.8，優(yōu)選約5.3到約6.2。通過按需要使用任何便利的酸，通常為鹽酸，或者堿，通常為氫氧化鈉，所述鹽溶液的pH可調(diào)節(jié)至約5到約6.8范圍內(nèi)的任何所需值用于提取步驟。
[0039] 在溶解步驟中食品級鹽溶液中油籽粕的濃度可廣泛變化。通常濃度值為約5到約15％w/v。
[0040] 使用鹽水溶液的蛋白提取步驟具有溶解油菜粕中可能存在的脂肪的附加作用，其隨之導(dǎo)致水相中存在脂肪。
[0041] 提取步驟產(chǎn)生的蛋白溶液通常蛋白濃度為約5到約40g/L，優(yōu)選約10到約30g/L。
[0042] 所述鹽水溶液可包含抗氧化劑。所述抗氧化劑可為任何便利的抗氧化劑，例如亞硫酸鈉或抗壞血酸。使用的抗氧化劑的量可在溶液的約0.01到約1wt％之間變化，優(yōu)選約0.05wt％。所述抗氧化劑用于抑制蛋白溶液中酚的氧化。
[0043] 然后提取步驟產(chǎn)生的水相可以任何便利的方式從殘余油菜粕中分離，例如通過使用沉降式離心機，然后通過圓盤離心和/或過濾去除殘余粕。分離的殘余粕可干燥棄用。
[0044] 最終油菜蛋白分離物的顏色可改進為淺色或淡黃色，其通過將粉末活性碳或其它色素吸附劑與分離的蛋白水溶液混合，隨后通過過濾方便地去除吸附劑，以提供蛋白溶液。滲濾也可用于去除色素。
[0045] 這種色素去除步驟可使用任何合適的色素吸附劑在任何便利的條件下進行，通常在分離的蛋白水溶液的環(huán)境溫度下進行。對于粉末活性碳，使用的量為約0.025％到約5％w/v，優(yōu)選約0.05％到約2％w/V。
[0046] 如美國專利5,844,086和6,005,076所述，當(dāng)油菜籽粕包含大量脂肪時，則其中所述的脫脂步驟可在下述分離的蛋白水溶液和濃縮的蛋白水溶液中進行，所述專利申請轉(zhuǎn)讓給其受讓人，且其公開通過引用結(jié)合到本文中。當(dāng)進行顏色改進步驟時，該步驟可在第一次脫脂步驟之后進行。
[0047] 作為使用鹽水溶液提取油籽粕的一種替代，可單獨使用水進行提取，雖然單獨使用水傾向于比鹽水溶液從油籽粕中提取的蛋白少。當(dāng)使用該替代時，為了在下述濃縮步驟中保持溶液中的蛋白，在蛋白溶液從殘余油籽粕中分離后可加入上述濃度的鹽。當(dāng)進行第一次脫脂步驟時，通常在該操作完成后加入鹽。
[0048] 另一種替代方法為使用高于約6.8的相對高pH值的食品級鹽溶液提取油籽粕，通常高達約9.9。食品級鹽溶液的pH可使用任何便利的食品級堿，例如氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)至所需堿性值。備選地，可使用低于約pH5的相對低pH的鹽溶液提取油籽粕，通常低至約pH3。當(dāng)使用該替代時，則油籽粕提取步驟產(chǎn)生的水相以任何便利的方式從殘余油菜粕中分離，例如通過使用沉降式離心，然后通過圓盤離心和/或過濾去除殘余粕。分離的殘余粕可干燥棄用。
[0049] 然后高或低pH提取步驟產(chǎn)生的蛋白水溶液在下述進一步處理之前如上所述調(diào)節(jié)pH至約5到約6.8的范圍，優(yōu)選約5.3到約6.2的范圍。視情況可使用任何便利的酸，例如鹽酸，或者堿，例如氫氧化鈉，進行該pH調(diào)節(jié)。
[0050] 濃縮蛋白水溶液以提高其蛋白濃度，同時保持其離子強度基本恒定。通常進行該濃縮以產(chǎn)生濃縮的蛋白溶液，其蛋白濃度至少約50g/L，優(yōu)選至少約200g/L，更優(yōu)選至少約250g/L。
[0051] 濃縮步驟可根據(jù)分批或連續(xù)操作以任何便利的方式進行，例如通過使用任何便利的選擇性膜技術(shù)，例如超濾或滲濾，使用的膜例如中空纖維膜或螺旋卷式膜，其根據(jù)不同膜材料和構(gòu)造具有合適的分子量截斷值，例如約3,000到約100,000道爾頓，優(yōu)選約5,000到約10,000道爾頓，并且對于連續(xù)操作，其尺寸允許所需的濃度級別使蛋白水溶液通過膜。
[0052] 眾所周知，超濾和類似的選擇性膜技術(shù)允許低分子量種類通過膜同時防止高分子量種類通過膜。低分子量種類不僅包括食品級鹽的離子種類，而且包括從原料中提取的低分子量物質(zhì)，例如糖類、色素和抗?fàn)I養(yǎng)因子，以及蛋白的任何低分子量形式。根據(jù)不同膜材料和構(gòu)造，通常選擇膜的分子量截斷值以確保在溶液中保留蛋白的大部分，同時允許雜質(zhì)通過。
[0053] 然后使用與提取溶液相同極性和pH的鹽水溶液對濃縮蛋白溶液進行滲濾步驟。所述滲濾可使用約2到約20體積的滲濾溶液，優(yōu)選約5到約10體積的滲濾溶液進行。在滲濾操作中，通過使?jié)B透物穿過膜從蛋白水溶液中去除更多雜質(zhì)?？蛇M行該滲濾操作直至滲透物中不含明顯更多雜質(zhì)和可見顏色?？墒褂门c濃縮步驟相同的膜進行所述滲濾。但是，如果需要，可使用具有不同分子量截斷值的單獨的膜進行所述滲濾步驟，例如根據(jù)不同膜材料和構(gòu)造，使用分子量截斷值范圍在約3,000到約100,000道爾頓，優(yōu)選約5,000到約
10,000道爾頓的膜。
[0054] 在至少部分滲濾步驟中在滲濾介質(zhì)中可存在抗氧化劑。所述抗氧化劑可為任何便利的抗氧化劑，例如亞硫酸鈉或抗壞血酸。在滲濾介質(zhì)中使用的抗氧化劑的量取決于使用的材料，可在約0.01到約1wt％之間變化，優(yōu)選約0.05wt％。抗氧化劑用于抑制濃縮油菜蛋白分離物溶液中存在的酚的氧化。
[0055] 濃縮步驟和滲濾步驟可在任何便利的溫度進行，通常約20℃到約60℃，優(yōu)選約20到約30℃，并持續(xù)一段時間以達到所需濃度級別。使用的溫度和其它條件某種程度上取決于進行濃縮使用的膜裝備和所需的溶液蛋白濃度。
[0056] 如果需要，濃縮以及任選滲濾的蛋白溶液可進行進一步脫脂操作，如美國專利5,844,086和6,005,076中所述。
[0057] 濃縮以及任選滲濾的蛋白溶液可進行脫色操作，作為上述脫色操作的替代。此處可使用粉末活性碳以及顆?；钚蕴?GAC)?？捎米黝伾絼┑牧硪环N材料為聚乙烯吡咯烷酮。
[0058] 顏色吸附劑處理步驟可在任何便利的條件下進行，通常在油菜蛋白溶液的環(huán)境溫度。對于粉末活性碳，可用的量為約0.025％到約5％w/v，優(yōu)選約0.05％到約2％w/v。當(dāng)聚乙烯吡咯烷酮用作顏色吸附劑時，可用的量為約0.5％到約5％w/v，優(yōu)選約2％到約3％w/v。顏色吸附劑可通過任何便利的方式從油萊蛋白溶液中去除，例如通過過濾。
[0059] 任選的脫色步驟得到的濃縮以及任選滲濾的蛋白溶液可進行巴氏消毒以減少微生物載量。所述巴氏消毒可在任何所需的巴氏消毒條件下進行。通常，濃縮以及任選滲濾的蛋白溶液加熱至溫度約55℃到70℃，優(yōu)選約60℃到約65℃，持續(xù)時間約10到約15分鐘，優(yōu)選約10分鐘。然后巴氏消毒的濃縮蛋白溶液可冷卻用于下述進一步處理，優(yōu)選冷卻至溫度約25℃到約40℃。
[0060] 取決于濃縮步驟和任選滲濾步驟使用的溫度，以及是否進行巴氏消毒步驟，濃縮蛋白溶液可加熱至溫度至少約20℃，及高達約60℃，優(yōu)選約25℃到約40℃，以降低濃縮蛋白溶液的粘度，以利于進行隨后的稀釋步驟和微膠粒形成。濃縮蛋白溶液不應(yīng)加熱超過一定溫度，在該溫度之上用冷水稀釋不能發(fā)生微膠粒形成。
[0061] 然后濃縮步驟、和任選的滲濾步驟、任選的脫色步驟、任選的巴氏消毒步驟以及任選的脫脂步驟產(chǎn)生的濃縮蛋白溶液被稀釋以進行微膠粒形成，其通過混合該濃縮蛋白溶液與達到所需稀釋程度必需體積的冷水。取決于需要通過微膠粒途徑獲得的油菜蛋白的比例和來自上清液的油菜蛋白的比例，濃縮蛋白溶液的稀釋程度可變化。通常，在較低稀釋水平，較大比例的油菜蛋白保留在水相中。
[0062] 當(dāng)需要通過微膠粒途徑提供最大比例的蛋白時，該濃縮蛋白溶液被稀釋約5倍到約25倍，優(yōu)選約10倍到約20倍。
[0063] 與濃縮蛋白溶液混合的冷水溫度低于約15℃，通常約1℃到約15℃，優(yōu)選低于約10℃，因為在使用的稀釋倍數(shù)下在所述較冷溫度下獲得了蛋白微膠粒團形式的蛋白分離物的改進產(chǎn)率。
[0064] 在分批操作中，濃縮蛋白溶液分批加入到所需體積冷水的靜態(tài)水體中，如上所述。濃縮蛋白溶液的稀釋和隨后離子強度的降低導(dǎo)致以微膠粒形式形成離散蛋白小滴形式的高度關(guān)聯(lián)蛋白分子云狀團。在分批步驟中，蛋白微膠粒允許在冷水水體中沉降以形成聚集的、結(jié)合的、密集的、無定形粘性的類谷蛋白的蛋白微膠粒團(PMM)。沉降可例如通過離心協(xié)助。所述誘導(dǎo)的沉降降低蛋白微膠粒團的液體含量，由此降低含水量，其通常從以微膠粒團總重量計約70％到以重量計約95％降至通常以重量計約50％到以重量計約80％。以此方式降低微膠粒團的含水量也降低微膠粒團的吸收鹽含量，并因此降低干燥分離物的鹽含量。
[0065] 備選地，稀釋操作可連續(xù)進行，其通過使?jié)饪s蛋白溶液連續(xù)通過T形管的一個入口，而稀釋水供應(yīng)到T形管的另一個入口，允許在管中混合來進行。稀釋水供應(yīng)到T形管的速率足以達到所需的濃縮蛋白溶液稀釋程度。
[0066] 濃縮蛋白溶液和稀釋水在管中的混合啟動蛋白微膠粒的形成，且混合物從T形管出口連續(xù)供應(yīng)到沉降容器，當(dāng)充滿時，上清液允許從其中溢出。優(yōu)選地以將液體的波動減至最小的方式將混合物供應(yīng)到沉降容器液體中。
[0067] 在連續(xù)過程中，蛋白微膠粒允許在沉降容器中沉降以形成聚集的、結(jié)合的、密集的、無定形的、粘性的、類谷蛋白的蛋白微膠粒團(PMM)，且該過程持續(xù)直至所需量的PMM積累在沉降容器的底部，然后積累的PMM從沉降容器移除。作為通過沉淀進行沉降的替代，PMM可通過離心連續(xù)分離。
[0068] 根據(jù)從初始粕提取物中回收蛋白微膠粒團形式的蛋白而言，濃縮蛋白溶液至優(yōu)選的至少約200g/L蛋白含量的方法參數(shù)組合和使用約10到約20的稀釋倍數(shù)產(chǎn)生更高的產(chǎn)率，通常是顯著更高的產(chǎn)率，以及根據(jù)蛋白含量而言，其產(chǎn)生比使用上述美國專利所述的任何已知現(xiàn)有技術(shù)的蛋白分離物形成方法獲得的分離物更純的分離物。
[0069] 與分批方法比較，通過使用回收油菜蛋白分離物的連續(xù)方法，對于相同蛋白提取水平，起始蛋白提取步驟可顯著減少時間，并可在提取步驟中使用明顯更高的溫度。另外，在連續(xù)操作中比在分批過程中更少機會污染，產(chǎn)生更高的產(chǎn)品質(zhì)量，并且該方法可在更緊湊的設(shè)備中進行。
[0070] 沉降的PMM從殘余水相或上清液中分離，例如通過將殘余水相從沉降團中傾析或通過離心。PMM可以潮濕形式使用，或者可通過任何便利的技術(shù)，
[0071] 例如噴霧干燥或凍干，干燥成干燥形式。干燥PMM蛋白含量高，超過約90wt％蛋白，優(yōu)選地至少約100wt％蛋白(以N x6.25計算)，并基本上未變性(由差示掃描量熱法確定)。從脂肪油籽粕中分離的干燥PMM也具有低殘留脂肪含量，如果必需，當(dāng)使用美國專利5,844,086和6,005,076的方法時，其可低于約1wt％。
[0072] 如上述美國專利申請10/413,371所述，PMM主要由7S油菜蛋白組成，其蛋白成分組成為約60到98wt％的7S蛋白，約1到約15wt％的12S蛋白和0到約25wt％的2S蛋白。
[0073] 來自PMM形成和沉降步驟的上清液包含大量油菜蛋白，其未在稀釋步驟沉淀，并被處理以從其中回收油菜蛋白分離物。如上述美國專利申請10/413,371所述，源自上清液的油菜蛋白分離物主要由2S油菜蛋白組成，其蛋白成分組成為約60到約95wt％的2S蛋白，約5到約40wt％的7S蛋白和0到約5wt％的12S蛋白。
[0074] 在本發(fā)明中，向上清液中加入鈣鹽，優(yōu)選地為氯化鈣，上清液可以下述方法首先濃縮或部分濃縮，以使傳導(dǎo)率為約5mS到約30mS，優(yōu)選為8mS到約10mS。加到上清液中的氯化鈣可為任何所需形式，例如其濃縮水溶液。
[0075] 加入氯化鈣的作用為以植酸鈣形式從上清液中沉淀植酸，并保留上清液的球蛋白和白蛋白部分。從上清液中去除沉淀的植酸鹽，例如通過離心和/或過濾，以留下澄清溶液。如果需要，可不去除沉淀的植酸鹽，在此情況下，進一步的處理產(chǎn)生具有較高植酸鹽含量的產(chǎn)品。
[0076] 然后該溶液的pH調(diào)節(jié)至約2.0到約4.0，優(yōu)選約2.9到3.2的值。pH調(diào)節(jié)可以任何便利的方法進行，例如通過加入鹽酸。如果需要，該酸化步驟可從本文所述的多種可選方案中刪除。
[0077] 已調(diào)節(jié)pH的澄清溶液，如果尚未濃縮，則濃縮以提高其蛋白濃度。所述濃縮使用任何便利的選擇性膜技術(shù)進行，例如超濾，使用具有合適的分子量截斷值的膜，其允許低分子量種類，包括鹽、糖類、色素和從蛋白原料提取的其它低分子量物質(zhì)通過膜，同時在溶液中保留大部分油菜蛋白。根據(jù)不同膜材料和構(gòu)造，可使用分子量截斷值約3,000到100,000道爾頓，優(yōu)選約5,000到約10,000道爾頓的超濾膜。以這種方式濃縮上清液也減少了干燥以回收蛋白的所需液體體積。在干燥之前，上清液通常濃縮至蛋白濃度至少約50g/L，優(yōu)選約50到約500g/L，更優(yōu)選約100到約250g/L。所述濃縮操作可以分批模式或連續(xù)操作進行，如上述蛋白溶液濃縮步驟所述。
[0078] 當(dāng)上清液在加入鈣鹽之前部分濃縮和去除沉淀之后完全濃縮時，該上清液首先濃縮至蛋白濃度約50g/L或以下，并且在去除沉淀之后，再濃縮至濃度至少約50g/L，優(yōu)選約50到約500g/L，更優(yōu)選約100到約250g/L。
[0079] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述鈣鹽可在兩個階段加入。在此實施方案中，向上清液加入少量鈣以使傳導(dǎo)率為約1mS到約3.5mS，優(yōu)選約1mS到約2mS，其不足以引起沉淀形成。
[0080] 酸化所得到的溶液并在上述條件下部分濃縮。向部分濃縮的溶液中加入剩余的鈣鹽以使傳導(dǎo)率為約4mS到約30mS，優(yōu)選約4到約10mS，以引起沉淀形成。然后去除沉淀。然后在上述條件下濃縮所得到的澄清溶液。
[0081] 然后可用水使?jié)饪s上清液進行滲濾步驟。水可為其天然pH，與所滲濾的蛋白溶液相同的pH，或兩者之間的任意pH。所述滲濾可使用約2到約20體積的滲濾溶液，優(yōu)選約5到約10體積的滲濾溶液進行。在滲濾操作中，通過使?jié)B透物穿過膜從水相上清液中去除更多雜質(zhì)?？蛇M行該滲濾操作直至滲透物中不含明顯更多雜質(zhì)和可見顏色?？墒褂门c濃縮步驟相同的膜進行所述滲濾。但是，如果需要，可使用具有不同分子量截斷值的單獨的膜進行所述滲濾步驟，例如根據(jù)不同膜材料和構(gòu)造，使用分子量截斷值范圍在約3,000到約100,000道爾頓，優(yōu)選約5,000到約10,000道爾頓的膜。
[0082] 在至少部分滲濾步驟中在滲濾介質(zhì)中可存在抗氧化劑。所述抗氧化劑可為任何便利的抗氧化劑，例如亞硫酸鈉或抗壞血酸。在滲濾介質(zhì)中使用的抗氧化劑的量取決于使用的材料，可在約0.01到約1wt％之間變化，優(yōu)選約0.05wt％。抗氧化劑用于抑制濃縮油菜蛋白分離物溶液中存在的酚的氧化。
[0083] 濃縮以及任選滲濾的蛋白溶液可進行脫色操作，作為上述脫色操作的替代。此處可使用粉末活性碳以及顆?；钚蕴?GAC)?？捎米黝伾絼┑牧硪环N材料為聚乙烯吡咯烷酮。
[0084] 顏色吸附劑處理步驟可在任何便利的條件下進行，通常在油菜蛋白溶液的環(huán)境溫度下進行。對于粉末活性碳，可用的量為約0.025％到約5％w/V，優(yōu)選約0.05％到約2％w/v。當(dāng)聚乙烯吡咯烷酮用作顏色吸附劑時，可用的量為約0.5％到約5％w/v，優(yōu)選約2％到約3％w/v。顏色吸附劑可通過任何便利的方式從油菜蛋白溶液中去除，例如通過過濾。
[0085] 濃縮以及任選滲濾和任選脫色處理的蛋白溶液通過任何便利的技術(shù)，例如噴霧干燥或凍干，干燥成干燥形式。干燥的油菜蛋白分離物蛋白含量高，超過約90wt％(N x6.25)d.b.，優(yōu)選至少約100wt％，并基本上未變性(由差示掃描量熱法確定)。該油菜蛋白分離物通常植酸含量低，以重量計通常低于約1.5％。
[0086] 本文生產(chǎn)的油菜蛋白分離物包含白蛋白和球蛋白部分并可溶于酸性水環(huán)境，使該分離物適合添加到碳酸和非碳酸飲料中，以為其提供蛋白強化。此類飲料具有廣泛的酸性pH值范圍，從約2.5到約5。本文提供的油菜蛋白分離物可以任何便利的量添加到此類飲料中以對此類飲料提供蛋白強化，例如每12液盎司量至少約5g該油菜蛋白分離物。加入的油菜蛋白分離物完全溶解于飲料并且不損害飲料的澄清度，即使經(jīng)過熱處理。在通過溶于水還原飲料之前該油菜蛋白分離物可與干飲料混合。實施例
[0087] 實施例1：
[0088] 本實施例描述了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的新穎油菜蛋白分離物的生產(chǎn)，其中向上清液中加入鈣鹽，去除沉淀，然后酸化溶液并進一步處理。
[0089] ‘a(chǎn)’kg的油菜粕在室溫加入到‘b’L的‘c’M NaCl溶液并攪拌30分鐘以產(chǎn)生蛋白水溶液。去除殘余的油菜粕，所得到的蛋白溶液通過離心部分澄清以產(chǎn)生‘d，L的部分澄清的蛋白溶液，其蛋白含量以重量計為‘e’％。過濾部分澄清的蛋白溶液以進一步澄清該蛋白溶液，產(chǎn)生‘f’L體積的溶液，其蛋白含量以重量計為‘g’％。
[0090] ‘h’L等分量的蛋白提取溶液在分子量截斷值為‘j’道爾頓的聚醚砜(PES)膜上濃縮至‘i’。所得到的濃縮蛋白溶液的蛋白含量以重量計為‘k’％。濃縮的蛋白溶液在60℃下經(jīng)巴氏消毒‘1’分鐘以產(chǎn)生‘m’kg的巴氏消毒的濃縮蛋白溶液，其蛋白含量以重量計為‘n’％。
[0091] ‘o’℃下的濃縮溶液以‘p’稀釋到溫度‘q’℃的冷RO水中。白色混濁立即形成并沉降。去除上層稀釋水并通過離心回收沉淀的粘性團(PMM)，產(chǎn)率為過濾蛋白溶液的‘r’wt％。發(fā)現(xiàn)源自干燥PMM的蛋白的蛋白含量為‘s’％(N x625)d.b.。該產(chǎn)物命名為‘t’C307C。
[0092] 下表I中顯示三次運行的參數(shù)‘a(chǎn)’到‘t’：
[0093] 表I
[0094]t BW-SA082-F09-08A BW-SA082-F11-08A BW-SD084-F18-08A
a 20 20 20
b 200 200 200
c 0.15 0.15 0.15
d 161 164 162.5
e 1.41 1.50 1.81
f 172 174 187.8
g 1.14 1.25 1.30
h 172 174 187.8
i 7.45L 8.46kg 9.24kg
j 100,000 100,000 100,0000
k 21.41 21.72 22.51
l 1 0 0
m 7.9
n 20.11
o 30 30 29.2
p 1：15 1：15 1：15
q 4 4 4
r 49.5 48.2 59.4
s 99.31 103.34 102.09
[0095] 然后對PMM沉積產(chǎn)生的上清液進行本申請描述的氯化鈣添加。
[0096] 通過加入氯化鈣調(diào)節(jié)‘u’L上清液至傳導(dǎo)率‘v’mS。然后將該溶液離心和/或過濾以去除沉淀的植酸鹽物質(zhì)，產(chǎn)生‘w’L的減少植酸鹽含量、澄清的蛋白溶液，其蛋白濃度以重量計為‘x’％。然后通過加入HCl調(diào)節(jié)所述減少植酸鹽含量、澄清的蛋白溶液至pH‘y’，并使用分子量截斷值為‘a(chǎn)a’道爾頓的聚醚砜(PES)膜通過超濾減少體積至‘z’L。然后所述濃縮物在相同膜上使用‘a(chǎn)b’體積的pH3反滲透純化(RO)水滲濾。滲濾的濃縮物包含以重量計‘a(chǎn)c’％的蛋白。連同從上清液中回收的其它蛋白，過濾蛋白溶液的總蛋白回收率為‘a(chǎn)d’wt％。所述濃縮物的‘a(chǎn)e’L部分進行脫色步驟，通過將其在pH3下以速率為‘a(chǎn)g’BV/hr通過‘a(chǎn)f’L柱體積(BV)的顆?；钚蕴?。然后脫色且蛋白含量以重量計為‘a(chǎn)i’％的‘a(chǎn)h’L GAC處理的溶液被噴霧干燥并命名為‘t’C200CaC。所述C200CaC的蛋白含量為‘a(chǎn)j’(N x6.25)d.b.。不進行進一步純化步驟，剩余的‘a(chǎn)k’的濃縮物被噴霧干燥以產(chǎn)生命名為‘t’C200Ca的終產(chǎn)物，其蛋白含量為‘a(chǎn)l’％(N x6.25)d.b.。下表II中顯示三次運行的參數(shù)‘t’到‘a(chǎn)l’：
[0097] 表II
[0098]t BW-SA082-F09-08A BW-SA082-F11-08A BW-SD084-F18-08A
u 119 126 137
v 18.69 19.05 8.15
w 115 120 145
x 0.54 0.57 0.35
y 3.06 1.95 3.12
z 5 4.5 5
aa 10,000 10,000 10,000
ab 5 5 5
ac 8.76 11.53 9.13
ad 71.9 72.0 77.0
ae 2.45 2.25 0
af 0.3 0.3
ag 2.5 2.5
ah 2.5 2.35
ai 7.76 10.65
aj 94.52 94.45
ak 2.2L 2.25L 4.74kg
al 93.52 94.04 90.36
[0099] 注—來自運行BW-SA082-F09-08A的滲濾的濃縮處理的上清液在碳處理和干燥之前通過過濾處理。
[0100] 實施例2：
[0101] 本實施例描述了濃縮油菜蛋白溶液的生產(chǎn)，如果不進行進一步處理而干燥，應(yīng)產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的分離物，其中在酸化和進一步處理之前不去除通過向上清液中加入鈣鹽形成的沉淀。
[0102] ‘a(chǎn)’kg的油菜粕在室溫加入到‘b’L的‘c’M NaCl溶液并攪拌30分鐘以產(chǎn)生蛋白水溶液。去除殘余的油菜粕，所得到的蛋白溶液通過離心部分澄清以產(chǎn)生‘d’L的部分澄清的蛋白溶液，其蛋白含量以重量計為‘e’％。過濾部分澄清的蛋白溶液以進一步澄清該蛋白溶液，產(chǎn)生‘f’L體積的溶液，其蛋白含量以重量計為‘g’％?！甴’L等分量的蛋白提取溶液在分子量截斷值為‘j’道爾頓的聚醚砜(PES)膜上濃縮至‘i’kg。所得到的濃縮蛋白溶液的蛋白含量以重量計為‘k’％。該濃縮的蛋白溶液在60℃下巴氏消毒1分鐘以產(chǎn)生‘1’kg的巴氏消毒的濃縮蛋白溶液，其包含以重量計為‘m’％的蛋白含量?！畁’℃下的巴氏消毒的濃縮溶液以‘o’稀釋到溫度‘p’℃的冷RO水中。白色混濁立即形成并沉降。去除上層稀釋水并通過離心回收沉淀的粘性團(PMM)，產(chǎn)率為過濾蛋白溶液的‘q’wt％。發(fā)現(xiàn)源自干燥PMM的蛋白的蛋白含量為‘r’％(N x6.25)d.b.。該產(chǎn)物命名為‘s’C300。下表III中顯示一次運行的參數(shù)‘a(chǎn)’到‘s’：
[0103] 表IIIs
BW-SA077-A23-08A
a 20
b 200
e 0.15
d 144.5
e 1.70
f 150
g 1.41
h l50
i 7.80
j 100,000
k 20.88
l 7.62
m 20.66
n 29.6
o 1：15
p 3.5
q 36+3
r 103.05
[0104] 然后對PMM沉積產(chǎn)生的上清液進行本申請描述的氯化鈣添加。
[0105] 通過加入氯化鈣調(diào)節(jié)‘t’L蛋白含量以重量計為‘u’％的上清液至傳導(dǎo)率‘v’mS，導(dǎo)致混濁形成。然后通過加入HCl調(diào)節(jié)所述蛋白溶液至pH‘w’，且樣品澄清。然后使用分子量截斷值為‘z’道爾頓的聚醚砜(PES)膜通過超濾將‘x’L等分量的該溶液減少體積至‘y’L。然后所述濃縮物在相同膜上使用‘a(chǎn)a’體積的pH3RO水滲濾，獲得包含以重量計‘a(chǎn)c’％蛋白的‘a(chǎn)b’kg滲濾濃縮物。連同從上清液中回收的其它蛋白，過濾蛋白溶液的總蛋白回收率為‘a(chǎn)d’wt％。下表IV中顯示一次運行的參數(shù)‘s’到‘a(chǎn)d’：
[0106] 表IV
[0107]s B W-S A077-A23-08A
t 132.5
u 0.60
v 18.91
w 2.97
x 110
y 5
z 10,000
aa 6
ab 4.6
ac 11.08
ad 60.4
[0108] 實施例3：
[0109] 本實施例描述了濃縮油菜蛋白溶液的生產(chǎn)，如果不進行進一步處理而干燥，應(yīng)產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的分離物，其中向部分濃縮的上清液中加入鈣鹽，去除沉淀并酸化樣品。
[0110] ‘a(chǎn)’kg的油菜粕在室溫加入到‘b’L的‘c’M NaCl溶液并攪拌30分鐘以產(chǎn)生蛋白水溶液。去除殘余的油菜粕，所得到的蛋白溶液通過離心部分澄清以產(chǎn)生‘d’L的部分澄清的蛋白溶液，其蛋白含量以重量計為‘e’％。過濾部分澄清的蛋白溶液以進一步澄清該蛋白溶液，產(chǎn)生‘f’L體積的溶液，其蛋白含量以重量計為‘g’％。
[0111] ‘h’L等分量的蛋白提取溶液在分子量截斷值為‘j’道爾頓的聚醚砜(PES)膜上濃縮至‘i’kg。所得到的濃縮蛋白溶液的蛋白含量以重量計為‘k’％。
[0112] ‘1’℃下的濃縮溶液以‘m’稀釋到溫度‘n’℃的冷RO水中。白色混濁立即形成并沉降。去除上層稀釋水并通過離心回收沉淀的粘性團(PMM)，產(chǎn)率為過濾蛋白溶液的‘o’wt％。發(fā)現(xiàn)源自干燥PMM的蛋白的蛋白含量為‘p’％(N x6.25)d.b.。該產(chǎn)物命名為‘q’C302。
[0113] 下表V中顯示一次運行的參數(shù)‘a(chǎn)’到‘q’：
[0114] 表V
[0115]q B W-SA082-G30-08A
a 60
b 600
c 0.15
d 440
e 1.52
f 505
g 1.49
h 505
i 33.18
j 100,000
k 15.66
l 30.2
m 1：15
n 1.8
o 32.4
p 101.71
[0116] 然后對PMM沉積產(chǎn)生的部分濃縮的上清液進行本申請描述的氯化鈣添加。
[0117] 使用分子量截斷值為‘t’道爾頓的聚醚砜(PES)膜通過超濾將蛋白含量以重量計為‘s’％的‘r’L上清液濃縮至減少系數(shù)為7的體積。然后體積為‘u’L、蛋白含量以重量計為‘v’％的部分濃縮的上清液通過加入以蛋白重量計3.5％的氯化鈣調(diào)節(jié)至傳導(dǎo)率‘w’mS，導(dǎo)致混濁形成。然后將該溶液離心和/或過濾以去除沉淀的植酸鹽物質(zhì)，產(chǎn)生‘x’L減少植酸鹽含量、澄清的、部分濃縮的蛋白溶液，其蛋白含量以重量計為‘y’％。然后通過加入HCl調(diào)節(jié)所述減少植酸鹽含量、澄清的、部分濃縮的蛋白溶液至pH‘z’，并使用與用于初始濃縮上清液的相同的膜通過超濾進一步濃縮至‘a(chǎn)a’L。然后所述濃縮溶液在相同膜上使用‘a(chǎn)b’體積的pH3RO水滲濾。滲濾的保留物澄清，重量為‘a(chǎn)c’kg，蛋白含量以重量計為‘a(chǎn)d’％，產(chǎn)生過濾蛋白溶液的產(chǎn)率為‘a(chǎn)e’wt％。
[0118] 下表VI中顯示一次運行的參數(shù)‘r’到‘a(chǎn)e’：
[0119] 表VI
[0120]p BW-SA082-G30-08A
r 511
s 0.54
t 10,000
u 72
v 2.70
w 2.32
x 72
y 2.49
z 3.14
aa 25
ab 5.6
ac 20.24
ad 8.05
ae 54.1
[0121] 實施例4：
[0122] 本實施例描述了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的油萊蛋白分離物的生產(chǎn)，其中向上清液以及部分濃縮的上清液中加入鈣鹽，并在第二次添加之后去除形成的沉淀。
[0123] ‘a(chǎn)’kg的油菜粕在室溫加入到‘b’L的‘c’M NaCl溶液并攪拌30分鐘以產(chǎn)生蛋白水溶液。去除殘余的油菜粕，所得到的蛋白溶液通過離心部分澄清以產(chǎn)生‘d’L的部分澄清的蛋白溶液，其蛋白含量以重量計為‘e’％。過濾該部分澄清的蛋白溶液以進一步澄清該蛋白溶液，產(chǎn)生‘f’L體積的溶液，其蛋白含量以重量計為‘g’％。
[0124] ‘h’L等分量的蛋白提取溶液在分子量截斷值為‘j’道爾頓的聚醚砜(PES)膜上濃縮至‘i’。所得到的濃縮蛋白溶液的蛋白含量以重量計為‘k’％。該濃縮的蛋白溶液在與用于濃縮步驟的相同的膜上使用‘1’體積的‘c’M NaCl滲濾。滲濾的濃縮物包含以重量計‘m’％的蛋白。
[0125] ‘n’℃下的濃縮溶液以‘o’稀釋到溫度‘p’℃的冷RO水中。白色混濁立即形成并沉降。去除上層稀釋水并通過離心回收沉淀的粘性團(PMM)，產(chǎn)率為過濾蛋白溶液的‘q’wt％。發(fā)現(xiàn)源自干燥PMM的蛋白的蛋白含量為‘r’％(N x6.25)d.b.。該產(chǎn)物命名為‘s’C307C。
[0126] 下表VII中顯示兩次運行的參數(shù)‘a(chǎn)’到‘s’：
[0127] 表VII
[0128]s B W-SD084-H27-08A BW-SD084-108-08A
a 20 60
b 200 600
c 0.15 0.15
d 159.4 495
e 1.69 1.77
f 170 520
g 1.39 1.47
h 170 520
i 8.25L 30L
j 100,000 100,000
k 21.39 21.17
l 0 10
m 21.42
n 30.1 29.9
o 1：15 1：15
p 7.5 4.4
q 45.3 43.4
r 101.04 98.52
[0129] 然后對PMM沉積產(chǎn)生的上清液和部分濃縮的上清液進行本申請描述的氯化鈣添加。
[0130] 通過加入以蛋白重量計2.5％的氯化鈣調(diào)節(jié)‘t’L蛋白含量以重量計為‘u’％的上清液至傳導(dǎo)率‘v’mS，未形成混濁。然后通過加入HCl調(diào)節(jié)所述溶液至pH‘w’。使用分子量截斷值為‘y’道爾頓的聚醚砜(PES)膜通過超濾將‘x’L的氯化鈣處理并調(diào)節(jié)pH后的上清液濃縮至減少系數(shù)為7的體積。然后體積為‘z’L、蛋白含量以重量計為‘a(chǎn)a’％的部分濃縮的上清液通過加入以蛋白重量計2.5％的氯化鈣調(diào)節(jié)至傳導(dǎo)率‘a(chǎn)b’mS，導(dǎo)致混濁形成。然后將該溶液離心和/或過濾以去除沉淀物質(zhì)，產(chǎn)生‘a(chǎn)c’L澄清的、部分濃縮的蛋白溶液，其蛋白含量以重量計為‘a(chǎn)d’％。然后使用與用于初始濃縮上清液的相同的膜通過超濾將所述澄清的、部分濃縮的蛋白溶液進一步濃縮至‘a(chǎn)e’L。然后所述濃縮溶液在相同膜上使用‘a(chǎn)f’體積的pH3RO水滲濾。滲濾的濃縮物包含以重量計‘a(chǎn)g’％的蛋白。連同從上清液中回收的其它蛋白，過濾蛋白溶液的總蛋白回收率為‘a(chǎn)h’wt％。‘a(chǎn)i’kg等分量的濃縮物進行脫色步驟，通過將其在pH3下以速率為‘a(chǎn)k’BV/hr通過‘a(chǎn)j’L BV的顆?；钚蕴歼M行。然后脫色且蛋白含量以重量計為‘a(chǎn)m’％的‘a(chǎn)l’kgGAC處理后的溶液被噴霧干燥并命名為‘s’C200CaC。所述C200CaC的蛋白含量為‘a(chǎn)n’％wt(N x6.25)d.b.。不進行進一步純化步驟，剩余的‘a(chǎn)o’的濃縮物被噴霧干燥以產(chǎn)生命名為‘s’C200Ca的終產(chǎn)物，其蛋白含量為‘a(chǎn)p’％(N x6.25)d.b.。
[0131] 下表VIII中顯示兩次運行的參數(shù)‘s’到‘a(chǎn)p’：
[0132] 表VIII
[0133]s BW-SD084-H27-08A BW-SD084-I08-08A
t 133 473
u 0.58 0.63
v 1.22 1.10
w 3.11 3.07
x 143 451
y 10,000 10,000
z 29 64
aa 2.93 4.29
ab 4.44 4.64
ac 27
ad 2.27 3.96
ae 5 25
af 5 5
ag 9.44 8.00
ah 63.6 70.7
ai 0 25.46
aj 2.5
ak 2.5
al 26.0
am 6.32
an 96.85
ao 4.6 0
ap 91.23
[0134] 實施例5：
[0135] 本實施例描述了根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的新穎油菜蛋白分離物的生產(chǎn)，其中沒有酸化步驟。
[0136] ‘a(chǎn)’克油菜粕在室溫加入到‘b’ml的‘c’M NaCl溶液并攪拌30分鐘以產(chǎn)生蛋白水溶液。去除殘余的油菜粕，所得到的蛋白溶液通過離心和過濾澄清以產(chǎn)生‘d’ml的蛋白溶液，其蛋白含量以重量計為‘e’％。‘f’ml等分量的蛋白提取溶液通過在分子量截斷值為‘h’道爾頓的纖維素膜上濃縮減少體積至‘g’ml。所得到的濃縮蛋白溶液的蛋白含量以重量計為‘i’％。
[0137] ‘j’℃下的濃縮溶液以‘k’稀釋到溫度‘1’℃的冷RO水中。白色混濁立即形成并沉降。去除上層稀釋水并通過離心回收沉淀的粘性團(PMM)。發(fā)現(xiàn)源自干燥PMM的蛋白的蛋白含量為‘m’％(N x6.25)d.b.。
[0138] 下表IX中顯示該次運行的參數(shù)‘a(chǎn)’到‘m’：
[0139] 表IX
[0140]
a 150
b 1500
c 0.15
d 1200
e 1.29
f 1200
g 95
h 10,000
i 11.39
j 30
k 1：15
l 4
m 103％
[0141] 然后對該上清液進行本申請描述的氯化鈣添加。
[0142] 通過加入氯化鈣濃縮溶液調(diào)節(jié)‘n’ml上清液至傳導(dǎo)率‘o’mS。然后將該溶液離心和/或過濾以去除沉淀的植酸鹽物質(zhì)，產(chǎn)生‘p’ml減少植酸鹽含量、澄清的蛋白溶液，其濃度以重量計為‘q’％。然后使用分子量截斷值為‘s’道爾頓的纖維素膜通過超濾將所述減少植酸鹽含量、澄清的上清液減少體積至‘r’ml。然后該濃縮物在相同膜上使用‘t’體積的水滲濾。該滲濾的濃縮物包含以重量計‘u’％的蛋白，且體積為‘v’ml。不進行進一步純化步驟，該溶液被凍干以形成終產(chǎn)物，其蛋白含量為‘w’％(N x6.25)d.b.。下表X中顯示該次運行的參數(shù)‘n’到‘w’：
[0143] 表Xn 1400
o 9
p 1350
q 0.30
r 60
s 10.000
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