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一種抗甲氰菊酯單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用

閱讀：328發(fā)布：2020-05-13

專利匯可以提供一種抗甲氰菊酯單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用專利檢索，專利查詢，專利分析的服務(wù)。并且本 發(fā)明 涉及一種抗甲氰菊酯單克隆 抗體 及其制備方法與應(yīng)用；一種抗甲氰菊酯單克隆抗體其抗體重鏈可變區(qū) 氨 基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，其輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；與 現(xiàn)有技術(shù) 相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：1)抗體性能突出；與其他擬 除蟲菊 酯 類 殺蟲劑 的交叉反應(yīng)可忽略不計； 檢測限 (IC10，LOD)為0.4ng/mL，優(yōu)于目前已報道的甲氰菊酯抗體；2) 試紙 條特異、靈敏、簡便、快速；無需任何其他輔助儀器，可現(xiàn)場操作，只要將檢測樣加入樣品墊，在5至10分鐘內(nèi)即可判定檢測結(jié)果；3)結(jié)果顯示形象、直觀、準(zhǔn)確：4)節(jié)省 費(fèi)用 ，適用范圍廣，便于推廣應(yīng)用，具有廣闊的市場前景和明顯的經(jīng)濟(jì)和社會效益。，下面是一種抗甲氰菊酯單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用專利的具體信息內(nèi)容。

1.一種抗甲氰菊酯單克隆抗體，其特征在于：其抗體重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，其輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。
2.一種抗甲氰菊酯單克隆抗體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：(1)由免疫半抗原偶聯(lián)BSA制備得到免疫原；
(2)用免疫原免疫BALB/c小鼠，并選擇所得效價最高的小鼠脾臟細(xì)胞；
(3)將骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與所述(2)中所得效價最高的小鼠脾臟細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合制備得到雜交瘤細(xì)胞；
(4)通過篩選和亞克隆得到能穩(wěn)定分泌抗甲氰菊酯單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；再將該雜交瘤細(xì)胞株注射小鼠腹內(nèi)制得腹水；
(5)采用Protein?A純化小鼠腹水，得到抗甲氰菊酯單克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抗甲氰菊酯單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述(1)中免疫半抗原偶聯(lián)BSA的分子式為
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抗甲氰菊酯單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述免疫原的免疫劑量為100μg/只，共免疫5次；首次免疫由等體積的免疫原和弗氏完全佐劑乳化，腹腔注射，之后用等體積免疫抗原和弗氏不完全佐劑乳化；從第三次免疫開始，每次免疫后尾靜脈采血，測定效價。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抗甲氰菊酯單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述效價最高的小鼠脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0的比例為10：1。
6.一種基于權(quán)利要求1-4所述的抗甲氰菊酯單克隆抗體在膠體金試紙上的應(yīng)用。

說明書全文

一種抗甲氰菊酯單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用

技術(shù)領(lǐng)域

[0001] 本發(fā)明涉及農(nóng)藥殘留免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗甲氰菊酯單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

[0002] 甲氰菊酯(Fenpropathrin)是一種擬除蟲菊酯類殺蟲殺螨劑，中等毒性，具有觸殺、胃毒和一定的驅(qū)避作用，無內(nèi)吸、熏蒸作用。其屬神經(jīng)毒劑，作用于昆蟲的神經(jīng)系統(tǒng)，使昆蟲過度興奮、麻痹而死亡。該藥適用作物非常廣泛，常使用于蘋果、柑橘、荔枝、桃樹、栗樹等果樹及棉花、茶樹、十字花科蔬菜、瓜果類蔬菜、花卉等植物，主要用于防治葉螨類、癭螨類、菜青蟲、小菜蛾、甜菜夜蛾、棉鈴蟲、紅鈴蟲、茶尺蠖、小綠葉蟬、潛葉蛾、食心蟲、卷升蛾、蚜蟲、白粉虱、薊馬及盲椿類等多種害蟲、害螨。
[0003] 目前，甲氰菊酯的檢測方法主要是儀器分析方法，包括氣相色譜法(Gas?chromatography，GC)和氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS)等。然而，這一類儀器檢測方法通常需要貴重的儀器設(shè)備，并只能在實(shí)驗室中進(jìn)行。與儀器分析方法相比，免疫檢測方法因其簡便、經(jīng)濟(jì)、快速等優(yōu)點(diǎn)而在農(nóng)藥殘留檢測領(lǐng)域中受到越來越多的關(guān)注。
[0004] ELISA(Enzyme?Linked?Immunosorbent?Assay)方法是常用的免疫檢測方法，但是其卻有操作步驟相對較多，檢測時間較長，檢測結(jié)果不夠直觀，不能在線進(jìn)行檢測等缺陷。因而ELISA在甲氰菊酯的快速檢測上的應(yīng)用受到很大的限制。膠體金試紙條無需專業(yè)操作人員及任何輔助類儀器，根據(jù)反應(yīng)所顯現(xiàn)的條帶幾分鐘即可判定結(jié)果，不僅操作簡便、快速，且結(jié)果直觀準(zhǔn)確、成本低。但是，目前已報道的甲氰菊酯的單克隆抗體的特異性不強(qiáng)，基于該抗體制備的膠體金試紙條在試劑應(yīng)用中應(yīng)產(chǎn)生假陽性。

發(fā)明內(nèi)容

[0005] 本發(fā)明目的是：提供一種抗甲氰菊酯單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種抗甲氰菊酯單克隆抗體，其抗體重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，其輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。
[0007] 本發(fā)明還提供了一種抗甲氰菊酯單克隆抗體的制備方法，包括以下步驟：(1)由免疫半抗原偶聯(lián)BSA制備得到免疫原；
[0008] (2)用免疫原免疫BALB/c小鼠，并選擇所得效價最高的小鼠脾臟細(xì)胞；
[0009] (3)將骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與所述(2)中所得效價最高的小鼠脾臟細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合制備得到雜交瘤細(xì)胞；
[0010] (4)通過篩選和亞克隆得到能穩(wěn)定分泌抗甲氰菊酯單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；再將該雜交瘤細(xì)胞株注射小鼠腹內(nèi)制得腹水；
[0011] (5)采用Protein?A純化小鼠腹水，得到抗甲氰菊酯單克隆抗體。
[0012] 進(jìn)一步的：所述(1)中免疫半抗原偶聯(lián)BSA的分子式為。
[0013] 進(jìn)一步的：所述免疫原的免疫劑量為100μg/只，共免疫5次；首次免疫由等體積的免疫原和弗氏完全佐劑乳化，腹腔注射，之后用等體積免疫抗原和弗氏不完全佐劑乳化；從第三次免疫開始，每次免疫后尾靜脈采血，測定效價。
[0014] 進(jìn)一步的：所述效價最高的小鼠脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0的比例為10：1。
[0015] 另外，本發(fā)明還涉及一種基于上述技術(shù)方案的的抗甲氰菊酯單克隆抗體在膠體金試紙上的應(yīng)用。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：
[0017] 1)抗體性能突出：本發(fā)明提供的甲氰菊酯單克隆抗體特異性識別甲氰菊酯，與其他擬除蟲菊酯類殺蟲劑的交叉反應(yīng)可忽略不計；利用本發(fā)明提供的抗甲氰菊酯抗體實(shí)現(xiàn)的競爭ELISA的抑制中濃度(IC50)為4.5ng/mL，檢測限(IC10，LOD)為0.4ng/mL，優(yōu)于目前已報道的甲氰菊酯抗體。
[0018] 2)試紙條特異、靈敏、簡便、快速：膠體金試紙條很好的保留了單克隆抗體的特性，具有較強(qiáng)的特異性和較高的敏感性，檢出最低限量為5ng/mL；無需任何其他輔助儀器，可現(xiàn)場操作，只要將檢測樣加入樣品墊，在5至10分鐘內(nèi)即可判定檢測結(jié)果。
[0019] 3)結(jié)果顯示形象、直觀、準(zhǔn)確：膠體金試紙條的檢測結(jié)果以纖維素膜上的顯色情況來判斷，結(jié)果判定形象、直觀、準(zhǔn)確、簡單明了。
[0020] 4)節(jié)省費(fèi)用，適用范圍廣，便于推廣：使用膠體金試紙條進(jìn)行檢測，比使用儀器和ELISA試劑盒檢測進(jìn)行檢測的費(fèi)用大幅降低；試紙條的使用范圍廣，可滿足不同層次人員的需要，便于推廣應(yīng)用，具有廣闊的市場前景和明顯的經(jīng)濟(jì)和社會效益。附圖說明
[0021] 下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述：
[0022] 圖1為本發(fā)明中甲氰菊酯膠體金檢測試紙條俯瞰結(jié)構(gòu)示意圖；
[0023] 圖2未本發(fā)明中甲氰菊酯膠體金測試紙條剖面結(jié)構(gòu)示意圖；
[0024] 其中：1、襯板；2、樣品墊；3、金標(biāo)結(jié)合物墊；4、纖維素膜；5、檢測線；6、對照線；7、吸水墊；8-1、樣品浸入端保護(hù)膜；8-2、手柄端保護(hù)膜；9、標(biāo)識線；
[0025] 圖3為本發(fā)明中甲氰菊酯膠體金檢測試紙條結(jié)果判定示意圖；
[0026] 圖中，A為陰性樣品檢測結(jié)果，B為弱陽性樣品檢測結(jié)果，C為強(qiáng)陽性樣品檢測結(jié)果，D和E為試紙條失效。

具體實(shí)施方式

[0027] 實(shí)施例：1、甲氰菊酯半抗原的合成
[0028] 氰基[3-(4-硝基苯氧基)苯基]甲基-2,2,3,3-四甲基環(huán)丙烷羧酸酯的合成。2mmol?3-(4-硝基苯氧基)苯甲醛溶解在2mL預(yù)冷的二氯甲烷中，一次性攪拌加入冰浴的2mL含有
2mmol?2,2,3,3-四甲基環(huán)丙烷甲酰氯的二氯甲烷，立即加入0.18mL吡啶，并攪拌。緩慢升到室溫后攪拌反應(yīng)2h。使用3N?HCl酸化后，用水洗兩次，通過3g硅膠過濾，25mL二氯甲烷洗脫后去除郵寄溶劑，獲得黃色油狀物。
[0029] 氰基[3-(4-氨基苯氧基)苯基]甲基-2,2,3,3-四甲基環(huán)丙烷羧酸酯的合成。將0.75mmol氰基[3-(4-硝基苯氧基)苯基]甲基-2,2,3,3-四甲基環(huán)丙烷羧酸酯溶解在3mL乙醇，攪拌加入3.7mmol氯化錫。70℃反應(yīng)35min，加入10mL含有0.7g硅藻土和0.72g?KHCO3的水。過濾后用乙酸乙酯萃取固體，去除有機(jī)溶劑后得到紅色膠狀物。經(jīng)硅膠純化后得到黃色膠狀物。
[0030] 2、甲氰菊酯半抗原與載體蛋白偶聯(lián)
[0031] 將0.1mmol半抗原溶解在1mL1?M?HCl溶液中，冰浴攪拌下加入0.5mL?NaNO2水溶液(14mg/mL)。加入0.3mL?DMF后攪拌10min。將溶液平均分成兩份(大約0.9mL)，分別加入到20mL含有KLH(免疫原，131mg)和BSA(包被原，103mg)的冰浴遇冷的硼酸緩沖液(0.2M,pH8.9)中，冰浴條件下攪拌反應(yīng)30min。反應(yīng)結(jié)束后使用1M的NaOH將溶液(黃色)的pH值調(diào)至
7.0。加入等體積(20.9mL)冰浴預(yù)冷的丙酮，3000g離心10min。使用5mL冰浴預(yù)冷的丙酮對沉淀物洗3次。沉淀物溶解在10mL水中，儲存在-20℃。
[0032] 3、抗甲氰菊酯單克隆抗體的制備
[0033] 以100μg每只的抗原量免疫6～8周齡健康的雌性BALB/c小鼠。每次間隔時間為2～3周，最后一次超強(qiáng)免疫后3天，無菌條件下取出小鼠脾細(xì)胞，將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0以10：1的細(xì)胞數(shù)量用PEG介導(dǎo)的方法融合。融合后置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)至細(xì)胞長滿培養(yǎng)孔1/3～1/2時，用間接競爭ELISA法選擇強(qiáng)陽性、抑制率高、細(xì)胞生長旺盛的孔進(jìn)行3次亞克隆，然后擴(kuò)大培養(yǎng)，建立雜交瘤細(xì)胞株。使用特異性的細(xì)胞株制備腹水并用Protein?A進(jìn)行抗體純化，之后用超濾離心管去鹽，冷凍抽干獲得干粉狀抗體，并于-20℃凍存?zhèn)溆谩?br>
[0034] 4、抗體可變區(qū)氨基酸序列的測定
[0035] 4.1提取mRNA
[0036] (1)收集細(xì)胞瓶里的雜交瘤細(xì)胞，棄上清，加TRIZOL試劑1ml，立即吹打。(觀察：液體變粘稠，細(xì)胞脫壁)。
[0037] (2)將各孔內(nèi)消化好的細(xì)胞裂解液吸到一DEPC處理過的1.5ml?EP管中，加新開的氯仿0.2ml，輕搖20秒。
[0038] (3)室溫靜置5分鐘后，12000rpm，15min，4℃，離心。然后取上清無色水相到EP管(DEPC處理過)，加等體積新開的異丙醇，顛倒離心管數(shù)次，混勻后室溫下靜置10分鐘。
[0039] (4)12000rpm，10分鐘，4℃，離心。觀察總RNA在管底的白色沉淀，棄去上清，75％乙醇1.0ml洗滌(用DEPC水新配制)后，7500rpm，5min，4℃離心，重復(fù)兩次洗滌。
[0040] (5)去上清，點(diǎn)離，用小Tip吸干液體。氣干沉淀5-10分鐘，DEPC處理水20-30ul加入，中槍打勻，55-60℃水浴10分鐘溶解總RNA，測OD值。
[0041] (6)1.2％瓊脂糖電泳,155，30min。
[0042] 4.2反轉(zhuǎn)錄
[0043] 用PrimeScriptTM?RT?reagent?Kit?with?gDNA?Eraser試劑盒(TaKaRa)反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，-20℃凍存。
[0044] 4.3DNA片段擴(kuò)增及測序
[0045] 用Trans-Tap酶試劑盒(北京全式金生物有限公司)，以cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到目的DNA片段，進(jìn)行測序(北京六合華大基因科技股份有限公司上海分公司)。
[0046] PCR條件：
[0047] 輕鏈：95℃，5min---94℃，30s---49℃，30s---72℃，30s---重復(fù)循環(huán)30次---72℃，8min---12℃，終止
[0048] 重鏈：95℃，5min---94℃，30s---60℃，30s---72℃，30s---重復(fù)循環(huán)30次---72℃，8min---12℃，終止
[0049] 4.4抗體可變區(qū)氨基酸序列的確定
[0050] 經(jīng)過翻譯序列為：
[0051] (1)抗體重鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。
[0052] (2)抗體輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。
[0053] 5、金標(biāo)抗體和金標(biāo)結(jié)合物墊的制備
[0054] 采用檸檬酸三鈉還原氯金酸的方法，制備平均直徑在40nm的膠體金懸浮液。在回流條件下，把100ml?0.01％的氯金酸溶液加熱至沸騰，不停的攪拌，迅速加入1.1ml?1％的檸檬酸三鈉。當(dāng)反應(yīng)溶液顏色變成葡萄紅色時繼續(xù)加熱攪拌5min。冷卻至室溫后，加入0.05％的疊氮化鈉4℃保存。膠體金在與抗體標(biāo)記前以0.2mol的K2CO3溶液調(diào)到pH為8.2，采用經(jīng)典NaCl滴定法確定30μg抗體標(biāo)記1mL膠體金溶液。然后按最佳標(biāo)記量進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記1小時后，攪拌下加入10％BSA(使最終BSA濃度為1％)，孵育1小時后4℃10000rpm離心25min，并去上清。加入膠體金溶液同體積的2％BSA溶液重懸，4℃10000rpm離心25min，重復(fù)兩次。
最后，用1/5膠體金溶液體積的TB溶液(含3％BSA、3％蔗糖、0.01mol/L硼酸鈉和0.05％疊氮化鈉)重懸，4℃保存。用XYZ-3000三維噴膜儀把4％的BSA溶液以8μL/cm的量噴在玻璃棉上，使用干燥箱42℃干燥50min，再把金標(biāo)記抗體以6μL/cm的量噴在玻璃棉上，干燥箱42℃干燥
50min，真空干燥保存。
[0055] 6、偶聯(lián)抗原和兔抗鼠包被纖維素膜
[0056] 用XYZ-3000三維噴膜儀把濃度為1mg/mL的包被抗原以1.2μL/cm的量噴在纖維素膜的偏下側(cè)，作為檢測線。用XYZ-3000三維噴膜儀把濃度為120μg/L的兔抗鼠IgG以1.2μL/cm的量噴在纖維素膜的偏上側(cè)，作為對照線，兩線間隔5mm。
[0057] 7、快速試紙條的組裝
[0058] 把纖維素膜粘貼在襯板1中間部位上，吸水墊7粘貼在纖維素膜4上側(cè)和纖維素膜4重疊1mm。金標(biāo)結(jié)合物墊3粘貼在纖維素膜4下方重疊1mm。樣品墊2粘貼在金標(biāo)結(jié)合物墊3下方重疊2mm。組裝好的試紙板用斬切機(jī)切成4.08mm寬的試紙條。
[0059] 8、快速檢測試紙條檢測反應(yīng)原理
[0060] 當(dāng)待測樣品溶液加入試紙條或試紙卡測試端后，待測溶液通過虹吸作用帶動待測物及金標(biāo)結(jié)合物墊3中的金標(biāo)抗體一起向纖維素膜4擴(kuò)散，并最終滲入吸水墊7端。在擴(kuò)散過程中，如果樣品中有待測物時，待測物和金標(biāo)抗體結(jié)合，進(jìn)而占據(jù)了金標(biāo)抗體上的抗原結(jié)合點(diǎn)，阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜4上檢測線5(半抗原與載體蛋白的結(jié)合物)的結(jié)合，使檢測線5不顯色或者顯色很弱即表示檢測樣品陽性或者弱陽性；如果樣品中沒有待測樣品時，金標(biāo)抗體在上移過程中，遇檢測線5顯示一條清晰紅線即表示檢測樣品陰性。同樣，金標(biāo)抗體也與纖維素膜4上的對照線6(兔抗鼠IgG)結(jié)合，使對照線6顯紅色。對照線6顏色的有或無分別表示此試紙條的有效或無效。
[0061] 應(yīng)用實(shí)施：1、檢測樣品液的制備
[0062] 蔬菜和水果樣品溶液的預(yù)處理。稱取10g樣品，勻漿后移入50mL離心管中，加入20mL甲醇溶液，渦旋3min，超聲提取10min，4000rpm離心5min，取1mL上清液用工作緩沖液(PBS)稀釋一定倍數(shù)后測定溶液中甲氰菊酯含量。
[0063] 2、檢測及結(jié)果判斷
[0064] 如圖3所示：將膠體金檢測試紙條樣品端插入以上預(yù)處理的待檢測樣品中，插入深度不超過標(biāo)識線9，待測溶液通過虹吸作用帶動待測物及金標(biāo)結(jié)合物墊3中的金標(biāo)抗體一起向纖維素膜4擴(kuò)散，并最終滲入吸水墊7端。在擴(kuò)散過程中，如果樣品中有待測物濃度大于50ng/mL時，阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜4上檢測線5(半抗原與載體蛋白的結(jié)合物)的結(jié)合，使檢測線5不顯色即表示檢測樣品為陽性(如圖3C)；如果樣品中待測物在5～50ng/mL時，阻止部分金標(biāo)抗體與纖維素膜4上檢測線5的結(jié)合，使檢測線5顯示很弱的紅色即表示檢測樣品為弱陽性(如圖3B)；如果樣品中待測物濃度小于5ng/mL時，不能阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜4上檢測線5的結(jié)合，使檢測線5顯示一條清晰紅線即表示檢測樣品為陰性(如圖3A)。同樣，金標(biāo)抗體也與纖維素膜4上的對照線6(兔抗鼠IgG)結(jié)合，使對照線6顯紅色，對照線6顏色的有或無分別表示此試紙條的有效或無效(如圖3A、B、C為有效D、E為無效)。5-10分鐘判定檢測結(jié)果。
[0065] 1.特異性試驗
[0066] 按上述應(yīng)用實(shí)施所述的方法進(jìn)行試驗，將與甲氰菊酯結(jié)構(gòu)相似的八種農(nóng)藥(三氟氯氰菊酯、功夫菊酸、氯氰菊酯、溴氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、氰戊菊酯、醚菊酯和胺菊酯)的標(biāo)準(zhǔn)品配成1000ng/mL，用本發(fā)明試紙條進(jìn)行檢測，纖維素膜4上檢測線5與對照線6呈“||”排列，即甲氰菊酯試紙條與三氟氯氰菊酯、功夫菊酸、氯氰菊酯、溴氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、氰戊菊酯、醚菊酯和胺菊酯這八種農(nóng)藥沒有交叉反應(yīng)。從而可以斷定此試紙條特異性很好，在進(jìn)行檢測時不會受到其他農(nóng)藥的干擾。
[0067] 2.敏感性和均一性試驗
[0068] 按上述應(yīng)用實(shí)施所述的方法進(jìn)行試驗，用本發(fā)明試紙條進(jìn)行檢測200ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、0ng/mL的甲氰菊酯溶液，重復(fù)10次，其中200ng/mL、100ng/mL和50ng/mL的甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品檢測的檢測結(jié)果為纖維素膜4上的對照線6呈一條紅色線，即為陽性；20ng/mL、10ng/mL和5ng/mL的甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品檢測的檢測結(jié)果為纖維素膜4上的對照線6呈一條紅色線，檢測線5呈一條很弱的紅色線，即為弱陽性；2.5ng/mL和0ng/mL的甲氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品檢測的檢測結(jié)果為纖維素膜4上的檢測線5和對照線6呈兩條紅色線。因此本發(fā)明檢測試紙條的靈敏度為5ng/mL。此10次檢測顯色深度均一，檢測結(jié)果顯示一致。
[0069] 3.穩(wěn)定性試驗
[0070] 將試紙條放入鋁鉑袋中真空包裝，并且室溫保存，3個月后各項指標(biāo)均符合上1-2項指標(biāo)，即檢測其他相似農(nóng)藥無交叉反應(yīng)，靈敏度達(dá)5ng/mL，檢測顯色深度均一，反應(yīng)結(jié)果一致。
[0071] 當(dāng)然上述實(shí)施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明主要技術(shù)方案的精神實(shí)質(zhì)所做的修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0072]
[0073]
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