使用酸、堿和蛋白酶處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品制造的氨基酸肥料組合物
閱讀：1發(fā)布：2020-08-10
專利匯可以提供使用酸、堿和蛋白酶處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品制造的氨基酸肥料組合物專利檢索，專利查詢，專利分析的服務(wù)。并且本 發(fā)明 涉及使用酸、 堿 和蛋白酶處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品制造的 氨 基酸 肥料 組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及通過以下步驟制造的氨基酸肥料組合物：使用酸和堿處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品(如 牛 皮、豬皮或牛骨)生產(chǎn)粗膠原肽；然后，使用由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶 水 解 所述粗膠原肽。，下面是使用酸、堿和蛋白酶處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品制造的氨基酸肥料組合物專利的具體信息內(nèi)容。
1.一種通過以下步驟制造的氨基酸肥料組合物，所述步驟包括：
1)通過使用pH1.0-3.0的酸處理以及pH12.0-14.0的堿處理對來自100重量份干燥并粉碎的牛皮、豬皮或牛骨的蛋白質(zhì)進行水解來分離和生產(chǎn)粗膠原肽溶液；
2)使用0.01-0.5重量份由芽孢桿菌屬(Bacillus?sp.)變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶以及0.001-0.1重量份選自于絲氨酸內(nèi)切蛋白酶或外肽酶中的至少一種蛋白酶將得到的粗膠原肽水解并分解成氨基酸水平；以及
3)在中和所得到的氨基酸溶液后，通過向經(jīng)中和的氨基酸溶液加入0.001-1.0重量份選自于鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽或磷酸鹽中的至少一種水溶性無機鹽，得到液相氨基酸肥料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基酸肥料組合物，其中，所述肥料組合物中的氨基酸總量為
38-50wt％；主要氨基酸量包括占總肥料組合物的8-11wt％的甘氨酸、5.0-7.0wt％的脯氨酸、3.5-5.0wt％的丙氨酸、3.0-4.5wt％的谷氨酸、2.5-3.5wt％的精氨酸、1.8-2.5wt％的天冬氨酸、2.5-3.5wt％的亮氨酸、1.0-1.5wt％的纈氨酸和1.0-1.5wt％的異亮氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基酸肥料組合物，其中，所述芽孢桿菌屬變種Iren-101通過以下分離步驟得到，所述分離步驟包括：
選擇在土壤中存活的顯示出最高的膠原同化特性的芽孢桿菌屬菌株；
用亞硝基胍(NTG)來突變菌株基因，用于選擇顯示出最高的膠原同化特性的變種；以及在超過3次傳代培養(yǎng)后，分離芽孢桿菌屬變種Iren-101。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基酸肥料組合物，其中，與未施用的草莓相比，施用30-
100ppm所述氨基酸肥料組合物的草莓增加了20-30％的果實數(shù)量、5-10％的果實重量、10-
20％的果實體積和5-10％的果實糖含量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基酸肥料組合物，其中，與未施用的生菜相比，施用5-50ppm所述氨基酸肥料組合物的生菜增加了25-40％的葉長、10-20％的葉寬和20-30％的葉綠素指數(shù)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基酸肥料組合物，其中，所述氨基酸肥料組合物中的天冬氨酸和谷氨酸有效克服由寒冷天氣和作物缺乏陽光所引起的生理紊亂；甘氨酸、丙氨酸和亮氨酸增加作物的糖含量；精氨酸提高作物的病原微生物抗性。
使用酸、堿和蛋白酶處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品制造的氨基酸肥
料組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及使用酸、堿和蛋白酶處理從畜牧養(yǎng)殖(livestock?farming)副產(chǎn)品制造的氨基酸肥料組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及通過以下步驟制造的氨基酸肥料組合物，所述步驟包括：使用酸和堿處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品(如牛皮、豬皮或牛骨)分離和生產(chǎn)粗膠原肽；使用由芽孢桿菌屬(Bacillus?sp.)變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶水解得到的粗膠原肽；以及得到氨基酸水平的肥料組合物。
背景技術(shù)
[0002] 最近，氨基酸肥料已被市售用于為作物提供足夠的氨基酸營養(yǎng)。此外，它已被認為是通過提高氮效率來促進作物生長的有效產(chǎn)品。
[0006] 韓國專利No.10-1341721“用于從魚副產(chǎn)品制造氨基酸肥料組合物的方法”涉及利用魚加工工序中產(chǎn)生的魚副產(chǎn)品來制造氨基酸肥料組合物的方法，公開了從魚副產(chǎn)品制造氨基酸肥料組合物以及高分子膠原和低分子膠原肽。此外，公開了利用廢棄的魚副產(chǎn)品來經(jīng)濟地制造富含氨基酸的肥料組合物以及高分子膠原和低分子膠原肽。
[0007] 但是，該專利文獻公開的方法主要公開的是通過酸和堿處理從魚副產(chǎn)品制造水解的膠原肽的方法，并沒有具體公開從膠原肽進一步水解為氨基酸水平而制造氨基酸液相肥料的步驟。
[0008] 由于僅對魚副產(chǎn)品進行酸或堿水解處理不能分解膠原蛋白或膠原肽中的交聯(lián)鍵(例如二硫鍵)，所以若不經(jīng)過進一步水解處理，就不能實現(xiàn)水解至氨基酸水平。此外，使用普通的蛋白水解酶(例如胃蛋白酶或胰蛋白酶)難以實現(xiàn)水解至氨基酸水平。
發(fā)明內(nèi)容
[0009] 因此，本發(fā)明的發(fā)明人試圖開發(fā)一種有效的氨基酸肥料組合物，其中，使用由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶將膠原蛋白分解成氨基酸水平。最后，本發(fā)明通過以下方式完成：使用酸和堿處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品(如牛皮、豬皮或牛骨)分離和生產(chǎn)粗膠原肽；使用由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶水解得到的粗膠原肽；以及得到氨基酸水平的肥料組合物。
[0010] 技術(shù)問題
[0011] 本發(fā)明要解決的問題是開發(fā)一種氨基酸肥料組合物，其中，使用由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶將膠原蛋白分解成氨基酸水平。此外，本發(fā)明還旨在開發(fā)一種有效的氨基酸肥料組合物，所述氨基酸肥料組合物通過以下方式制造：使用酸和堿處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品(如牛皮、豬皮或牛骨)分離和生產(chǎn)粗膠原肽；使用由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶水解得到的粗膠原肽；以及得到氨基酸水平的肥料組合物。
[0012] 解決技術(shù)問題的技術(shù)手段
[0013] 本發(fā)明的目的是提供一種通過以下步驟制造的氨基酸肥料組合物，所述步驟包括：1)通過使用pH?1.0-3.0的酸處理以及pH?12.0-14.0的堿處理對來自100重量份干燥并粉碎的牛皮、豬皮或牛骨的蛋白質(zhì)進行水解來分離和生產(chǎn)粗膠原肽溶液；2)使用0.01-0.5重量份由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶以及0.001-0.1重量份選自于絲氨酸內(nèi)切蛋白酶或外肽酶中的至少一種蛋白酶將得到的粗膠原肽水解并分解成氨基酸水平；以及3)在中和所得到的氨基酸溶液后，通過向經(jīng)中和的氨基酸溶液加入0.001-1.0重量份選自于鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽或磷酸鹽中的至少一種水溶性無機鹽，得到液相氨基酸肥料。
[0014] 此外，所述肥料組合物中的氨基酸總量為38-50wt％；主要氨基酸量包括占總肥料組合物的8-11wt％的甘氨酸、5.0-7.0wt％的脯氨酸、3.5-5.0wt％的丙氨酸、3.0-4.5wt％的谷氨酸、2.5-3.5wt％的精氨酸、1.8-2.5wt％的天冬氨酸、2.5-3.5wt％的亮氨酸、1.0-1.5wt％的纈氨酸和1.0-1.5wt％的異亮氨酸。
[0015] 此外，所述芽孢桿菌屬變種Iren-101可通過以下分離步驟得到，所述分離步驟包括：選擇在土壤中存活的顯示出最高的膠原同化特性(assimilation?property)的芽孢桿菌屬菌株；用亞硝基胍(NTG)來突變菌株基因，用于選擇顯示出最高的膠原同化特性的變種；以及在超過3次傳代培養(yǎng)后，分離芽孢桿菌屬變種Iren-101。
[0016] 另一方面，與未施用的草莓相比，施用30-100ppm所述氨基酸肥料組合物的草莓增加了20-30％的果實數(shù)量、5-10％的果實重量、10-20％的果實體積和5-10％的果實糖含量。
[0017] 此外，與未施用的生菜(lettuce)相比，施用5-50ppm所述氨基酸肥料組合物的生菜增加了25-40％的葉長、10-20％的葉寬和20-30％的葉綠素指數(shù)(chlorophyll?index)。
[0018] 此外，所述氨基酸肥料組合物中的天冬氨酸和谷氨酸可有效克服由寒冷天氣和作物缺乏陽光所引起的生理紊亂；甘氨酸、丙氨酸和亮氨酸可增加作物的糖含量；精氨酸可提高作物的病原微生物抗性。
[0019] 有益效果
[0020] 本發(fā)明突出的有益效果是提供了一種氨基酸肥料組合物，其中，使用由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶將膠原蛋白分解成氨基酸水平。此外，本發(fā)明還提供了一種有效的氨基酸肥料組合物，所述氨基酸肥料組合物通過以下方式制造：使用酸和堿處理從畜牧養(yǎng)殖副產(chǎn)品(如牛皮、豬皮或牛骨)分離和生產(chǎn)粗膠原肽；使用由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶水解得到的粗膠原肽；以及得到氨基酸水平的肥料組合物。附圖說明
[0021] 圖1示出了表明本發(fā)明的制備實施例1中制造的氨基酸肥料中的氨基酸分布的HPLC數(shù)據(jù)。HPLC儀器使用Agilent?HPLC。柱是ZORBAX?Eclipse-AAA柱。洗脫液A是40mM磷酸鹽緩沖液。洗脫液B是甲醇/乙腈/水＝45/45/10的混合溶劑。在10分鐘的保留時間附近檢測到丙氨酸峰，并且在10分鐘至12.5分鐘之間檢測到甘氨酸、谷氨酸和纈氨酸峰。此外，在12.5分鐘的保留時間處檢測到亮氨酸峰。此外，分別在13分鐘和13.5分鐘處檢測到天冬氨酸和脯氨酸峰。
具體實施方式
[0022] 本發(fā)明涉及一種通過以下步驟制造的氨基酸肥料組合物，所述步驟包括：1)通過使用pH?1.0-3.0的酸處理以及pH?12.0-14.0的堿處理對來自100重量份干燥并粉碎的牛皮、豬皮或牛骨的蛋白質(zhì)進行水解來分離和生產(chǎn)粗膠原肽溶液；2)使用0.01-0.5重量份由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶以及0.001-0.1重量份選自于絲氨酸內(nèi)切蛋白酶或外肽酶中的至少一種蛋白酶將得到的粗膠原肽水解并分解成氨基酸水平；以及3)在中和所得到的氨基酸溶液后，通過向經(jīng)中和的氨基酸溶液加入0.001-1.0重量份選自于鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽或磷酸鹽中的至少一種水溶性無機鹽，得到液相氨基酸肥料。
[0023] 此外，所述肥料組合物中的氨基酸總量為38-50wt％；主要氨基酸量包括占總肥料組合物的8-11wt％的甘氨酸、5.0-7.0wt％的脯氨酸、3.5-5.0wt％的丙氨酸、3.0-4.5wt％的谷氨酸、2.5-3.5wt％的精氨酸、1.8-2.5wt％的天冬氨酸、2.5-3.5wt％的亮氨酸、1.0-1.5wt％的纈氨酸和1.0-1.5wt％的異亮氨酸。
[0024] 另一方面，與未施用的草莓相比，施用30-100ppm所述氨基酸肥料組合物的草莓增加了20-30％的果實數(shù)量、5-10％的果實重量、10-20％的果實體積和5-10％的果實糖含量。
[0025] 此外，與未施用的生菜相比，施用5-50ppm所述氨基酸肥料組合物的生菜增加了25-40％的葉長、10-20％的葉寬和20-30％的葉綠素指數(shù)。
[0026] 本發(fā)明可以更具體地解釋如下。
[0027] 本發(fā)明的氨基酸肥料組合物的制造步驟可以詳細說明如下。
[0028] (步驟1)分離和生產(chǎn)粗膠原肽溶液的步驟
[0029] 該制造步驟是通過使用pH?1.0-3.0的酸處理以及pH?12.0-14.0的堿處理對來自100重量份干燥并粉碎的牛皮、豬皮或牛骨的蛋白質(zhì)進行水解來分離和生產(chǎn)粗膠原肽溶液。
[0030] 將200-500重量份純化水加入100重量份牛皮、豬皮或牛骨中后，將混合物用pH?1.0-3.0的HCl溶液處理18-30小時并用pH?12.0-14.0的氫氧化鈉處理18-30小時，以水解并分解蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。在除去反應(yīng)器中的固體殘余物質(zhì)后，可以得到粗膠原肽溶液。
[0031] (步驟2)得到氨基酸溶液的步驟
[0032] 該制造步驟是通過使用0.01-0.5重量份由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶以及0.001-0.1重量份選自于絲氨酸內(nèi)切蛋白酶或外肽酶中的至少一種蛋白酶將步驟1中得到的粗膠原肽水解并分解成氨基酸水平以得到氨基酸溶液。
[0033] 在該步驟中，通過以下分離步驟制造芽孢桿菌屬變種Iren-101，所述分離步驟包括：選擇在土壤中存活的顯示出最高的膠原同化特性的芽孢桿菌屬菌株；用亞硝基胍(NTG)來突變菌株基因，用于選擇顯示出最高的膠原同化特性的變種；以及在超過3次傳代培養(yǎng)后，分離芽孢桿菌屬變種Iren-101。由于芽孢桿菌屬變種Iren-101可以使用膠原作為能源，這意味著該變種可以生產(chǎn)用于有效地水解膠原蛋白的膠原特異性蛋白酶。
[0034] 因此，本發(fā)明使用由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶以及選自于絲氨酸內(nèi)切蛋白酶或外肽酶中的至少一種蛋白酶將粗膠原肽水解并分解成氨基酸水平。
[0035] 優(yōu)選的絲氨酸內(nèi)切蛋白酶可以是可從Novozymes商購的'Alcalase'，而優(yōu)選的外肽酶可以是可從Novozymes商購的'Flavourzyme'。這些絲氨酸內(nèi)切蛋白酶和外肽酶的優(yōu)選量可以是由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶的重量的1/5。
[0036] (步驟3)得到氨基酸肥料的步驟
[0037] 該制造步驟是在中和步驟2中得到的氨基酸溶液后，通過向經(jīng)中和的氨基酸溶液加入0.001-1.0重量份選自于鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽或磷酸鹽中的至少一種水溶性無機鹽，得到液相氨基酸肥料。
[0038] 氨基酸肥料的優(yōu)選pH為6.5-9.0，其可有效防止土壤酸化并恢復(fù)土壤回流阻塞。由于步驟2中制造的氨基酸溶液顯示出弱酸性pH(pH?5.0-6.5)，因此需要通過加入弱堿性堿將該氨基酸溶液中和至pH?6.5-9.0。
[0039] 此外，通過向氨基酸溶液中加入選自于鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽或磷酸鹽中的至少一種水溶性無機鹽，可以提供更有用的植物生長氨基酸肥料。
[0040] 由于本發(fā)明制造的氨基酸肥料組合物通過特定的酶水解完全分解成氨基酸水平，所以該氨基酸肥料組合物可以在室溫下以液相存在，即使它含有38-50wt％的高氨基酸濃度。
[0041] 芽孢桿菌屬變種Iren-101的分離方法和由該變種生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶可以如下詳細解釋。
[0042] 為了選擇生產(chǎn)膠原特異性蛋白酶的菌株，從土壤中采集芽孢桿菌屬菌株。用無菌水稀釋采集的菌株后，將稀釋的菌株涂布在含有20wt％膠原的脫脂乳瓊脂培養(yǎng)基(5g/L含膠原的脫脂乳、10g/L?Bacto胰蛋白胨、5g/L酵母提取物、5g/L?NaCl和5g/L?Bacto瓊脂)上。在30℃培養(yǎng)箱中將菌株在所述培養(yǎng)基上孵育超過15小時后，根據(jù)含膠原的脫脂乳中蛋白質(zhì)的分解，首先從相對大尺寸的透明區(qū)中選擇生長并產(chǎn)生的芽孢桿菌屬菌落。
[0043] 通過亞硝基胍(NTG)突變芽孢桿菌屬菌株后，從顯示最大尺寸的透明區(qū)的菌落中選擇芽孢桿菌屬變種。最后，在傳代培養(yǎng)3次后分離本發(fā)明的生產(chǎn)膠原特異性蛋白酶的芽孢桿菌屬變種Iren-101。
[0044] 在含氮源之一(例如麥芽提取物、酵母提取物、酪蛋白或膠原)的LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)芽孢桿菌屬變種Iren-101菌株后，在30℃下以150rpm攪拌15小時來測量就各氮源而言的芽孢桿菌屬變種Iren-101的菌株生長和蛋白酶活性。結(jié)果示于表1中。
[0045] 表1
[0046]氮源 菌株生長(660nm處的吸光度) 蛋白酶活性(U/ml)
麥芽提取物 2.0±0.2 40.4±2.4
酵母提取物 2.7±0.5 84.5±3.2
酪蛋白 2.3±0.4 62.9±3.1
膠原 2.7±1.5 90.4±3.5
麥芽提取物 2.0±0.2 40.4±2.4
酵母提取物 2.7±0.5 84.5±3.2
酪蛋白 2.3±0.4 62.9±3.1
膠原 2.7±1.5 90.4±3.5
[0047] 如表1所示，本發(fā)明的芽孢桿菌屬變種Iren-101顯示出對膠原蛋白的高蛋白酶活性。因此，證明了本發(fā)明的芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的蛋白酶是膠原特異性蛋白酶。
[0048] 根據(jù)本發(fā)明的氨基酸肥料組合物的有益效果表明，與未施用的作物相比，施用氨基酸肥料組合物的作物增加了25-40％的葉長、10-20％的葉寬和20-30％的葉綠素指數(shù)。此外，與未施用的作物相比，作物的總產(chǎn)量增加了超過30wt％。
[0049] 此外，研究了肥料組合物中每種氨基酸的作用。肥料組合物中的天冬氨酸和谷氨酸可有效克服由寒冷天氣和作物缺乏陽光所引起的生理紊亂；甘氨酸、丙氨酸和亮氨酸可增加作物的糖含量；精氨酸可提高作物的病原微生物抗性。
[0050] 實施例
[0051] 通過以下制備實施例、比較制備實施例和實施例可以更具體地解釋本發(fā)明。然而，應(yīng)該理解的是，實施例旨在進行說明，而不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0052] (制備實施例1)本發(fā)明的氨基酸肥料組合物的制造
[0053] 將3L純化水加入干燥并粉碎的1kg牛皮、豬皮或牛骨中后，將混合物用pH?1.5的HCl溶液處理24小時并用pH?13.5的氫氧化鈉處理24小時，以水解并分解蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。在除去反應(yīng)器中的固體殘余物質(zhì)后，得到500ml粗膠原肽溶液(膠原含量：15wt％)。
[0054] 使用1g由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶、0.1g絲氨酸內(nèi)切蛋白酶(商品名：Alcalase)(效價：2.5AU-A/g)和0.1g外肽酶(商品名：Flavourzyme)(效價：500LAPU/g)將500ml得到的粗膠原肽溶液水解并分解成氨基酸水平。然后，得到510ml氨基酸溶液。然后，將得到的氨基酸溶液中和至pH?8.0。最后，在加入0.1g選自于鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽或磷酸鹽中的至少一種水溶性無機鹽并減壓濃縮后，得到214g液相氨基酸肥料。
[0055] 圖1示出了表明本發(fā)明的制備實施例1中制造的氨基酸肥料中的氨基酸分布的HPLC數(shù)據(jù)。
[0056] HPLC儀器使用Agilent?HPLC。柱是ZORBAX?Eclipse-AAA柱。洗脫液A是40mM磷酸鹽緩沖液。洗脫液B是甲醇/乙腈/水＝45/45/10的混合溶劑。在10分鐘的保留時間附近檢測到丙氨酸峰，并且在10分鐘至12.5分鐘之間檢測到甘氨酸、谷氨酸和纈氨酸峰。此外，在12.5分鐘的保留時間處檢測到亮氨酸峰。此外，分別在13分鐘和13.5分鐘處檢測到天冬氨酸和脯氨酸峰。
[0057] 通過HPLC測定出該肥料組合物中的氨基酸總量為肥料組合物的43.3wt％；通過HPLC測定出主要氨基酸量包括占總肥料組合物的9.7wt％的甘氨酸、5.8wt％的脯氨酸、4.0wt％的丙氨酸、3.8wt％的谷氨酸、2.7wt％的精氨酸、2.1wt％的天冬氨酸、2.8wt％的亮氨酸、1.3wt％的纈氨酸和1.1wt％的異亮氨酸。
[0058] (比較制備實施例1)氨基酸肥料組合物的制造(無膠原特異性蛋白酶處理)[0059] 將3L純化水加入干燥并粉碎的1kg牛皮、豬皮或牛骨中后，將混合物用pH?1.5的HCl溶液處理24小時并用pH?13.5的氫氧化鈉處理24小時，以水解并分解蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。在除去反應(yīng)器中的固體殘余物質(zhì)后，得到500ml粗膠原肽溶液(膠原含量：15wt％)。
[0060] 使用0.1g絲氨酸內(nèi)切蛋白酶(商品名：Alcalase)(效價：2.5AU-A/g)和0.1g外肽酶(商品名：Flavourzyme)(效價：500LAPU/g)將500ml得到的粗膠原肽溶液水解并分解成氨基酸水平。然后，得到507ml氨基酸溶液。然后，將得到的氨基酸溶液中和至pH?8.0。最后，在加入0.1g選自于鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽或磷酸鹽中的至少一種水溶性無機鹽并減壓濃縮后，得到227g液相氨基酸肥料。
[0061] 通過HPLC測定出該肥料組合物中的氨基酸總量為肥料組合物的34wt％；通過HPLC測定出主要氨基酸量包括占總肥料組合物的8.0wt％的甘氨酸、4.6wt％的脯氨酸、3.0wt％的丙氨酸、2.5wt％的谷氨酸、2.5wt％的精氨酸、1.9wt％的天冬氨酸、2.7wt％的亮氨酸、1.3wt％的纈氨酸和1.0wt％的異亮氨酸。
[0062] (比較制備實施例2)氨基酸肥料組合物的制造(無絲氨酸內(nèi)切蛋白酶和外肽酶處理)
[0063] 將3L純化水加入干燥并粉碎的1kg牛皮、豬皮或牛骨中后，將混合物用pH?1.5的HCl溶液處理24小時并用pH?13.5的氫氧化鈉處理24小時，以水解并分解蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。在除去反應(yīng)器中的固體殘余物質(zhì)后，得到500ml粗膠原肽溶液(膠原含量：15wt％)。
[0064] 使用1g由芽孢桿菌屬變種Iren-101生產(chǎn)的膠原特異性蛋白酶將500ml得到的粗膠原肽溶液水解并分解成氨基酸水平。然后，得到498ml氨基酸溶液。然后，將得到的氨基酸溶液中和至pH?8.0。最后，在加入0.1g選自于鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽或磷酸鹽中的至少一種水溶性無機鹽并減壓濃縮后，得到194g液相氨基酸肥料。
[0065] 通過HPLC測定出該肥料組合物中的氨基酸總量為肥料組合物的27wt％；通過HPLC測定出主要氨基酸量包括占總肥料組合物的6.5wt％的甘氨酸、4.5wt％的脯氨酸、2.0wt％的丙氨酸、2.0wt％的谷氨酸、1.5wt％的精氨酸、1.9wt％的天冬氨酸、1.8wt％的亮氨酸、1.2wt％的纈氨酸和0.9wt％的異亮氨酸。
[0066] (實施例1)草莓產(chǎn)量的比較試驗
[0067] 將制備實施例1、比較制備實施例1和比較制備實施例2中制造的氨基酸肥料組合物配制成噴霧溶液。每1個草莓噴灑0.1ml溶液，噴灑總共100個草莓。將未施用任何氨基酸肥料組合物的100個草莓用作對照組。表2示出了施用各肥料組合物后成熟草莓的數(shù)量、重量、體積和糖含量。
[0068] 表2
[0069]
[0070] 如表2所示，與未施用的草莓相比，施用制備實施例1制造的本發(fā)明的氨基酸肥料組合物的草莓增加了26％的果實數(shù)量、7.8％的果實重量、15％的果實體積和8.8％的果實糖含量。
[0071] (實施例2)生菜產(chǎn)量的比較試驗
[0072] 將制備實施例1、比較制備實施例1和比較制備實施例2中制造的氨基酸肥料組合物配制成噴霧溶液。每1棵生菜噴灑0.01ml溶液，噴灑總共100棵生菜。將未施用任何氨基酸肥料組合物的100棵生菜用作對照組。表3示出了施用各肥料組合物后成熟生菜的葉長、葉寬和葉綠素指數(shù)。
[0073] 表3
[0074]處理組(×100) 葉長(cm) 葉寬(cm) 葉綠素指數(shù)(g/100cm2)
制備實施例1 23.0 18.6 2.73
比較制備實施例1 21.8 16.8 2.45
比較制備實施例2 19.5 17.4 2.38
對照 16.9 16.1 2.21
制備實施例1 23.0 18.6 2.73
比較制備實施例1 21.8 16.8 2.45
比較制備實施例2 19.5 17.4 2.38
對照 16.9 16.1 2.21
[0075] 如表3所示，與未施用的生菜相比，施用制備實施例1制造的本發(fā)明的氨基酸肥料組合物的生菜增加了36％的葉長、15.5％的葉寬和23.5％的葉綠素指數(shù)。
[0076] 結(jié)論是，制備實施例1制造的本發(fā)明的氨基酸肥料可以提供具有改善的抗各種環(huán)境脅迫的作物，例如提升新陳代謝、促進光合作用、促進生長和/或促進根系發(fā)育。
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