噻吩吡唑并嘧啶化合物
閱讀：1050發(fā)布：2020-06-05
專利匯可以提供噻吩吡唑并嘧啶化合物專利檢索，專利查詢，專利分析的服務。并且本 發(fā)明 涉及式(I)化合物式I其藥物組合物及這類化合物作為促腎上腺皮質(zhì) 激素 釋放因子1(CRF1)受體拮抗劑在 治療 精神障礙 和神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)、神經(jīng) 疾病 和代謝綜合征中的用途。，下面是噻吩吡唑并嘧啶化合物專利的具體信息內(nèi)容。
1.式I的化合物或其藥學上可接受的鹽，
式I
其中：
R1和R2獨立地是氫或C1-C3烷基；
3
R 是
4
R 是Cl或甲基；
5
R 是氫、Br、硝基、甲氧基、甲氧基甲基、二甲氨基、乙氧羰基、乙酰氨基、乙酰氧基、
1 2
2.權(quán)利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R 和R 獨立地是乙基或正丙基。
3
3.權(quán) 利 要 求1 或2 的 化 合 物 或 其 藥 學 上 可 接 受 的 鹽，其 中 R 是
5
4.根據(jù)權(quán)利要求1至2任一項的化合物，其中R 是甲氧基、甲氧基甲基、二甲氨基或
5.藥物組合物，其包含：根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項的化合物或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的賦形劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療焦慮或抑郁的藥物中的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療酒精或精神活性物質(zhì)濫用的藥物中的用途。
噻吩吡唑并嘧啶化合物
發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及新噻吩吡唑并嘧啶化合物、其藥物組合物及其作為CRF1受體拮抗劑在治療精神病學和神經(jīng)內(nèi)分泌障礙(psychiatric andneuroendocrine disorders)、神經(jīng)
疾病和代謝綜合征中的用途。
疾病和代謝綜合征中的用途。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)是41氨基酸肽，它是垂體前葉腺阿黑皮素原(POMC)源性肽分泌的主要生理調(diào)節(jié)劑。除了它在垂體腺的內(nèi)分泌作用之外，CRF的免疫組
織化學定位已證明：該激素在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中具有廣泛的下丘腦外分布，并產(chǎn)生各種各樣
自主的、電生理和行為效應，這與腦中的神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)節(jié)劑作用一致。還有證據(jù)表明：
CRF在整合免疫系統(tǒng)對生理、心理和免疫應激物的應答中起重要作用。
織化學定位已證明：該激素在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中具有廣泛的下丘腦外分布，并產(chǎn)生各種各樣
自主的、電生理和行為效應，這與腦中的神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)節(jié)劑作用一致。還有證據(jù)表明：
CRF在整合免疫系統(tǒng)對生理、心理和免疫應激物的應答中起重要作用。
[0004] CRF已牽涉精神病學障礙和神經(jīng)疾病，包括抑郁和焦慮，以及下列病癥：阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、進行性核上性麻痹、肌萎縮側(cè)索硬化、帕金森病、癲癇、偏頭痛、酒精
和精神活性物質(zhì)濫用及相關(guān)的戒斷癥狀、肥胖癥、代謝綜合征、先天性腎上腺增生癥、庫欣
病、高血壓、卒中、腸易激綜合征、應激誘導的胃潰瘍、經(jīng)前期綜合征、性功能障礙、早產(chǎn)、炎
性疾病、變態(tài)反應、多發(fā)性硬化、內(nèi)臟痛、睡眠障礙、垂體腫瘤或異位垂體源性腫瘤(ectopic
pituitary-derived tumor)、慢性疲勞綜合征和纖維肌瘤。
和精神活性物質(zhì)濫用及相關(guān)的戒斷癥狀、肥胖癥、代謝綜合征、先天性腎上腺增生癥、庫欣
病、高血壓、卒中、腸易激綜合征、應激誘導的胃潰瘍、經(jīng)前期綜合征、性功能障礙、早產(chǎn)、炎
性疾病、變態(tài)反應、多發(fā)性硬化、內(nèi)臟痛、睡眠障礙、垂體腫瘤或異位垂體源性腫瘤(ectopic
pituitary-derived tumor)、慢性疲勞綜合征和纖維肌瘤。
[0005] 已經(jīng)鑒定了CRF受體亞型CRF1和CRF2，它們在腦內(nèi)非均相分布，因此提示有潛在的功能多樣性。例如，廣泛分布的腦CRF1受體強烈地牽涉于伴隨暴露于環(huán)境應激物的情緒
性。重要的是，CRF1而不是CRF2受 體顯示介導選擇致焦慮樣行為(select anxiogenic
like behavior)。更離散的中膈/下丘腦分布和替代內(nèi)源性配體的可用性表明CRF2受體
的不同功能作用。例如，據(jù)報道：對CRF2受體相對于CRF1受體具有優(yōu)先親和力的新型CRF
家族神經(jīng)肽可抑制食欲，而不產(chǎn)生用選擇性CRF1激動作用所觀察到的行為激活特征。在其
他的情況下，CRF2激動作用產(chǎn)生與所報道的CRF1拮抗劑或CRF1基因缺失的那些作用類似
的作用。例如，盡管CRF2激動劑已被推薦為減肥藥，但是CRF1拮抗劑也可以是重要的肥胖
癥療法。
性。重要的是，CRF1而不是CRF2受 體顯示介導選擇致焦慮樣行為(select anxiogenic
like behavior)。更離散的中膈/下丘腦分布和替代內(nèi)源性配體的可用性表明CRF2受體
的不同功能作用。例如，據(jù)報道：對CRF2受體相對于CRF1受體具有優(yōu)先親和力的新型CRF
家族神經(jīng)肽可抑制食欲，而不產(chǎn)生用選擇性CRF1激動作用所觀察到的行為激活特征。在其
他的情況下，CRF2激動作用產(chǎn)生與所報道的CRF1拮抗劑或CRF1基因缺失的那些作用類似
的作用。例如，盡管CRF2激動劑已被推薦為減肥藥，但是CRF1拮抗劑也可以是重要的肥胖
癥療法。
[0006] 某些可用作CRF拮抗劑的吡咯并[2，3-d]嘧啶、吡咯并[3，2-d]嘧啶、吡唑并[1，5-a]嘧啶、1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶和吡唑并[1，5-a]-1，3，5-三嗪在WO94/13676、WO
97/29109、WO 98/08847和WO 98/03510中描述。
97/29109、WO 98/08847和WO 98/03510中描述。
[0007] 本發(fā)明提供了可用作CRF1受體拮抗劑的新型噻吩吡唑并嘧啶。鑒于上述，期望發(fā)現(xiàn)新的有效和選擇性的CRF1拮抗劑，它作為潛在有價值的治療劑用于治療精神病學和神
經(jīng)內(nèi)分泌障礙、神經(jīng)疾病和代謝綜合征。進一步，由于大部分市售CNS和心血管藥物顯示不
期望的生物利用度特性，所以還期望發(fā)現(xiàn)相對于已知CRF拮抗劑如CP154526和NBI30775
而言具有優(yōu)異生物利用度特性的新化合物。
經(jīng)內(nèi)分泌障礙、神經(jīng)疾病和代謝綜合征。進一步，由于大部分市售CNS和心血管藥物顯示不
期望的生物利用度特性，所以還期望發(fā)現(xiàn)相對于已知CRF拮抗劑如CP154526和NBI30775
而言具有優(yōu)異生物利用度特性的新化合物。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及式I化合物或其藥學上可接受的鹽，
[0010] 式I
[0011] 其中：
[0012] R1和R2獨立地是氫或C1-C3烷基；
[0013] R3是4
[0014] R 是Cl或甲基；5
[0016] 在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及治療患者的抑郁或重度抑郁癥、焦慮、酒精或精神活性物質(zhì)濫用、肥胖癥、高血壓、代謝綜合征、腸應激綜合征、癲癇、卒中、睡眠障礙、變態(tài)
反應、偏頭痛、經(jīng)前期綜合征(PMS)、不育癥、性功能障礙、先天性腎上腺增生癥、庫欣病、早
產(chǎn)、應激誘導的胃潰瘍、炎性疾病、垂體腫瘤或異位垂體源性腫瘤、慢性疲勞綜合征、纖維肌
瘤、內(nèi)臟痛或多發(fā)性硬化的方法，包括：對有需要的患者施用治療有效量的式I化合物或其
藥學上可接受的鹽。
反應、偏頭痛、經(jīng)前期綜合征(PMS)、不育癥、性功能障礙、先天性腎上腺增生癥、庫欣病、早
產(chǎn)、應激誘導的胃潰瘍、炎性疾病、垂體腫瘤或異位垂體源性腫瘤、慢性疲勞綜合征、纖維肌
瘤、內(nèi)臟痛或多發(fā)性硬化的方法，包括：對有需要的患者施用治療有效量的式I化合物或其
藥學上可接受的鹽。
[0017] 在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療抑郁或重度抑郁癥、焦慮、酒精或精神活性物質(zhì)濫用、肥胖癥、
高血壓、代謝綜合征、腸易激綜合征、癲癇、卒中、睡眠障礙、變態(tài)反應、偏頭痛、經(jīng)前期綜合
征(PMS)、不育癥、性功能障礙、先天性腎上腺增生癥、庫欣病、早產(chǎn)、應激誘導的胃潰瘍、炎
性疾病、垂體腫瘤或異位垂體源性腫瘤、慢性疲勞綜合征、纖維肌瘤、內(nèi)臟痛或多發(fā)性硬化。
高血壓、代謝綜合征、腸易激綜合征、癲癇、卒中、睡眠障礙、變態(tài)反應、偏頭痛、經(jīng)前期綜合
征(PMS)、不育癥、性功能障礙、先天性腎上腺增生癥、庫欣病、早產(chǎn)、應激誘導的胃潰瘍、炎
性疾病、垂體腫瘤或異位垂體源性腫瘤、慢性疲勞綜合征、纖維肌瘤、內(nèi)臟痛或多發(fā)性硬化。
[0018] 在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及用作藥物的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
[0019] 發(fā)明詳述
[0022] “藥學上可接受的賦形劑”是指增加制劑特性的藥學上可接受的制劑 載體、溶液或添加劑。這種賦形劑必須與制劑的其他成分相容，且對其受者無害，為技術(shù)人員眾所周知
(例如參見Remingtons PharmaceuticalSciences，第19版，Mack Publishing Company，
1995)。
(例如參見Remingtons PharmaceuticalSciences，第19版，Mack Publishing Company，
1995)。
[0023] “藥學上可接受的鹽”是指本發(fā)明化合物的相對無毒的、無機和有機酸加成鹽和堿加成鹽。這些鹽可在最后分離和純化化合物時原位制備。特別地，酸加成鹽可通過分別將經(jīng)
純化的化合物以其游離堿形式與合適有機或無機酸反應并分離由此生成的鹽而制備(例
如參見RemingtonsPharmaceutical Sciences，第19版，Mack Publishing Company，1995)。
純化的化合物以其游離堿形式與合適有機或無機酸反應并分離由此生成的鹽而制備(例
如參見RemingtonsPharmaceutical Sciences，第19版，Mack Publishing Company，1995)。
[0024] “治療有效量”或“有效量”是指本發(fā)明式I化合物或含有本發(fā)明式I化合物的藥物組合物的量，所述量誘發(fā)研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)學博士或其他臨床醫(yī)生正尋求的組織、系統(tǒng)、
動物或人的生物或醫(yī)學反應或者對所述組織、系統(tǒng)、動物或人的期望治療作用。
動物或人的生物或醫(yī)學反應或者對所述組織、系統(tǒng)、動物或人的期望治療作用。
[0025] 術(shù)語“治療(treatment)”、“治療(treat)”、“治療(treating)”等表示包括延緩和逆轉(zhuǎn)病癥的進展。這些術(shù)語還包括減輕、改善、降低、消除或減少障礙或病癥的一種或多
種癥狀，即使并未實際消除所述障礙或病癥并且即使并未延緩或逆轉(zhuǎn)所述障礙或病癥本身
的進展。術(shù)語“治療”及類似術(shù)語還包括防止(例如預防性)和姑息治療。疾病的防止表
現(xiàn)為延長或延遲疾病癥狀的發(fā)生。
種癥狀，即使并未實際消除所述障礙或病癥并且即使并未延緩或逆轉(zhuǎn)所述障礙或病癥本身
的進展。術(shù)語“治療”及類似術(shù)語還包括防止(例如預防性)和姑息治療。疾病的防止表
現(xiàn)為延長或延遲疾病癥狀的發(fā)生。
[0026] 分子結(jié)構(gòu)中的符號“——”指示具體取代基的連接位置。
[0027] 當任何變量在任意組分或式I中出現(xiàn)多于一次時，它每次出現(xiàn)的定義獨立于它每個其他次出現(xiàn)的定義。同時，只有這種組合形成穩(wěn)定的化合物，取代基和/或變量的組合才
1 2
是允許的。在選擇本發(fā)明化合物時，本領(lǐng)域技術(shù)人員應認識到：各種取代基即R、R 等的選
擇應符合化學結(jié)構(gòu)連接性眾所周知的原則。
1 2
是允許的。在選擇本發(fā)明化合物時，本領(lǐng)域技術(shù)人員應認識到：各種取代基即R、R 等的選
擇應符合化學結(jié)構(gòu)連接性眾所周知的原則。
[0029] 本發(fā)明包括特定類的發(fā)明，如下述：
[0030] (a)式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R1和R2獨立地是乙基或正丙基；3
[0031] (b)式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R 是5
[0032] (c)式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R 是甲氧基、甲氧基甲基、二甲氨基或
[0033] (d)式I化合物或其藥學上可接受的鹽用于治療抑郁或焦慮的用途；
[0034] (e)式I化合物或其藥學上可接受的鹽用于治療酒精或精神活性物質(zhì)濫用的用途；
[0035] (f)顯示CRF1結(jié)合的Ki值≤500nM的式I化合物或其藥學上可接受的鹽；
[0036] (g)顯示CRF1結(jié)合的Ki值≤50nM的式I化合物或其藥學上可接受的鹽；
[0037] (h)顯示CRF1結(jié)合的Ki值≤5nM的式I化合物或其藥學上可接受的鹽；
[0038] (i)顯示CRF1結(jié)合的Ki值≤500nM并且相對于CRF2與CRF1選擇性結(jié)合(即較低Ki)的式I化合物或其藥學上可接受的鹽；
[0039] (j)顯示CRF1結(jié)合的Ki值≤50nM并且相對于CRF2與CRF1選擇性結(jié)合(即較低Ki)的式I化合物或其藥學上可接受的鹽；和
[0040] (k)顯示CRF1結(jié)合的Ki值≤5nM并且相對于CRF2與CRF1選擇性結(jié)合(即較低Ki)的式I化合物或其藥學上可接受的鹽；
[0041] (l)生物利用度特性優(yōu)于已知CRF拮抗劑(例如CP154526和NBI30775)的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
[0042] 本發(fā)明的化合物優(yōu)選配制成經(jīng)各種途徑施用的藥物組合物。優(yōu)選地， 這些組合物用于口服施用。這些藥物組合物及用于制備它們的方法為本領(lǐng)域所眾所周知(例如參見
Remington：The Science and Practice of Pharmacy，A.Gennaro等人編，第19版，Mack
Publishing Co.，1995)。
Remington：The Science and Practice of Pharmacy，A.Gennaro等人編，第19版，Mack
Publishing Co.，1995)。
[0043] 式I化合物通常在寬劑量范圍內(nèi)有效。例如，每天劑量通常落在約0.0001至約30mg/kg體重的范圍內(nèi)。在某些情況下，低于前述范圍下限的劑量水平可能超出足夠量，而
在其他情況下仍可使用更大的劑量卻不會引起任何有害副作用，因此上述劑量范圍并不旨
在以任何方式限制本發(fā)明的范圍。應理解，實際所施用的化合物的量將由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)情
況確定，包括待治療的病癥、所選的施用途徑、所施用的實際化合物、個別患者的年齡、重量
和反應及患者癥狀的嚴重度。
在其他情況下仍可使用更大的劑量卻不會引起任何有害副作用，因此上述劑量范圍并不旨
在以任何方式限制本發(fā)明的范圍。應理解，實際所施用的化合物的量將由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)情
況確定，包括待治療的病癥、所選的施用途徑、所施用的實際化合物、個別患者的年齡、重量
和反應及患者癥狀的嚴重度。
[0044] 式I化合物是CRF-1拮抗劑，因此可用于治療通過減少CRF1受體刺激可治療的病癥。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)是41氨基酸肽，它是垂體前葉腺的阿黑皮素
原(POMC)源性肽分泌的主要生理調(diào)節(jié)劑[J.Rivier等人，Proc.Natl.Acad.Sci(USA)80：
4851(1983)；W.Vale等人，Science213：1394(1981)]，它已與許多種醫(yī)學病癥有聯(lián)系。
例如，除了它在垂體腺的內(nèi)分泌作用之外，CRF的免疫組織化學定位已證明所述激素在
中樞神經(jīng)系統(tǒng)中具有廣泛的下丘腦外分布并產(chǎn)生各種各樣自主的、電生理和行為效應，
這與腦中神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)節(jié)劑的作用一致[W.Vale等人，Rec.Prog.Horm.Res.39：
245(1983)；G.F.Koob，Persp.Behav.Med.2：39(1985)；E.B.De Souza等人，J.Neurosci.5：
3189(1985)]。還有證據(jù)顯示：CRF在整合免疫系統(tǒng)對生理、心理和免疫應激物的應答中起
重要作用[例如參見J.E.Blalock，Physiological Reviews 69：1(1989)；J.E.Morley，
Life Sci.41：527(1987)]。
原(POMC)源性肽分泌的主要生理調(diào)節(jié)劑[J.Rivier等人，Proc.Natl.Acad.Sci(USA)80：
4851(1983)；W.Vale等人，Science213：1394(1981)]，它已與許多種醫(yī)學病癥有聯(lián)系。
例如，除了它在垂體腺的內(nèi)分泌作用之外，CRF的免疫組織化學定位已證明所述激素在
中樞神經(jīng)系統(tǒng)中具有廣泛的下丘腦外分布并產(chǎn)生各種各樣自主的、電生理和行為效應，
這與腦中神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)節(jié)劑的作用一致[W.Vale等人，Rec.Prog.Horm.Res.39：
245(1983)；G.F.Koob，Persp.Behav.Med.2：39(1985)；E.B.De Souza等人，J.Neurosci.5：
3189(1985)]。還有證據(jù)顯示：CRF在整合免疫系統(tǒng)對生理、心理和免疫應激物的應答中起
重要作用[例如參見J.E.Blalock，Physiological Reviews 69：1(1989)；J.E.Morley，
Life Sci.41：527(1987)]。
[0045] CRF涉及精神病學障礙和神經(jīng)疾病，包括抑郁和焦慮[D.M.Nielsen，Life Sci.78：909-919；H.E.Kunzel 等 人，J.Psychiatr.Res.37：525-533；D.R.Gehlert 等 人，Eur.
J.Pharmacol.509：145-153]。還假定CRF作用于阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、進行性
核上性麻痹和肌萎縮側(cè)索硬化的病因?qū)W和病理生理學中，由于它們涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)中
的CRF神經(jīng)元功能障礙[綜 述參見E.B.De Souze，Hosp.Practice 23：59(1988)]。已
顯示CRF的長期施用產(chǎn)生多巴胺系統(tǒng)的損害，這表明在帕金森病中起作用[E.Izzo等
人，Pharmacol.Biochem.Behav.81：701-708(2005)]。CRF所涉及的其他神經(jīng)障礙包括癲
癇[T.Z.Baram等人，Brain Res.770：89-95(1997)]和偏頭痛[T.C.Theoharides等人，
Endocrinology 136：5745-5750(1995)]。CRF已牽涉酒精和精神活性物質(zhì)濫用及相關(guān)
的戒斷癥狀[D.H.Overstreet等人，Pharmacol.Biochem.Behav.77：405-413；Y.Shaham
等人，Psychopharmacology(Berl)137：184-190]。此外，有證據(jù)表明CRF在各種內(nèi)分
泌障礙和心血管疾病如肥胖癥[E.Timofeeva和D.Richard，Neuroendocrinology 66：
327-340(1997)]、代謝性綜合征[A.M.Ward等人，Metabolism 53：720-726(2004)]、先天
性腎上腺增生癥[D.P.Merke和G.B.Cutler Jr.，Endocrinol.Metab.Clin.North Am.30：
121-135(2001)]、庫欣病[M.Labeur等人，Curr.DrugTargets Immune Endocr.Metabol.
Disord.4：335-342(2004)]、高血壓[R.J.Briscoe，等人，Brain Res.881：204-207(2000)]
和卒中[S.L.Stevens等人，J.Cereb.Blood Flow Metab.23：1151-1159(2003)]中起作
用。已顯示胃紊亂如腸易激綜合征[Y.Tache等人，Eur J.Surg.Suppl：16-22(2002)]和
應激誘導的胃潰瘍[K.E.Gabry等人，Mol.Psychiatry 7：474-483，433(2002)]與CRF有
關(guān)。此外，顯示CRF在人類女性健康的各種領(lǐng)域如經(jīng)前期綜合征[F.Facchinetti等人，
Psychosom.Med.56：418-422(1994)]、不育 癥[L.Ghizzoni等 人，Endocrinology 138：
4806-4811(1997)]、性功能障礙[J.E.Jones等人，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.
Physiol.283：R591-597(2002)]和早產(chǎn)[P.D.Wadhwa等人，Am.J.Obstet.Gynecol.191：
1063-1069(2004)]中起作用。還有證據(jù)顯示CRF在免疫系統(tǒng)中起主要作用，顯示用于治
療炎性疾病[A.Gravanis和A.N.Margioris，Currr.Med.Chem.12：1503-1512(2005)]、
變態(tài)反應[L.K.Singh等人.，Brain Behav.Immun.13：225-239(1999)]、多發(fā)性硬化和
其他自身免疫性疾病[C.Benou等人，J.Immunol.174：5407-5413(2005)]的治療可能
性。除前述之外，CRF已牽涉內(nèi)臟痛[M.Nijsen等人，Neurogastroenterol.Motil.17：
423-432(2005)]、睡 眠 障 礙[T.M. Buckley和 A.F.Schatzberg，J.Clin.Endocrinol.
Metab.90：3106-3114(2005)]、垂體腫瘤或異位垂體源性腫瘤[K.D.Dieterich等人，
J.Clin.Endocrinol.Metab.83：3327-3331(1998)]、慢性疲勞綜合征和纖維肌痛[G.Neeck
和L.J.Crofford，Rheum.Dis.Clin.North Am.26：989-1002(2000)]。
J.Pharmacol.509：145-153]。還假定CRF作用于阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、進行性
核上性麻痹和肌萎縮側(cè)索硬化的病因?qū)W和病理生理學中，由于它們涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)中
的CRF神經(jīng)元功能障礙[綜 述參見E.B.De Souze，Hosp.Practice 23：59(1988)]。已
顯示CRF的長期施用產(chǎn)生多巴胺系統(tǒng)的損害，這表明在帕金森病中起作用[E.Izzo等
人，Pharmacol.Biochem.Behav.81：701-708(2005)]。CRF所涉及的其他神經(jīng)障礙包括癲
癇[T.Z.Baram等人，Brain Res.770：89-95(1997)]和偏頭痛[T.C.Theoharides等人，
Endocrinology 136：5745-5750(1995)]。CRF已牽涉酒精和精神活性物質(zhì)濫用及相關(guān)
的戒斷癥狀[D.H.Overstreet等人，Pharmacol.Biochem.Behav.77：405-413；Y.Shaham
等人，Psychopharmacology(Berl)137：184-190]。此外，有證據(jù)表明CRF在各種內(nèi)分
泌障礙和心血管疾病如肥胖癥[E.Timofeeva和D.Richard，Neuroendocrinology 66：
327-340(1997)]、代謝性綜合征[A.M.Ward等人，Metabolism 53：720-726(2004)]、先天
性腎上腺增生癥[D.P.Merke和G.B.Cutler Jr.，Endocrinol.Metab.Clin.North Am.30：
121-135(2001)]、庫欣病[M.Labeur等人，Curr.DrugTargets Immune Endocr.Metabol.
Disord.4：335-342(2004)]、高血壓[R.J.Briscoe，等人，Brain Res.881：204-207(2000)]
和卒中[S.L.Stevens等人，J.Cereb.Blood Flow Metab.23：1151-1159(2003)]中起作
用。已顯示胃紊亂如腸易激綜合征[Y.Tache等人，Eur J.Surg.Suppl：16-22(2002)]和
應激誘導的胃潰瘍[K.E.Gabry等人，Mol.Psychiatry 7：474-483，433(2002)]與CRF有
關(guān)。此外，顯示CRF在人類女性健康的各種領(lǐng)域如經(jīng)前期綜合征[F.Facchinetti等人，
Psychosom.Med.56：418-422(1994)]、不育 癥[L.Ghizzoni等 人，Endocrinology 138：
4806-4811(1997)]、性功能障礙[J.E.Jones等人，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.
Physiol.283：R591-597(2002)]和早產(chǎn)[P.D.Wadhwa等人，Am.J.Obstet.Gynecol.191：
1063-1069(2004)]中起作用。還有證據(jù)顯示CRF在免疫系統(tǒng)中起主要作用，顯示用于治
療炎性疾病[A.Gravanis和A.N.Margioris，Currr.Med.Chem.12：1503-1512(2005)]、
變態(tài)反應[L.K.Singh等人.，Brain Behav.Immun.13：225-239(1999)]、多發(fā)性硬化和
其他自身免疫性疾病[C.Benou等人，J.Immunol.174：5407-5413(2005)]的治療可能
性。除前述之外，CRF已牽涉內(nèi)臟痛[M.Nijsen等人，Neurogastroenterol.Motil.17：
423-432(2005)]、睡 眠 障 礙[T.M. Buckley和 A.F.Schatzberg，J.Clin.Endocrinol.
Metab.90：3106-3114(2005)]、垂體腫瘤或異位垂體源性腫瘤[K.D.Dieterich等人，
J.Clin.Endocrinol.Metab.83：3327-3331(1998)]、慢性疲勞綜合征和纖維肌痛[G.Neeck
和L.J.Crofford，Rheum.Dis.Clin.North Am.26：989-1002(2000)]。
[0046] 已鑒定CRF受體亞型CRF1和CRF2，且它們在腦內(nèi)非均相分布[D.T.Chalmers等人，TIPS 17：166-72(1996)]，因此提示有潛在的功能多樣性[S.C.Heinrichs等人，
Regul.Peptides 71：15(1997)]。例如，廣泛分布的腦CRF1受體強烈牽涉于伴隨暴露于
環(huán)境應激物的情緒性[G.Liebsch等人，Regul.Peptides 59：229-39(1995)；D.W.Schulz，
PNAS 93：10477-82(1996)]。重要的是，CRF1而不是CRF2受體顯示介導選擇致焦慮
樣行為[Heinrichs等人，1997]。更離散的中膈/下丘腦分布[D.T.Chalmers等人，
J.Neurosci.15(10)：6340-50(1995)]和替代內(nèi)源性配體的可用性[J.Vaughan等人，
Nature 378：287-92(1995)]表明CRF2受體的不同功能作用[Heinrichs等人，1997]。例如，
據(jù)報道：相對于CRF1受體對CRF2具有優(yōu)先親和力的新型CRF家族神經(jīng)肽可抑制食欲，而
不產(chǎn)生用選擇性CRF1激動作用所觀察到的行為激活特征(H.Tezval等人，PNAS 101(25)：
9468-9473(2004)]。在一些情況下，CRF2激動作用產(chǎn)生與所報道的CRF1拮抗劑或CRF1
基因缺失的那些作用類似的作用[S.C.Heinrichs，Trends in PharmacologicalSciences
20(8)：311-5(1999)]。例如，盡管CRF2激動劑已被推薦為減肥藥，但是CRF1拮抗劑也可以
是重要的肥胖癥療法[C.Contoreggi等人，Neuroendocrinology 80(2)：111-23(2004)]。
Regul.Peptides 71：15(1997)]。例如，廣泛分布的腦CRF1受體強烈牽涉于伴隨暴露于
環(huán)境應激物的情緒性[G.Liebsch等人，Regul.Peptides 59：229-39(1995)；D.W.Schulz，
PNAS 93：10477-82(1996)]。重要的是，CRF1而不是CRF2受體顯示介導選擇致焦慮
樣行為[Heinrichs等人，1997]。更離散的中膈/下丘腦分布[D.T.Chalmers等人，
J.Neurosci.15(10)：6340-50(1995)]和替代內(nèi)源性配體的可用性[J.Vaughan等人，
Nature 378：287-92(1995)]表明CRF2受體的不同功能作用[Heinrichs等人，1997]。例如，
據(jù)報道：相對于CRF1受體對CRF2具有優(yōu)先親和力的新型CRF家族神經(jīng)肽可抑制食欲，而
不產(chǎn)生用選擇性CRF1激動作用所觀察到的行為激活特征(H.Tezval等人，PNAS 101(25)：
9468-9473(2004)]。在一些情況下，CRF2激動作用產(chǎn)生與所報道的CRF1拮抗劑或CRF1
基因缺失的那些作用類似的作用[S.C.Heinrichs，Trends in PharmacologicalSciences
20(8)：311-5(1999)]。例如，盡管CRF2激動劑已被推薦為減肥藥，但是CRF1拮抗劑也可以
是重要的肥胖癥療法[C.Contoreggi等人，Neuroendocrinology 80(2)：111-23(2004)]。
[0047] 制備本發(fā)明化合物
[0048] 本發(fā)明的所有化合物可例如通過按照下述流程中所列出的合成途徑以化學方法制備。然而，下列詳述并不旨在以任何方法限制本發(fā)明的范圍。例如，所述每個途徑的特定
合成步驟可以以不同方式組合或與不同流程的步驟結(jié)合來制備另外的式(I)化合物。每步
驟的產(chǎn)物可通過常規(guī)方法回收， 包括萃取、蒸發(fā)、沉淀、色譜法、過濾、研磨、結(jié)晶等。除非另
有指出，在下述流程中所有取代基如先前定義，且合適的試劑為本領(lǐng)域眾所周知和理解。
合成步驟可以以不同方式組合或與不同流程的步驟結(jié)合來制備另外的式(I)化合物。每步
驟的產(chǎn)物可通過常規(guī)方法回收， 包括萃取、蒸發(fā)、沉淀、色譜法、過濾、研磨、結(jié)晶等。除非另
有指出，在下述流程中所有取代基如先前定義，且合適的試劑為本領(lǐng)域眾所周知和理解。
[0049] 流程1
[0050]
[0051] 式(I)化合物的制備可根據(jù)流程1所述的反應進行。合適的式(I)化合物是其中1 2 3 4 5
R、R、R、R 和R 如對式I所定義的化合物。
R、R、R、R 和R 如對式I所定義的化合物。
[0052] 在步驟1中，在回流乙酸中將乙酰乙酸乙酯和5-甲基-2H-吡唑-3-基胺縮合，形成2，5-二甲基-4H-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-酮(1)。
[0053] 隨后在步驟2中，在惰性溶劑如甲苯中、在溶劑的回流溫度、使用氯氧化磷(phosphorous oxychloride)和二甲基苯胺將式(1)的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-酮轉(zhuǎn)化成
7-氯-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶。
7-氯-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶。
[0054] 在流程1步驟3中，在惰性溶劑如甲苯中、在回流溫度將式(3)的Grignard試劑(X＝Cl或Br)與式(2)的氯化物反應，提供式(4)的7-烷基吡唑并嘧啶。作為替代選擇，
如步驟4所示，式(4)的7-烷基吡唑并嘧啶通過二酮與5-甲基-2H-吡唑-3-基胺的縮
合來獲得。該反應在60至80℃的溫度、用催化量的哌啶在乙醇中進行(Novinson，T.等人
1 2
J.Med.Chem.1975，18， 460)。當R ＝H時，獲得區(qū)域異構(gòu)體的混合物，例如當R ＝丙基時，
它們在步驟5的碘化作用后分離。
如步驟4所示，式(4)的7-烷基吡唑并嘧啶通過二酮與5-甲基-2H-吡唑-3-基胺的縮
合來獲得。該反應在60至80℃的溫度、用催化量的哌啶在乙醇中進行(Novinson，T.等人
1 2
J.Med.Chem.1975，18， 460)。當R ＝H時，獲得區(qū)域異構(gòu)體的混合物，例如當R ＝丙基時，
它們在步驟5的碘化作用后分離。
[0055] 在步驟5中，在乙腈中使用過量的N-碘代琥珀酰亞胺將式(4)的吡唑并嘧啶官能化成式(5)的碘代吡唑并嘧啶。
[0056] 在流程1步驟6中，在Negishi交叉偶聯(lián)反應中將式(5)的碘代吡唑并嘧啶與雜3
環(huán)鋅鹵化物(RZnX)(X＝Cl或Br)反應。雜環(huán)鋅鹵化物可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的
方法來產(chǎn)生。例如，有機鋅試劑通過將雜環(huán)溴化物與鋅金屬反應，或者使用非鹵代雜環(huán)與正
丁基鋰、仲丁基鋰或叔丁基鋰形成雜環(huán)鋰試劑、然后用ZnCl2進行鋰-鋅交換而產(chǎn)生。在鈀
催化劑如二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷存在下、在惰性溶劑如
THF中、在回流溫度將有機鋅試劑與式(5)的碘代吡唑并嘧啶偶聯(lián)約12至36小時，提供式
(I)的吡唑并嘧啶。
環(huán)鋅鹵化物(RZnX)(X＝Cl或Br)反應。雜環(huán)鋅鹵化物可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的
方法來產(chǎn)生。例如，有機鋅試劑通過將雜環(huán)溴化物與鋅金屬反應，或者使用非鹵代雜環(huán)與正
丁基鋰、仲丁基鋰或叔丁基鋰形成雜環(huán)鋰試劑、然后用ZnCl2進行鋰-鋅交換而產(chǎn)生。在鈀
催化劑如二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷存在下、在惰性溶劑如
THF中、在回流溫度將有機鋅試劑與式(5)的碘代吡唑并嘧啶偶聯(lián)約12至36小時，提供式
(I)的吡唑并嘧啶。
[0057] 作為替代選擇，在步驟7中，雜環(huán)代硼酸(R3B(OH)2)用于與式(5)的碘代化合物的Suzuki偶聯(lián)反應。對于這種偶聯(lián)工藝，有很多技術(shù)人員可用的反應條件。優(yōu)選的條件使用
甲苯/乙醇/2M碳酸鈉的溶劑混合物與鈀催化劑如雙(三叔丁基膦)鈀(0)在60℃至回流
溫度進行約12至36小時。
甲苯/乙醇/2M碳酸鈉的溶劑混合物與鈀催化劑如雙(三叔丁基膦)鈀(0)在60℃至回流
溫度進行約12至36小時。
[0058] 容易理解的是，雜芳基代硼酸可使用本領(lǐng)域眾所周知的工藝、通過類似于本文所述的那些方法來制備。例如，噻吩和苯并噻吩可使用N-溴代琥珀酰亞胺來溴化，接著使用
鹵素金屬交換用烷基鋰試劑轉(zhuǎn)化成代硼酸，然后用硼酸三甲酯處理，經(jīng)處理水解。
鹵素金屬交換用烷基鋰試劑轉(zhuǎn)化成代硼酸，然后用硼酸三甲酯處理，經(jīng)處理水解。
[0059] 本領(lǐng)域技術(shù)人員應理解，如式(Ic)化合物中的噻吩并吡啶通過將市售可得的噻吩并[3，2-b]吡啶-7-醇轉(zhuǎn)化成溴化物、隨后鹵素金屬交換并用質(zhì)子源如甲醇/水淬滅而
容易獲得。然后用溴在3位溴化、隨后與甲基代硼酸Suzuki偶聯(lián)，提供3-甲基-噻吩并
[3，2-b]吡啶，后者如上所述使用ZnCl2與式(5)的碘代吡唑并嘧啶偶聯(lián)。
容易獲得。然后用溴在3位溴化、隨后與甲基代硼酸Suzuki偶聯(lián)，提供3-甲基-噻吩并
[3，2-b]吡啶，后者如上所述使用ZnCl2與式(5)的碘代吡唑并嘧啶偶聯(lián)。
[0060] 流程2
[0061]
[0062] 式(7)、(8)或(9)化合物的形成可根據(jù)流程2所述的反應進行。合適的式(7)、1 2 4
(8)或(9)化合物是其中R、R 和R 如對式I所定義且“Het”如所示定義的化合物。
(8)或(9)化合物是其中R、R 和R 如對式I所定義且“Het”如所示定義的化合物。
[0063] 在流程2步驟1中，式(6)的噻吩用N-溴代琥珀酰亞胺在惰性溶劑如二氯甲烷或氯仿中溴化。
[0064] 在步驟2中，式(7)的溴代噻吩與雜環(huán)鋅試劑偶聯(lián)，提供式(8)的噻吩雜環(huán)。雜環(huán)鋅試劑從溴代雜環(huán)和鋅金屬形成，并與式(7)的溴代噻吩原位反應。該反應在惰性溶劑如
THF中、在溶劑的回流溫度進行。作為替代選擇，雜環(huán)鋰試劑可例如使用正丁基鋰、仲丁基鋰
或叔丁基鋰與1-甲基-1，2，4-三唑形成，隨后用ZnCl2進行鋰-鋅交換，獲得雜環(huán)鋅試劑。
THF中、在溶劑的回流溫度進行。作為替代選擇，雜環(huán)鋰試劑可例如使用正丁基鋰、仲丁基鋰
或叔丁基鋰與1-甲基-1，2，4-三唑形成，隨后用ZnCl2進行鋰-鋅交換，獲得雜環(huán)鋅試劑。
[0065] 在流程2步驟3中，將式(6)的噻吩硝化，得到式(9)的硝基噻吩。優(yōu)選的條件使用含有70％硝酸的二氯甲烷和TFA的溶劑混合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員應理解，式(9)的硝基
噻吩可用作進一步官能化的中間體。例如，硝基可被還原，酰化得到乙酰胺，或者被烷基化
得到二烷基胺。
噻吩可用作進一步官能化的中間體。例如，硝基可被還原，酰化得到乙酰胺，或者被烷基化
得到二烷基胺。
[0066] 同時應認識到，制備式(8)化合物所需的步驟可以以任何次序進行，由此2-雜環(huán)噻吩可使用本領(lǐng)域已知方法來制備，接著官能化成溴代噻吩或噻吩基代硼酸，然后與式(5)
的碘代吡唑并嘧啶偶聯(lián)。
的碘代吡唑并嘧啶偶聯(lián)。
[0067] 流程3
[0068]
[0069] 式(10)化合物的生成可根據(jù)流程3所述的反應進行。合適的式(10)化合物是其1 2 4 5a
中R、R 和R 如對式I所定義且R ＝-OCH3、-OC(O)CH3、-CH2OCH3或-CO2CH2CH3的化合物。
中R、R 和R 如對式I所定義且R ＝-OCH3、-OC(O)CH3、-CH2OCH3或-CO2CH2CH3的化合物。
[0070] 容易理解，式(7)的溴代噻吩代表有用的中間體，技術(shù)人員可將它容易地轉(zhuǎn)化成多種取代的噻吩。例如，形成噻吩基格氏試劑后用氧處理(Hurd，C.D.和Kreuz，K.JACS
1950，72，5543)，提供2-羥基噻吩，其被?；?，提供乙酰氧基衍生物。所述格氏試劑還可用
親電試劑如氰基甲酸乙酯處理，提供乙氧羰基取代的噻吩。用正丁基鋰、仲丁基鋰或叔丁基
鋰的鹵素-鋰交換可提供噻吩基鋰試劑，它隨后可與親電試劑如鹵代烴類如碘代甲基甲醚
反應。此外，用氧化銅、碘化鈉和甲醇鈉處理提供2-甲氧基噻吩。
1950，72，5543)，提供2-羥基噻吩，其被?；?，提供乙酰氧基衍生物。所述格氏試劑還可用
親電試劑如氰基甲酸乙酯處理，提供乙氧羰基取代的噻吩。用正丁基鋰、仲丁基鋰或叔丁基
鋰的鹵素-鋰交換可提供噻吩基鋰試劑，它隨后可與親電試劑如鹵代烴類如碘代甲基甲醚
反應。此外，用氧化銅、碘化鈉和甲醇鈉處理提供2-甲氧基噻吩。
[0071] 如本文所用，“TLC”是指薄層色譜法；“HPLC”是指高效液相色譜法；“δ”是指相對于四甲基硅烷低場的百萬分率；“THF”是指四氫呋喃；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“HOAc”是
指乙酸；“MeOH”是指甲醇；“DME”是指二甲氧基乙烷。
指乙酸；“MeOH”是指甲醇；“DME”是指二甲氧基乙烷。
[0072] 實施例
[0073] 無需進一步闡述，認為本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用前面描述最大限度地實施本發(fā)明。提供下列制備和實施例以更詳細地描述本發(fā)明。它們旨在示例而非以任何方式限制本發(fā)
明。試劑和起始原料為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易獲得或容易合成的。實施例1-27提供了
代表性化合物并示例了其制備。實施例A-C示例了可用于測定本發(fā)明化合物生物特性的各
種生物測定法。本領(lǐng)域技術(shù)人員將敏捷地認識到實施例中所述工藝的適當變化。本發(fā)明化
合物的名稱由ChemDraw 7.0.1版提供。
明。試劑和起始原料為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易獲得或容易合成的。實施例1-27提供了
代表性化合物并示例了其制備。實施例A-C示例了可用于測定本發(fā)明化合物生物特性的各
種生物測定法。本領(lǐng)域技術(shù)人員將敏捷地認識到實施例中所述工藝的適當變化。本發(fā)明化
合物的名稱由ChemDraw 7.0.1版提供。
[0074] 制備1
[0075] 2，5-二甲基-4H-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-酮
[0076] 逐滴加入乙酰乙酸乙酯(128g，0.98mol)至5-甲基-2H-吡唑-3-基胺(100g，0.95mol)的乙酸溶液(500mL)，使溫度保持在25-28℃?；亓骷訜峄旌衔?0小時，然后冷卻
至室溫。將反應物加至冷卻至5℃的叔丁基甲醚(5L)，使溫度保持在低于10℃。在5℃攪
拌1小時，過濾。將所生成的物質(zhì)真空干燥過夜，提供白色固體(158g，96％)。
至室溫。將反應物加至冷卻至5℃的叔丁基甲醚(5L)，使溫度保持在低于10℃。在5℃攪
拌1小時，過濾。將所生成的物質(zhì)真空干燥過夜，提供白色固體(158g，96％)。
[0077] 制備2
[0078] 7-氯-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0079] 將N，N-二甲基苯胺(9.7mL，76.7mmol)加至2，5-二甲基-4H-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-酮(10.0g，61.3mmol)在甲苯(150mL)中的懸液。逐滴加入三氯氧化磷(11.2mL，
122.6mmol)至此白色懸液。在惰性氣氛下回流3小時，冷卻至室溫，使用減壓濃縮反應物成
褐色油。將所述油溶解于乙酸乙酯(250mL)中，用1N NaOH堿化。分離，用另外的乙酸乙酯
(2×100mL)萃取堿性水相。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到棕色固
體。使用快速色譜法純化該物質(zhì)，用80％己烷/20％(30％THF/己烷)至0％己烷/100％
(30％THF/己烷)以20％增量的階段梯度洗脫，提供淡綠色固體(6.65g，59％)。ES/MS m/
35 +
z( Cl)182.3(M+1)。
122.6mmol)至此白色懸液。在惰性氣氛下回流3小時，冷卻至室溫，使用減壓濃縮反應物成
褐色油。將所述油溶解于乙酸乙酯(250mL)中，用1N NaOH堿化。分離，用另外的乙酸乙酯
(2×100mL)萃取堿性水相。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到棕色固
體。使用快速色譜法純化該物質(zhì)，用80％己烷/20％(30％THF/己烷)至0％己烷/100％
(30％THF/己烷)以20％增量的階段梯度洗脫，提供淡綠色固體(6.65g，59％)。ES/MS m/
35 +
z( Cl)182.3(M+1)。
[0080] 制備3
[0081] 7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0082]
[0083] 在惰性氣氛下將催化量的碘和 鎂(1.0M，在THF中，52mL，52mmol)裝入配置有回流冷凝器的烘干燒瓶中。加熱至45℃，將3-溴代戊烷(5.3mL，42.9mmol)加至反
應物。當格氏反應開始時溫度達到頂峰。在50℃攪拌反應物另外4小時，冷卻至室溫。使
金屬鎂沉降，在正氬壓下用套管引流(canulate off)格氏試劑到含有無水甲苯(50mL)中
的7-氯-2，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶(5.19g，28.6mmol)的燒瓶中。在惰性氣氛下
加熱至回流 達48小時。將反應物冷卻至室溫，用水淬滅。用乙酸乙酯(150mL)稀釋反應
物，加入水(50mL)。分離，用乙酸乙酯(75mL)萃取水相。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，
減壓濃縮。使用快速色譜法純化，用80％戊烷/20％(30％THF/戊烷)至0％戊烷/100％
(30％THF/戊烷)以20％增量的階段梯度洗脫，得到黃色油(2.59g，42％)。ES/MS m/z
218.1(M+1)+。
應物。當格氏反應開始時溫度達到頂峰。在50℃攪拌反應物另外4小時，冷卻至室溫。使
金屬鎂沉降，在正氬壓下用套管引流(canulate off)格氏試劑到含有無水甲苯(50mL)中
的7-氯-2，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶(5.19g，28.6mmol)的燒瓶中。在惰性氣氛下
加熱至回流 達48小時。將反應物冷卻至室溫，用水淬滅。用乙酸乙酯(150mL)稀釋反應
物，加入水(50mL)。分離，用乙酸乙酯(75mL)萃取水相。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，
減壓濃縮。使用快速色譜法純化，用80％戊烷/20％(30％THF/戊烷)至0％戊烷/100％
(30％THF/戊烷)以20％增量的階段梯度洗脫，得到黃色油(2.59g，42％)。ES/MS m/z
218.1(M+1)+。
[0084] 使用商業(yè)可得的格氏試劑或如上所述制備格氏試劑，基本上如制備3中所述制備下列化合物。
[0085]制備 化學名稱 物理數(shù)據(jù)： NMR或MS(m/z)
編號
4 7-(1-丙基-丁基)-2，5-二甲基 246.3(M+1)+
-吡唑并[1，5-a]嘧啶
5 7-異丙基-2，5-二甲基-吡唑 1H NMR(400MHz，CDCl3)：6.41(s， 1H)，6.30(s，1H)，3.81-3.77(m，1H)， 2.52(s，并[1，5a]嘧啶 3H)，2.47(s，3H)，1.37(d，J＝ 7.0Hz，6H)
編號
4 7-(1-丙基-丁基)-2，5-二甲基 246.3(M+1)+
-吡唑并[1，5-a]嘧啶
5 7-異丙基-2，5-二甲基-吡唑 1H NMR(400MHz，CDCl3)：6.41(s， 1H)，6.30(s，1H)，3.81-3.77(m，1H)， 2.52(s，并[1，5a]嘧啶 3H)，2.47(s，3H)，1.37(d，J＝ 7.0Hz，6H)
[0086] 制備6
[0087] 7-丁基-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0088] 將5-甲基-2H-吡唑-3-基胺(217mg，2.17mmol)、壬烷-2，4-二酮(339mg，2.39mmol)和哌啶(1滴)加至乙醇(10mL)，在80℃加熱過夜。冷卻至室溫，濃縮至干。經(jīng)
硅膠柱色譜法(0-20％乙酸乙酯/己烷)純化，獲得兩種異構(gòu)體的混合物(2g)。
硅膠柱色譜法(0-20％乙酸乙酯/己烷)純化，獲得兩種異構(gòu)體的混合物(2g)。
[0089] 制備7
[0090] 7-(1-乙基-丙基)-3-碘代-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0091]
[0092] 將7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(2.14g，9.84mmol)溶解于無水乙腈(25mL)中，以10分鐘的間隔加入6份(每份0.5g)的N-碘代 琥珀酰亞胺
(3.0g，13.3mmol)。攪拌反應物4小時。蒸發(fā)(Strip off)乙腈，用二氯甲烷(100mL)稀釋
所生成的油。用飽和氯化銨溶液(2×50mL)洗滌橙色溶液。收集有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干
燥，過濾，減壓濃縮以獲得暗紅色油。使用快速色譜法純化，用100％戊烷/0％(20％乙酸
乙酯/戊烷)至0％戊烷/100％(20％乙酸乙酯/戊烷)以50％增量的階段梯度洗脫，得
到橙色油(3.28g，97％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：6.44(s，1H)，3.59(m，1H)，2.61(s，3H)，
2.49(s，3H)，1.86-1.76(m，4H)，0.85(t，J＝7.5Hz，6H)。
(3.0g，13.3mmol)。攪拌反應物4小時。蒸發(fā)(Strip off)乙腈，用二氯甲烷(100mL)稀釋
所生成的油。用飽和氯化銨溶液(2×50mL)洗滌橙色溶液。收集有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干
燥，過濾，減壓濃縮以獲得暗紅色油。使用快速色譜法純化，用100％戊烷/0％(20％乙酸
乙酯/戊烷)至0％戊烷/100％(20％乙酸乙酯/戊烷)以50％增量的階段梯度洗脫，得
到橙色油(3.28g，97％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：6.44(s，1H)，3.59(m，1H)，2.61(s，3H)，
2.49(s，3H)，1.86-1.76(m，4H)，0.85(t，J＝7.5Hz，6H)。
[0093] 基本上如制備7中所述制備下列化合物。
[0094]制備 化學名稱 物理數(shù)據(jù)： NMR或MS(m/z)
編號
8 7-(1-丙基-丁基)-3-碘代-2， 1H NMR(400MHz，CDCl3)：6.42 (s，1H)，3.74-3.70(m，1H)，2.58(s， 3H)，2.46(s，3H)，
5- 二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶1.74-1.68(m， 4H)，1.28-1.14(m，4H)，0.84(t，J＝ 7.0Hz，6H).
9 7-異丙基-3-碘代-2，5-二甲 316.0(M+1)+
基- 吡唑并[1，5a]嘧啶
10＊ 7-丁基-3-碘代-2，5-二甲 330(M+1)+
基-吡 唑并[1，5-a]嘧啶
編號
8 7-(1-丙基-丁基)-3-碘代-2， 1H NMR(400MHz，CDCl3)：6.42 (s，1H)，3.74-3.70(m，1H)，2.58(s， 3H)，2.46(s，3H)，
5- 二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶1.74-1.68(m， 4H)，1.28-1.14(m，4H)，0.84(t，J＝ 7.0Hz，6H).
9 7-異丙基-3-碘代-2，5-二甲 316.0(M+1)+
基- 吡唑并[1，5a]嘧啶
10＊ 7-丁基-3-碘代-2，5-二甲 330(M+1)+
基-吡 唑并[1，5-a]嘧啶
[0095] ＊處理：用Na2S2O3水溶液洗滌有機物。對制備6的異構(gòu)體混合物進行反應。在硅膠上分離兩種異構(gòu)體(0-20％EtOAc/己烷)。
[0096] 實施例1
[0097] 3-(3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0098]
[0099] 將 鋅(5g/100mL THF，20mL，15.0mmol)懸浮于無水 THF(10mL)中，加入2-溴代-3-氯噻吩(1.98g，10.0mmol)。在惰性氣氛下使混合物在油浴(85℃)中回流3
小時。將反應物冷卻至室溫，離心剩余的鋅金屬。在正氬壓下套管引流試劑溶液至新容器
中，加入7-(1-乙基-丙基)-3-碘代-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(1.72g，5.0mmol)。
通過正氬壓使溶液脫氣10-15分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基-膦基)二茂鐵]鈀(II)
二氯甲烷(0.225g，0.275mmol)。在惰性氣氛下于回流溫度攪拌過夜。將反應物冷卻至室
溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分，
合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％
己烷/0％(15％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(15％乙酸乙酯/己烷)以10％增量
35 +
的階段梯度洗脫，得到黃色固體(1.35g，40％)。ES/MS m/z( Cl)334.4(M+1)。
小時。將反應物冷卻至室溫，離心剩余的鋅金屬。在正氬壓下套管引流試劑溶液至新容器
中，加入7-(1-乙基-丙基)-3-碘代-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(1.72g，5.0mmol)。
通過正氬壓使溶液脫氣10-15分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基-膦基)二茂鐵]鈀(II)
二氯甲烷(0.225g，0.275mmol)。在惰性氣氛下于回流溫度攪拌過夜。將反應物冷卻至室
溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分，
合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％
己烷/0％(15％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(15％乙酸乙酯/己烷)以10％增量
35 +
的階段梯度洗脫，得到黃色固體(1.35g，40％)。ES/MS m/z( Cl)334.4(M+1)。
[0100] 基本上如實施例1中所述制備下列化合物。
[0101]實施例 編號 化學名稱 MS(m/z)
2 3-(3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-丙基-丁基)-2，5-二甲 基-吡唑并[1，5-a]嘧啶 (35Cl)362.0 (M+1)+
3 3-(3-氯-噻吩-2-基)-7-異丙基-2，5-二甲基-吡唑 并[1，5-a]嘧啶 (35Cl)306.0 (M+1)+
2 3-(3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-丙基-丁基)-2，5-二甲 基-吡唑并[1，5-a]嘧啶 (35Cl)362.0 (M+1)+
3 3-(3-氯-噻吩-2-基)-7-異丙基-2，5-二甲基-吡唑 并[1，5-a]嘧啶 (35Cl)306.0 (M+1)+
[0102] 實施例4
[0103] 3-(3-甲基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0104] 將3-甲基-2-噻吩基溴化鋅(11.0mL，5.5mmol)、無水THF(6.0mL)和7-(1-乙基-丙基)-3-碘代-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.536g，1.56mmol)裝入烘干燒瓶。用正氬壓脫氣
10-15分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷(0.12g，0.15mmol)。在惰
性氣氛下在油浴(100℃)中回流過夜。將反應物冷卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)
稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。
使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％戊烷 /0％(25％乙酸乙酯/戊烷)至0％戊烷/100％(25％
乙酸乙酯/戊烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到白色泡沫。用己烷研磨，過濾。(0.432g，8％)。
1
HNMR(400MHz，CDCl3)：7.26(d，J＝4.8，MHz，1H)，6.96(d，J＝5.3Hz，1H)，6.42(s，1H)，3.64-3.60(m，1H)，
2.53(s，3H)，2.43(s，3H)，2.14(s，3H)，1.87-1.79(m，4H)，0.88(t，J＝7.0Hz，6H)。
10-15分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷(0.12g，0.15mmol)。在惰
性氣氛下在油浴(100℃)中回流過夜。將反應物冷卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)
稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。
使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％戊烷 /0％(25％乙酸乙酯/戊烷)至0％戊烷/100％(25％
乙酸乙酯/戊烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到白色泡沫。用己烷研磨，過濾。(0.432g，8％)。
1
HNMR(400MHz，CDCl3)：7.26(d，J＝4.8，MHz，1H)，6.96(d，J＝5.3Hz，1H)，6.42(s，1H)，3.64-3.60(m，1H)，
2.53(s，3H)，2.43(s，3H)，2.14(s，3H)，1.87-1.79(m，4H)，0.88(t，J＝7.0Hz，6H)。
[0105] 實施例5
[0106] 3-(5-溴代-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0107]
[0108] 將3-(3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(1.16g，3.5mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)，以一個等分試樣加入N-溴代琥珀酰亞胺
(0.69g，3.85mmol)。在惰性氣氛下攪拌2小時，使用TLC確認反應完全。用二氯甲烷(50mL)
稀釋反應物，用水(75mL)、鹽水(50mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到黃色
1
固體(1.56g，定量收率)。HNMR(400MHz，DMSO)：7.39(s，1H)，6.88(s，1H)，3.48-3.44(m，
1H)，2.45(s，3H)，2.39(s，3H)，1.80-1.73(m，4H)，0.76(t，J＝7.0Hz，6H)。
(0.69g，3.85mmol)。在惰性氣氛下攪拌2小時，使用TLC確認反應完全。用二氯甲烷(50mL)
稀釋反應物，用水(75mL)、鹽水(50mL)洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到黃色
1
固體(1.56g，定量收率)。HNMR(400MHz，DMSO)：7.39(s，1H)，6.88(s，1H)，3.48-3.44(m，
1H)，2.45(s，3H)，2.39(s，3H)，1.80-1.73(m，4H)，0.76(t，J＝7.0Hz，6H)。
[0109] 基本上如實施例5中所述制備下列化合物。
[0110]實施例 編號 化學名稱 MS(m/z)
6 3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-丙基-丁基)-2，5- 二甲基-吡唑并[1， (35Cl81Br) 441.7(M+)
5-a]嘧啶
7＊ 3-(5-溴-3-甲基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙 基)-2，5-二甲基-吡唑并 (81Br)393.8 (M+1)+
[1，5-a]嘧啶
8＊ 3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-異丙基-2，5-二甲基- 吡唑并[1，5-a]嘧啶 (35Cl81Br) 385.0(M+)[0111] ＊通過用己烷/乙酸乙酯洗脫的柱色譜法純化。
6 3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-丙基-丁基)-2，5- 二甲基-吡唑并[1， (35Cl81Br) 441.7(M+)
5-a]嘧啶
7＊ 3-(5-溴-3-甲基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙 基)-2，5-二甲基-吡唑并 (81Br)393.8 (M+1)+
[1，5-a]嘧啶
8＊ 3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-異丙基-2，5-二甲基- 吡唑并[1，5-a]嘧啶 (35Cl81Br) 385.0(M+)[0111] ＊通過用己烷/乙酸乙酯洗脫的柱色譜法純化。
[0112] 實施例9
[0113] 3-[3-氯-5-(2-甲基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-基]-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0114]
[0115] 將 鋅(5g/100mL THF，5.5mL，4.2mmol)懸浮于無水THF(5mL)，加入1-甲基-5-溴-1，2，4-三唑(0.4g，2.5mmol)。在惰性氣氛下在油浴(85℃)中回流3小
時。將反應物冷卻至室溫，離心剩余的鋅金屬。在正氬壓下引流試劑溶液至新容器中，加入
3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
(0.64g，1.45mmol)。通過正氬壓將溶液脫氣10-15分鐘，加入二氯[1，1-雙(二苯基膦基)
二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷(0.136g，0.167mmol)。在惰性氣氛下回流過夜。將反應物冷卻
至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相
部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用
100％己烷/0％(30％THF/己烷)至0％己烷/100％(30％THF/己烷)以10％增量的階
35 +
段梯度洗脫，得到黃色固體(0.298g，50％)。ES/MS m/z( Cl)415.0(M+1)。
時。將反應物冷卻至室溫，離心剩余的鋅金屬。在正氬壓下引流試劑溶液至新容器中，加入
3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
(0.64g，1.45mmol)。通過正氬壓將溶液脫氣10-15分鐘，加入二氯[1，1-雙(二苯基膦基)
二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷(0.136g，0.167mmol)。在惰性氣氛下回流過夜。將反應物冷卻
至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相
部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用
100％己烷/0％(30％THF/己烷)至0％己烷/100％(30％THF/己烷)以10％增量的階
35 +
段梯度洗脫，得到黃色固體(0.298g，50％)。ES/MS m/z( Cl)415.0(M+1)。
[0116] 使用市售可得的6-甲基-2-吡啶基溴化鋅，基本上如實施例9中所述制備下列化合物。
[0117]
[0118] 實施例11
[0119] 3-(3-氯-5-甲氧基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0120] 將3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.46g，1.1mmol)、氧化銅(0.045g，0.56mmol)、碘化鈉(0.020g，0.11mmol)、25％
甲醇鈉/甲醇溶液(10mL)和無水甲醇(10mL)裝入烘干燒瓶中。在惰性氣氛下將反應物
在油浴(90℃)中回流整個周末。用冰水淬滅反應物，用乙醚(3×100mL)萃取。合并有機
相部分，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷
/0％(35％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(35％乙酸乙酯/己烷)以10％增量的階
35 +
段梯度洗脫，得到白色泡沫(0.086g，21％)。ES/MS m/z( Cl) 363.7(M+1)。
甲醇鈉/甲醇溶液(10mL)和無水甲醇(10mL)裝入烘干燒瓶中。在惰性氣氛下將反應物
在油浴(90℃)中回流整個周末。用冰水淬滅反應物，用乙醚(3×100mL)萃取。合并有機
相部分，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷
/0％(35％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(35％乙酸乙酯/己烷)以10％增量的階
35 +
段梯度洗脫，得到白色泡沫(0.086g，21％)。ES/MS m/z( Cl) 363.7(M+1)。
[0121] 實施例12
[0122] 乙酸4-氯-5-[7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]噻吩-2-基酯
[0123] 將異丙基溴(0.25mL，2.7mmol)加至3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.74，1.8mmol)在 鎂(1.0M，
在THF中，2.7mL，2.7mmol)和無水THF(3mL)中的懸液中。在惰性氣氛下回流1小時，將反
應物冷卻至室溫。在正壓下于室溫將氧吹至放熱反應中達90分鐘。用飽和氯化銨(30mL)
淬滅反應，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，減壓濃縮。將油溶解于乙醚(150mL)中，用0.1N
氫氧化鈉(3×75mL)洗滌，用乙醚(50mL)反萃取堿性水相。用飽和氯化銨酸化水相，用
二氯甲烷(4×75mL)萃取。合并二氯甲烷部分，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。將
粗油(0.138g，0.39mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)和三乙胺(0.23mL，1.6mmol)和乙酰氯
(0.034mL，0.47mmol)中。在惰性氣氛下攪拌1小時，用二氯甲烷(50mL)稀釋，用水(50mL)
洗滌。經(jīng)無水硫酸鎂干燥有機相，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％
己烷/0％(25％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(25％乙酸乙酯/己烷)以10％增量
35 +
的階段梯度洗脫，得到白色泡沫狀物(0.084g，21％)。ES/MS m/z ( Cl)392.0(M+1)。
在THF中，2.7mL，2.7mmol)和無水THF(3mL)中的懸液中。在惰性氣氛下回流1小時，將反
應物冷卻至室溫。在正壓下于室溫將氧吹至放熱反應中達90分鐘。用飽和氯化銨(30mL)
淬滅反應，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，減壓濃縮。將油溶解于乙醚(150mL)中，用0.1N
氫氧化鈉(3×75mL)洗滌，用乙醚(50mL)反萃取堿性水相。用飽和氯化銨酸化水相，用
二氯甲烷(4×75mL)萃取。合并二氯甲烷部分，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。將
粗油(0.138g，0.39mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)和三乙胺(0.23mL，1.6mmol)和乙酰氯
(0.034mL，0.47mmol)中。在惰性氣氛下攪拌1小時，用二氯甲烷(50mL)稀釋，用水(50mL)
洗滌。經(jīng)無水硫酸鎂干燥有機相，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％
己烷/0％(25％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(25％乙酸乙酯/己烷)以10％增量
35 +
的階段梯度洗脫，得到白色泡沫狀物(0.084g，21％)。ES/MS m/z ( Cl)392.0(M+1)。
[0124] 實施例13
[0125] 3-(3-氯-5-甲氧基甲基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0126] 將3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a] 嘧啶(0.41，1.0mmol)和無水THF(5mL)裝入烘干燒瓶。在惰性氣氛下冷凍至-70℃，
加入正丁基鋰(2.5M己烷溶液，0.42mL，1.05mmol)。黃色反應物轉(zhuǎn)變成暗紅色。加入碘代
甲基甲醚(0.09mL，1.10mmol)，使反應物溫至室溫。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應混合物，
用水(75mL)和鹽水(75mL)洗滌。經(jīng)無水硫酸鎂干燥有機部分，減壓濃縮至橙色油。使用
快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷/0％(20％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％
(20％乙酸乙酯/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到黃色固體(0.107g，28％)。ES/
35 +
MS m/z( Cl)378.3(M+1)。
加入正丁基鋰(2.5M己烷溶液，0.42mL，1.05mmol)。黃色反應物轉(zhuǎn)變成暗紅色。加入碘代
甲基甲醚(0.09mL，1.10mmol)，使反應物溫至室溫。用乙酸乙酯(100mL)稀釋反應混合物，
用水(75mL)和鹽水(75mL)洗滌。經(jīng)無水硫酸鎂干燥有機部分，減壓濃縮至橙色油。使用
快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷/0％(20％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％
(20％乙酸乙酯/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到黃色固體(0.107g，28％)。ES/
35 +
MS m/z( Cl)378.3(M+1)。
[0127] 實施例14
[0128] 4-氯-5-[7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-噻吩-2-甲酸乙酯
[0129] 在惰性氣氛下將3-(5-溴-3-氯-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.62g，1.5mmol)在無水THF(5mL)中的混合物冷凍至0℃，加入乙基
氯化鎂(2M THF溶液，0.83mL，1.65mmol)。將反應物攪拌5分鐘，溫至室溫，攪拌另外的15
分鐘，然后將反應溫度降低至0℃。加入在無水THF(1mL)中稀釋的氰基甲酸乙酯(0.16mL，
1.58mmol)。使反應物溫至室溫，攪拌1小時。用飽和碳酸氫鈉(20mL)淬滅反應，用乙醚
(2×75mL)萃取。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化，
用100％己烷/0％(20％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(20％乙酸乙酯/己烷)以
10％增量的階段梯度洗脫。真空干燥所得物質(zhì)，提供白色固體(0.114g，19％)。ES/MS m/
35 +
z( Cl)406.3(M+1)。
氯化鎂(2M THF溶液，0.83mL，1.65mmol)。將反應物攪拌5分鐘，溫至室溫，攪拌另外的15
分鐘，然后將反應溫度降低至0℃。加入在無水THF(1mL)中稀釋的氰基甲酸乙酯(0.16mL，
1.58mmol)。使反應物溫至室溫，攪拌1小時。用飽和碳酸氫鈉(20mL)淬滅反應，用乙醚
(2×75mL)萃取。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化，
用100％己烷/0％(20％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(20％乙酸乙酯/己烷)以
10％增量的階段梯度洗脫。真空干燥所得物質(zhì)，提供白色固體(0.114g，19％)。ES/MS m/
35 +
z( Cl)406.3(M+1)。
[0130] 制備11
[0131] 2-(5-溴-4-甲基-噻吩-2-基)-6-甲基-吡啶
[0132] 將2.0M二異丙氨基鋰(9.76mL，19.52mmol)加至2-溴-3-甲基-噻吩(2.0mL，17.75mmol)和THF(30mL)的-78℃溶液。45分鐘后加入ZnCl2(0.5M，在THF中，39.0mL，
19.50mmol)，攪拌溶液30分鐘。加入2-溴-6-甲基-吡啶(2.4mL，21.29mmol)和
Pd(PPh3)4(0.50g，0.44mmol)。將反應物溫至環(huán)境溫度，攪拌2小時。用飽和NH4Cl溶液
(20mL)洗滌反應物。 用CH2Cl2(30mL)洗滌水層。合并有機層，用飽和NH4Cl溶液(20mL)
洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮。通過硅膠柱色譜法(10％-20％EtOAc/己烷梯度)純化
79 81 +
所得殘渣，提供標題化合物(2.34g，49％)。LC-ES/MS m/z( Br/ Br)267.7/269.5(M+H)。
19.50mmol)，攪拌溶液30分鐘。加入2-溴-6-甲基-吡啶(2.4mL，21.29mmol)和
Pd(PPh3)4(0.50g，0.44mmol)。將反應物溫至環(huán)境溫度，攪拌2小時。用飽和NH4Cl溶液
(20mL)洗滌反應物。 用CH2Cl2(30mL)洗滌水層。合并有機層，用飽和NH4Cl溶液(20mL)
洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮。通過硅膠柱色譜法(10％-20％EtOAc/己烷梯度)純化
79 81 +
所得殘渣，提供標題化合物(2.34g，49％)。LC-ES/MS m/z( Br/ Br)267.7/269.5(M+H)。
[0133] 制備12
[0134] 3-甲基-5-(6-甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-代硼酸
[0135] 在氮氣氛下將2-(5-溴-4-甲基-噻吩-2-基)-6-甲基-吡啶(37.6g，0.14mol)和硼酸三異丙基酯(34.2g，0.182mol，42.3mL)溶解于甲苯(100mL)和THF(160mL)。將溶
液冷卻至-40℃。使用添加漏斗歷經(jīng)40分鐘緩慢加入正丁基鋰(2.5M，在己烷中，70mL，
0.175mol)。溶液中的溫度從-40℃轉(zhuǎn)變至-35℃。添加結(jié)束后，在-40℃將混合物攪拌2
小時。將反應物溫至0℃，加入THF(40mL)，然后加入2N HCl水溶液(120mL)，形成白色固
體。加入1N NaOH直至pH＝7且所有鹽都溶解。分離有機層，用二乙醚萃取水層(3×)。
合并有機層，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，濃縮。將THF加至殘渣，然后加入己烷。過濾所得的黃色
1
沉淀，重復沉淀步驟數(shù)次，提供標題化合物(19.7g，60％)。H NMR(CD3OD)：δ2.47(bs，3H)，
2.61(s，3H)，7.20(d，J＝7.7Hz，1H)，7.60(bs，1H)，7.64(bd，J＝7.7Hz，1H)，7.75(t，J＝
7.7Hz，1H)。
液冷卻至-40℃。使用添加漏斗歷經(jīng)40分鐘緩慢加入正丁基鋰(2.5M，在己烷中，70mL，
0.175mol)。溶液中的溫度從-40℃轉(zhuǎn)變至-35℃。添加結(jié)束后，在-40℃將混合物攪拌2
小時。將反應物溫至0℃，加入THF(40mL)，然后加入2N HCl水溶液(120mL)，形成白色固
體。加入1N NaOH直至pH＝7且所有鹽都溶解。分離有機層，用二乙醚萃取水層(3×)。
合并有機層，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，濃縮。將THF加至殘渣，然后加入己烷。過濾所得的黃色
1
沉淀，重復沉淀步驟數(shù)次，提供標題化合物(19.7g，60％)。H NMR(CD3OD)：δ2.47(bs，3H)，
2.61(s，3H)，7.20(d，J＝7.7Hz，1H)，7.60(bs，1H)，7.64(bd，J＝7.7Hz，1H)，7.75(t，J＝
7.7Hz，1H)。
[0136] 實施例15
[0137] 7-(1-乙基-丙基-2，5-二甲基-3-[3-甲基-5-(6-甲基-吡啶-2-基)噻吩-2-基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0138]
[0139] 將2-(5-代硼酸-4-甲基-噻吩-2-基)-6-甲基-吡啶(0.29g，1.24mmol)、無水甲苯(4mL)、無水乙醇(1mL)、2M碳酸鈉(1.1mL，2.2mmol)和7-(1-乙基-丙 基)-3-碘-2，
5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.25g，0.73mmol)裝入烘干燒瓶。用正氬壓將混合物
脫氣30分鐘，加入雙(三叔丁基膦)鈀(0)(0.10g，0.086mmol)。在惰性氣氛下使反應物
在油浴(100℃)中回流過夜。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(75mL)和水(25mL)稀
釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓
濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷/0％(25％乙酸乙酯/己烷)至0％
己烷/100％(25％乙酸乙酯/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到灰白色泡沫狀物
+
(0.215g，73％)。ES/MS m/z 405.4(M+1)。
5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.25g，0.73mmol)裝入烘干燒瓶。用正氬壓將混合物
脫氣30分鐘，加入雙(三叔丁基膦)鈀(0)(0.10g，0.086mmol)。在惰性氣氛下使反應物
在油浴(100℃)中回流過夜。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(75mL)和水(25mL)稀
釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓
濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷/0％(25％乙酸乙酯/己烷)至0％
己烷/100％(25％乙酸乙酯/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到灰白色泡沫狀物
+
(0.215g，73％)。ES/MS m/z 405.4(M+1)。
[0140] 制備13
[0141] 7-溴-噻吩并[3，2-b]吡啶
[0142] 在110℃將噻吩并[3，2-b]吡啶-7-醇(5.00g，33mmol)和三溴氧化磷(50g，174mmol)一起加熱3小時。將熱反應混合物傾入冰和5N NaOH的混合物中，用CH2Cl2萃取。
用Na2SO4干燥有機相，蒸發(fā)。使用硅膠色譜柱(己烷∶EtOAC＝3∶1)純化所得粗品，得
81
到標題化合物(4.19g，59％)。ES/MS m/z( Br)215(M+)。
用Na2SO4干燥有機相，蒸發(fā)。使用硅膠色譜柱(己烷∶EtOAC＝3∶1)純化所得粗品，得
81
到標題化合物(4.19g，59％)。ES/MS m/z( Br)215(M+)。
[0143] 制備14
[0144] 噻吩并[3，2-b]吡啶
[0145] 將7-溴-噻吩并[3，2-b]吡啶(3.69g，17mmol)溶解于干燥THF(20mL)，冷卻至-78℃。將正丁基鋰(1.6M，在己烷中，21.2mL，34mmol)緩慢加至-78℃混合物，在-78℃
攪拌20分鐘。加入MeOH/H2O＝1/1(20mL)，在室溫攪拌1小時。用CH2Cl2萃取反應混合
物。用飽和NaCl溶液洗滌有機部分，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)。使用硅膠色譜法純化所得殘渣，
用100％己烷至己烷∶乙酸乙酯＝10∶1洗脫，得到標題化合物(1.44g，62％)。ES/MS m/
+
z 136(M+1)。
攪拌20分鐘。加入MeOH/H2O＝1/1(20mL)，在室溫攪拌1小時。用CH2Cl2萃取反應混合
物。用飽和NaCl溶液洗滌有機部分，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)。使用硅膠色譜法純化所得殘渣，
用100％己烷至己烷∶乙酸乙酯＝10∶1洗脫，得到標題化合物(1.44g，62％)。ES/MS m/
+
z 136(M+1)。
[0146] 制備15
[0147] 3-溴-噻吩并[3，2-b]吡啶
[0148] 將噻吩 并[3，2-b]吡啶(3.45g，25.6mmol)、碳酸氫鈉 (2.15g，25.6mmol)、K2HPO4(6.69g，38.4mmol)和MgSO4(4.01g，33.3mmol)合并于 CHCl3(60mL)中。在回流下攪
拌混合物，緩慢加入Br2(1.57mL，30.7mmol)。在回流下將反應混合物攪拌過夜。加入更多
的溴(0.7mL)，在回流下將反應物攪拌4小時。冷卻至室溫，加入水，用CHCl3萃取。用飽和
Na2S2O3溶液和飽和鹽水洗滌有機部分。經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)。將物質(zhì)從己烷/CH2Cl2中重
81
結(jié)晶，獲得標題化合物(3.94g，72％)。ES/MS m/z( Br)215(M+)。
拌混合物，緩慢加入Br2(1.57mL，30.7mmol)。在回流下將反應混合物攪拌過夜。加入更多
的溴(0.7mL)，在回流下將反應物攪拌4小時。冷卻至室溫，加入水，用CHCl3萃取。用飽和
Na2S2O3溶液和飽和鹽水洗滌有機部分。經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)。將物質(zhì)從己烷/CH2Cl2中重
81
結(jié)晶，獲得標題化合物(3.94g，72％)。ES/MS m/z( Br)215(M+)。
[0149] 制備16
[0150] 3-甲基-噻吩并[3，2-b]吡啶
[0151] 準備三個含有DME/水/EtOH＝7/3/1(4mL)中的3-溴-噻吩并[3，2-b]吡啶(214mg，1.0mmol)和甲基代硼酸(180mg，3.0mmol)的可微波反應小瓶。加入2M
Na2CO3(1.5mL，3.0mmol)，吹入氮氣15分鐘。加入Pd(PPh3)4(58mg，0.05mmol)，密封小瓶。在
130℃于微波中加熱小瓶30分鐘。合并所有反應混合物，加入水和CH2Cl2，萃取。分離CH2Cl2
層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)。使用硅膠色譜法純化所得物質(zhì)，用己烷∶乙酸乙酯∶2M NH3
+
的MeOH溶液＝20∶4∶1洗脫，得到標題化合物(193mg，43％)。ES/MS m/z150(M+1)。
Na2CO3(1.5mL，3.0mmol)，吹入氮氣15分鐘。加入Pd(PPh3)4(58mg，0.05mmol)，密封小瓶。在
130℃于微波中加熱小瓶30分鐘。合并所有反應混合物，加入水和CH2Cl2，萃取。分離CH2Cl2
層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)。使用硅膠色譜法純化所得物質(zhì)，用己烷∶乙酸乙酯∶2M NH3
+
的MeOH溶液＝20∶4∶1洗脫，得到標題化合物(193mg，43％)。ES/MS m/z150(M+1)。
[0152] 實施例16
[0153] 7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-3-(3-甲基-噻吩并[3，2-b]吡啶-2-基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0154]
[0155] 將3-甲基噻吩并[3，2-b]吡啶(0.213g，1.42mmol)和無水THF(5mL)裝入烘干schrenk燒瓶，在惰性氣氛下冷卻至-78℃。加入正丁基鋰(2.5M，在己烷中，0.72mL，
1.78mmol)，在降低的溫度攪拌30分鐘。以一個等分試樣加入無水氯化鋅(0.58g，
4.26mmol)，在降低的溫度攪拌15分鐘。使反應物溫至室溫，攪拌另外的30分鐘。用無水
THF(5mL)稀釋反應物，加入7-(1- 乙基-丙基)-3-碘-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧
啶(0.406g，0.08mmol)。用正氬壓脫氣15分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂
鐵]鈀(II)二氯甲烷(0.093g，0.114mmol)。在惰性氣氛下在油浴(90℃)中使反應物回
流過夜。將反應物冷卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸
乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速
色譜法純化，用100％己烷/0％(15％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(15％乙酸乙
酯/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到白色泡沫狀物(0.059g，14％)。ES/MS m/z
+
365.0(M+1)。
1.78mmol)，在降低的溫度攪拌30分鐘。以一個等分試樣加入無水氯化鋅(0.58g，
4.26mmol)，在降低的溫度攪拌15分鐘。使反應物溫至室溫，攪拌另外的30分鐘。用無水
THF(5mL)稀釋反應物，加入7-(1- 乙基-丙基)-3-碘-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧
啶(0.406g，0.08mmol)。用正氬壓脫氣15分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂
鐵]鈀(II)二氯甲烷(0.093g，0.114mmol)。在惰性氣氛下在油浴(90℃)中使反應物回
流過夜。將反應物冷卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸
乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速
色譜法純化，用100％己烷/0％(15％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(15％乙酸乙
酯/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到白色泡沫狀物(0.059g，14％)。ES/MS m/z
+
365.0(M+1)。
[0156] 實施例17
[0157] 3-[3-甲基-5-(2-甲基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-基]-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0158] 將1-甲基-1，2，4-三唑(0.320，3.81mmol)、無水THF(10mL)裝入烘干燒瓶，在惰性氣氛下冷凍至-78℃。加入正丁基鋰(2.5M，在己烷中，1.52mL，3.81mmol)，在降低的溫度攪
拌30分鐘。以一個等分試樣加入無水氯化鋅(1.06g，7.75mmol)，在降低的溫度攪拌15分
鐘。使反應物溫至室溫，攪拌另外的30分鐘。將無水THF(5mL)中的3-(5-溴-3-甲基-噻
吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.50g，1.27mmol)加至
反應物。用正氬壓脫氣15分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯
甲烷(0.147g，0.127mmol)。在惰性氣氛下將反應物在油浴(90℃)中回流過夜。將反應物冷
卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相
部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化，用100％己烷
/0％(40％THF/己烷)至0％己烷/100％(40％THF/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫。用
+
己烷/乙醚(3∶1)研磨所得物質(zhì)，得到白色固體(0.371g，74％)。ES/MS m/z 395.0(M+1)。
拌30分鐘。以一個等分試樣加入無水氯化鋅(1.06g，7.75mmol)，在降低的溫度攪拌15分
鐘。使反應物溫至室溫，攪拌另外的30分鐘。將無水THF(5mL)中的3-(5-溴-3-甲基-噻
吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.50g，1.27mmol)加至
反應物。用正氬壓脫氣15分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯
甲烷(0.147g，0.127mmol)。在惰性氣氛下將反應物在油浴(90℃)中回流過夜。將反應物冷
卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相
部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化，用100％己烷
/0％(40％THF/己烷)至0％己烷/100％(40％THF/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫。用
+
己烷/乙醚(3∶1)研磨所得物質(zhì)，得到白色固體(0.371g，74％)。ES/MS m/z 395.0(M+1)。
[0159] 實施例18
[0160] 3-(5-硝基-3-甲基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0161] 將3-(3-甲基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.419g，1.33mmol)溶解于二氯甲烷(2.5mL)中，在惰性氣氛下攪拌，在冰浴 中
冷凍至0℃，加入三氟乙酸(5mL)。將濃(70％)硝酸(0.132g，1.47mmol)逐滴加至反應物
中。溶液的顏色從黃色轉(zhuǎn)變成暗綠色。在惰性氣氛下同時在冰浴中攪拌1小時，使用TLC
確認反應完全。用二氯甲烷(80mL)稀釋反應物，用飽和碳酸氫鈉淬滅。分離，用二氯甲烷
(50mL)萃取堿性水相。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法
純化所得殘渣，用100％己烷/0％(30％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(30％乙酸乙
1
酯/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到黃色固體(0.363g，76％)。HNMR(400MHz，
CDCl3)：δ7.81(s，1H)，6.51(s，1H)，3.62-3.58(m，1H)，2.56(s，3H)，2.48(s，3H)，2.18(s，
3H)，1.88-1.70(m，4H)，0.88(t，J＝7.5Hz，6H)。
冷凍至0℃，加入三氟乙酸(5mL)。將濃(70％)硝酸(0.132g，1.47mmol)逐滴加至反應物
中。溶液的顏色從黃色轉(zhuǎn)變成暗綠色。在惰性氣氛下同時在冰浴中攪拌1小時，使用TLC
確認反應完全。用二氯甲烷(80mL)稀釋反應物，用飽和碳酸氫鈉淬滅。分離，用二氯甲烷
(50mL)萃取堿性水相。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法
純化所得殘渣，用100％己烷/0％(30％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(30％乙酸乙
1
酯/己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到黃色固體(0.363g，76％)。HNMR(400MHz，
CDCl3)：δ7.81(s，1H)，6.51(s，1H)，3.62-3.58(m，1H)，2.56(s，3H)，2.48(s，3H)，2.18(s，
3H)，1.88-1.70(m，4H)，0.88(t，J＝7.5Hz，6H)。
[0162] 實施例19
[0163] N-{5-[7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-甲基-噻吩-2-基}乙酰胺
[0164] 將3-(5-硝基-3-甲基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(0.33g，0.92mmol)溶解于含有10％披鈀碳(0.10g)的THF(10mL)中，用真
空/氫氣流吹掃脫氣(3×)，在氫氣氛(55psi)下于室溫攪拌3小時。使用TLC確認反應完
全。用THF(50mL)稀釋反應物，經(jīng)硅藻土過濾，然后濃縮至粗橙色油(0.328g)。將油溶解
于二氯甲烷(4mL)和1.0MNaOH(1mL)中。將乙酰氯(0.038mL，0.52mmol)加至反應物，于室
溫在密封的反應容器中攪拌整個周末。用二氯甲烷(100mL)稀釋反應物，用水洗滌。收集
有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，在減壓下濃縮至紅色油。使用快速色譜法純化所述油，用
100％己烷/0％(15％乙酸乙酯/10％7N氨化甲醇/75％己烷)至0％己烷/100％(15％
乙酸乙酯/10％7N氨化甲醇/75％己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到褐色泡沫狀物
+
(0.048g，26％)。ES/MS m/z371.0(M+1)。
空/氫氣流吹掃脫氣(3×)，在氫氣氛(55psi)下于室溫攪拌3小時。使用TLC確認反應完
全。用THF(50mL)稀釋反應物，經(jīng)硅藻土過濾，然后濃縮至粗橙色油(0.328g)。將油溶解
于二氯甲烷(4mL)和1.0MNaOH(1mL)中。將乙酰氯(0.038mL，0.52mmol)加至反應物，于室
溫在密封的反應容器中攪拌整個周末。用二氯甲烷(100mL)稀釋反應物，用水洗滌。收集
有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，在減壓下濃縮至紅色油。使用快速色譜法純化所述油，用
100％己烷/0％(15％乙酸乙酯/10％7N氨化甲醇/75％己烷)至0％己烷/100％(15％
乙酸乙酯/10％7N氨化甲醇/75％己烷)以10％增量的階段梯度洗脫，得到褐色泡沫狀物
+
(0.048g，26％)。ES/MS m/z371.0(M+1)。
[0165] 實施例20
[0166] 3-[3-氯-5-(2-甲基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-基]-7-(1-丙基-丁基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0167]
[0168] 將1-甲基-1，2，4-三唑(0.120，1.43mmol)和無水THF(5mL)裝入烘干燒瓶，在惰性氣氛下冷凍至-78℃。加入正丁基鋰(2.5M，在己烷中，0.60mL，1.43mmol)，在降低的溫度
攪拌30分鐘。以一個等分試樣加入無水氯化鋅(0.400g，2.90mmol)，在降低的溫度攪拌15
分鐘。使反應物溫至室溫，攪拌另外的30分鐘。將無水THF(5mL)中的3-(5-溴-3-氯-噻
吩-2-基)-7-(1-丙基-丁基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5a]嘧啶(0.500g，1.27mmol)加
至反應物。用正氬壓脫氣15分鐘，加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.060g，0.052mmol)。在惰
性氣氛下于油浴(90℃)中回流過夜。將反應物冷卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙
酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干
燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷/0％(25％THF/己烷)
至0％己烷/100％(25％THF/己烷)以20％增量的階段梯度洗脫，得到黃色固體(0.140g，
35 +
66％)。ES/MS m/z( Cl)441.7(M+1)。
攪拌30分鐘。以一個等分試樣加入無水氯化鋅(0.400g，2.90mmol)，在降低的溫度攪拌15
分鐘。使反應物溫至室溫，攪拌另外的30分鐘。將無水THF(5mL)中的3-(5-溴-3-氯-噻
吩-2-基)-7-(1-丙基-丁基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5a]嘧啶(0.500g，1.27mmol)加
至反應物。用正氬壓脫氣15分鐘，加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.060g，0.052mmol)。在惰
性氣氛下于油浴(90℃)中回流過夜。將反應物冷卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸乙
酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干
燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷/0％(25％THF/己烷)
至0％己烷/100％(25％THF/己烷)以20％增量的階段梯度洗脫，得到黃色固體(0.140g，
35 +
66％)。ES/MS m/z( Cl)441.7(M+1)。
[0169] 基本上如實施例20中所述制備下列化合物。
[0170]實施例 編號 化學名稱 MS (m/z)
21 3-[3-氯-5-(2-甲基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2- 基]-7-異丙基-2，5-二甲基-吡 387.0 (M+1)+唑并[1，5a]嘧啶
21 3-[3-氯-5-(2-甲基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2- 基]-7-異丙基-2，5-二甲基-吡 387.0 (M+1)+唑并[1，5a]嘧啶
[0171] 制備17
[0172] 2-溴-5-氟-3-甲基苯并[b]噻吩
[0173] 用N-溴代琥珀酰亞胺(56.32g，0.318mol，1.05當量)處理5-氟-3-甲基苯并[b]噻吩(50.32g，0.303mol)在乙腈(350mL)中的機械攪拌的溶液。起初的 吸熱使反應溫
度下降至17℃。隨后的放熱使反應溫度歷經(jīng)10分鐘增加至40℃，此時通過應用冰水浴使
反應物冷卻至18-20℃。在室溫攪拌反應物另外的35分鐘，用水(350mL)緩慢稀釋所得漿
液。攪拌漿液10分鐘。將產(chǎn)物過濾，用50∶50 乙腈∶水(100mL)洗滌，干燥，得到無色結(jié)
晶固體(65.56g，88％)。
度下降至17℃。隨后的放熱使反應溫度歷經(jīng)10分鐘增加至40℃，此時通過應用冰水浴使
反應物冷卻至18-20℃。在室溫攪拌反應物另外的35分鐘，用水(350mL)緩慢稀釋所得漿
液。攪拌漿液10分鐘。將產(chǎn)物過濾，用50∶50 乙腈∶水(100mL)洗滌，干燥，得到無色結(jié)
晶固體(65.56g，88％)。
[0174] 實施例22
[0175] 3-(5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩-2-基)-7-異丙基-2，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0176]
[0177] 將2-溴-5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩(0.490，2.00mmol)和無水THF(5mL)裝入烘干燒瓶，在惰性氣氛下冷凍至-50℃。逐滴加入正丁基鋰(2.5M，在己烷中，0.80mL，
2.0mmol)，攪拌30分鐘。以一個等分試樣加入無水氯化鋅(0.550g，4.00mmol)，在降低的溫
度攪拌15分鐘。使反應物溫至室溫，攪拌另外的30分鐘。加入無水THF(5mL)中的7-異
丙基-3-碘-2，5-二甲基-吡唑并[1，5a]嘧啶(0.316g，1.00mmol)。用正氬壓脫氣15分
鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷(0.082g，0.1mmol)。在
惰性氣氛下于油浴(90℃)中回流過夜。將反應物冷卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸
乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干
燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷/0％(20％乙酸乙酯/己
烷)至0％己烷/100％(20％乙酸乙酯/己烷)以20％增量的階段梯度洗脫，獲得灰白色
+
泡沫(0.206g，58％)。ES/MS m/z354.0(M+1)。
2.0mmol)，攪拌30分鐘。以一個等分試樣加入無水氯化鋅(0.550g，4.00mmol)，在降低的溫
度攪拌15分鐘。使反應物溫至室溫，攪拌另外的30分鐘。加入無水THF(5mL)中的7-異
丙基-3-碘-2，5-二甲基-吡唑并[1，5a]嘧啶(0.316g，1.00mmol)。用正氬壓脫氣15分
鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷(0.082g，0.1mmol)。在
惰性氣氛下于油浴(90℃)中回流過夜。將反應物冷卻至室溫，用飽和氯化銨淬滅，用乙酸
乙酯(75mL)稀釋。分離，用乙酸乙酯(50mL)萃取水相部分。合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干
燥，過濾，減壓濃縮。使用快速色譜法純化所得殘渣，用100％己烷/0％(20％乙酸乙酯/己
烷)至0％己烷/100％(20％乙酸乙酯/己烷)以20％增量的階段梯度洗脫，獲得灰白色
+
泡沫(0.206g，58％)。ES/MS m/z354.0(M+1)。
[0178] 基本上如實施例22中所述制備下列化合物。
[0179]實施例 編號 化學名稱 MS(m/z)
23 7-(1-乙基-丙基)-3-(5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩 -2-基)-2，5-二甲基-吡唑 (APCI)382.2 (M+1)+并[1，5-a]嘧啶
24 7-(1-丙基-丁基)-3-(5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩 -2-基)-2，5-二甲基-吡唑 (APCI)410.0 (M+1)+并[1，5-a]嘧啶
23 7-(1-乙基-丙基)-3-(5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩 -2-基)-2，5-二甲基-吡唑 (APCI)382.2 (M+1)+并[1，5-a]嘧啶
24 7-(1-丙基-丁基)-3-(5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩 -2-基)-2，5-二甲基-吡唑 (APCI)410.0 (M+1)+并[1，5-a]嘧啶
[0180] 制備18
[0181] 5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩-2-基代硼酸
[0182] 在干燥燒瓶中合并5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩(312mg，1.88mmol)與干THF(4mL)。冷卻至-78℃，加入正丁基鋰(1.6N，在己烷中，1.18mL，1.90mmol)。在-78℃攪
拌1.5小時，然后加入硼酸三甲酯(0.23mL，2.02mmol)。攪拌3小時，將冷浴升至-20℃。加
入5N鹽酸直至反應物為酸性(pH＝4)。用水稀釋，用乙酸乙酯萃取(3×)。合并有機相，
經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，蒸發(fā)。在二氯甲烷中研磨，得到白色固體(258mg，65％)。ES/MSm/z
209(M-1)-。
拌1.5小時，然后加入硼酸三甲酯(0.23mL，2.02mmol)。攪拌3小時，將冷浴升至-20℃。加
入5N鹽酸直至反應物為酸性(pH＝4)。用水稀釋，用乙酸乙酯萃取(3×)。合并有機相，
經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，蒸發(fā)。在二氯甲烷中研磨，得到白色固體(258mg，65％)。ES/MSm/z
209(M-1)-。
[0183] 實施例25
[0184] 7-丁基-3-(5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩-2-基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0185] 將四(三苯基膦)鈀(0)(31mg，0.03mmol)和7-丁基-3-碘-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(174mg，0.53mmol)加至經(jīng)脫氣的無水THF(10mL)。攪拌混合物10分鐘。加
入2-代硼酸-5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩(111mg，0.53mmol)和碳酸鈉水溶液(112mg，
1.06mmol，5mL水中)。將混合物加熱至70℃達24小時。冷卻至室溫。用乙醚稀釋，然后用
水和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥有機相，過濾，濃縮。經(jīng)HPLC純化殘渣，用乙腈/水/TFA洗
脫，得到標題化合物(55mg，28％)。ES/MS m/z 368(M+1)+。
入2-代硼酸-5-氟-3-甲基-苯并[b]噻吩(111mg，0.53mmol)和碳酸鈉水溶液(112mg，
1.06mmol，5mL水中)。將混合物加熱至70℃達24小時。冷卻至室溫。用乙醚稀釋，然后用
水和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥有機相，過濾，濃縮。經(jīng)HPLC純化殘渣，用乙腈/水/TFA洗
脫，得到標題化合物(55mg，28％)。ES/MS m/z 368(M+1)+。
[0186] 制備19
[0187] 4-氯-噻吩-2-甲腈
[0188] 將22-L反應燒瓶裝備冷卻浴、空氣攪拌器、氣體添加管和溫度計探針。 用氮凈化燒瓶，然后裝入AlCl3(1025g，7.69mol)和CHCl3(6.6L，16.5vol.)。將混合物冷卻至0-5℃，
使用添加漏斗歷經(jīng)10-15分鐘逐滴加入2-噻吩甲腈(400g，3.66mol)，同時將溫度保持在
≤10℃。在≤10℃向混合物表面下充氣Cl2氣體(300g，4.23mol，1.16當量)1.25小時。
通過GC監(jiān)控反應的進程。將反應混合物的等分試樣淬滅入6N HCl中，用EtOAc萃取，經(jīng)
Na2SO4干燥，過濾，注射濾液。
使用添加漏斗歷經(jīng)10-15分鐘逐滴加入2-噻吩甲腈(400g，3.66mol)，同時將溫度保持在
≤10℃。在≤10℃向混合物表面下充氣Cl2氣體(300g，4.23mol，1.16當量)1.25小時。
通過GC監(jiān)控反應的進程。將反應混合物的等分試樣淬滅入6N HCl中，用EtOAc萃取，經(jīng)
Na2SO4干燥，過濾，注射濾液。
[0189] 當通過GC分析反應完全(當根據(jù)GC的面積％(起始原料∶產(chǎn)物∶二氯化物)的比率約為(1∶5.8∶1)時，則認為反應完全)時，使用添加漏斗歷經(jīng)1.5小時逐滴加入6N
HCl(8.0L)，同時保持溫度為≤20℃。添加HCl極其放熱，放出氣體。將反應物移至分液漏
斗，分層。用CHCl3(4.0L)萃取水層，合并氯仿層，用水(6.0L)洗滌。經(jīng)Na2SO4干燥有機部
分，過濾，真空濃縮，得到淡黃色的半固體(575g，109％)。GC(60℃至280℃溫度梯度)面
積％分析顯示有約68％產(chǎn)物(t保留時間＝6.5分鐘)，主要雜質(zhì)是未反應的起始原料(t保留時
間＝5.1分鐘)和二氯化產(chǎn)物(t保留時間＝7.4分鐘)。GC法：柱：DB1；T注射＝300℃；T初始＝
60℃，t＝2.0分鐘；T最終＝280℃，速率＝18℃/分鐘。
HCl(8.0L)，同時保持溫度為≤20℃。添加HCl極其放熱，放出氣體。將反應物移至分液漏
斗，分層。用CHCl3(4.0L)萃取水層，合并氯仿層，用水(6.0L)洗滌。經(jīng)Na2SO4干燥有機部
分，過濾，真空濃縮，得到淡黃色的半固體(575g，109％)。GC(60℃至280℃溫度梯度)面
積％分析顯示有約68％產(chǎn)物(t保留時間＝6.5分鐘)，主要雜質(zhì)是未反應的起始原料(t保留時
間＝5.1分鐘)和二氯化產(chǎn)物(t保留時間＝7.4分鐘)。GC法：柱：DB1；T注射＝300℃；T初始＝
60℃，t＝2.0分鐘；T最終＝280℃，速率＝18℃/分鐘。
[0190] 制備20
[0191] 4-氯-2-噻吩甲酰胺
[0192] 將12-L反應燒瓶裝備冷卻浴、空氣攪拌器和溫度計探針，裝入KOH(288.6g，5.143mol)和水(6.04L)以形成放熱至約31℃的溶液。將溶液冷卻至約28℃，將4-氯-2-噻
吩甲腈(671.3g，4.675mol)裝入混合物(少量固體未溶解)。加入EtOH(675mL)，此時發(fā)生
逐漸放熱，持續(xù)1-1.5小時直至約38℃。在環(huán)境溫度將反應物攪拌過夜。真空過濾反應混
合物，用水洗滌，干燥，得到粗產(chǎn)物。將該固體溶解于EtOAc(10.0L)，用Na2SO4和活性炭處
理1-2小時，然后過濾，用EtOAc洗滌。于45℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮濾液直至固體開始沉淀。
釋放真空，使溫度增至60-65℃以再溶解固體。在60℃邊攪拌邊緩慢加入庚烷(3.5L)以沉
淀固體。在60℃攪拌15-20分鐘，然后將混合物冷卻至30-40℃，過濾。用庚烷洗滌固體
(2×0.75L)，干燥，得到標題化合物，為白色固體(235.4g，31％)。從濾液獲得第二批產(chǎn)物
(67.8g， 9％)。
吩甲腈(671.3g，4.675mol)裝入混合物(少量固體未溶解)。加入EtOH(675mL)，此時發(fā)生
逐漸放熱，持續(xù)1-1.5小時直至約38℃。在環(huán)境溫度將反應物攪拌過夜。真空過濾反應混
合物，用水洗滌，干燥，得到粗產(chǎn)物。將該固體溶解于EtOAc(10.0L)，用Na2SO4和活性炭處
理1-2小時，然后過濾，用EtOAc洗滌。于45℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮濾液直至固體開始沉淀。
釋放真空，使溫度增至60-65℃以再溶解固體。在60℃邊攪拌邊緩慢加入庚烷(3.5L)以沉
淀固體。在60℃攪拌15-20分鐘，然后將混合物冷卻至30-40℃，過濾。用庚烷洗滌固體
(2×0.75L)，干燥，得到標題化合物，為白色固體(235.4g，31％)。從濾液獲得第二批產(chǎn)物
(67.8g， 9％)。
[0193] 制備21
[0194] 4-氯-N-二甲氨基亞甲基-2-噻吩甲酰胺
[0195] 將5-L反應燒瓶裝備上加熱套、空氣攪拌器、Dean-Stark裝置和溫度計探針。裝入4-氯-2-噻吩甲酰胺(300g，1.856mol)和二甲基甲酰胺縮二甲醇(872mL)以形成漿液。
將混合物逐漸加熱至96℃同時收集餾出物(大部分是MeOH)。去除加熱套，冷卻至≤25℃。
使用添加漏斗加入水(3.0L)，將溫度保持在≤35℃。用EtOAc(3.0L，1.5L)萃取反應混合
物。合并有機物，用水(1.5L)洗滌。經(jīng)Na2SO4干燥有機相，過濾，真空濃縮，得到粗產(chǎn)物
(400g)。
將混合物逐漸加熱至96℃同時收集餾出物(大部分是MeOH)。去除加熱套，冷卻至≤25℃。
使用添加漏斗加入水(3.0L)，將溫度保持在≤35℃。用EtOAc(3.0L，1.5L)萃取反應混合
物。合并有機物，用水(1.5L)洗滌。經(jīng)Na2SO4干燥有機相，過濾，真空濃縮，得到粗產(chǎn)物
(400g)。
[0196] 在50-60℃將所述產(chǎn)物溶解于EtOAc(320mL，0.8vol)。緩慢加入庚烷(1700mL，4.25vol.)，同時逐漸增加溫度至70℃。將晶種加至混濁溶液以啟動沉淀。將所得混合物在
室溫攪拌過夜，然后過濾，用庚烷洗滌。干燥固體，得到標題化合物，為白色固體(329.8g，
82％)。
室溫攪拌過夜，然后過濾，用庚烷洗滌。干燥固體，得到標題化合物，為白色固體(329.8g，
82％)。
[0197] 制備22
[0198] 5-(4-氯-噻吩-2-基)-1-甲基-1H-[1，2，4]三唑
[0199] 將3-L反應燒瓶裝備冷卻浴、空氣攪拌器和溫度計探針，裝入4-氯-N-二甲氨基亞甲基-2-噻吩甲酰胺(155g，0.715mol)和HOAc(1500mL)以形成溶液。使用冰水冷卻浴
以使溫度保持在≤30℃，使用添加漏斗歷經(jīng)15-20分鐘逐滴加入甲基肼(33.2g，0.721mol)
以形成淺黃色漿液。將反應物逐漸加熱至90℃，在90℃保持30分鐘。經(jīng)GC分析混合物，
然后使反應物冷卻至約70℃，濃縮至粘稠的油/漿液。緩慢加入水(1.67L)以沉淀固體，
將混合物冷卻至＜30℃，過濾，用水(1.67L)洗滌。將濕固體(125.8g)溶解于溫熱的叔丁
基甲醚(1.64L)，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮至干，提供標題化合物，為淡黃色固體(85.8g，
60％)。
以使溫度保持在≤30℃，使用添加漏斗歷經(jīng)15-20分鐘逐滴加入甲基肼(33.2g，0.721mol)
以形成淺黃色漿液。將反應物逐漸加熱至90℃，在90℃保持30分鐘。經(jīng)GC分析混合物，
然后使反應物冷卻至約70℃，濃縮至粘稠的油/漿液。緩慢加入水(1.67L)以沉淀固體，
將混合物冷卻至＜30℃，過濾，用水(1.67L)洗滌。將濕固體(125.8g)溶解于溫熱的叔丁
基甲醚(1.64L)，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮至干，提供標題化合物，為淡黃色固體(85.8g，
60％)。
[0200] 制備23
[0201] 5-(5-溴-4-氯-噻吩-2-基)-1-甲基-1H-[1，2，4]三唑
[0202] 將3-L反應燒瓶裝備冷卻浴、空氣攪拌器和溫度計探針，裝入5-(4-氯-噻吩-2-基)-1-甲基-1H-[1，2，4]三唑(105.3g，0.527mol)、乙腈(1053mL)和 HOAc(105mL)
以形成溶液。在30-60分鐘內(nèi)分批加入N-溴代琥珀酰亞胺(103.2g，0.580mol)同時將溫
度保持在≤31℃。攪拌1小時，此時GC分析顯示反應完全。將反應混合物傾入水(2.1L，
20體積)中，攪拌30分鐘，過濾，用水洗滌(2×1L)。于45℃在真空烘箱中將產(chǎn)物干燥過
夜，得到標題化合物，為淡黃色固體(123.0g，84％)。
以形成溶液。在30-60分鐘內(nèi)分批加入N-溴代琥珀酰亞胺(103.2g，0.580mol)同時將溫
度保持在≤31℃。攪拌1小時，此時GC分析顯示反應完全。將反應混合物傾入水(2.1L，
20體積)中，攪拌30分鐘，過濾，用水洗滌(2×1L)。于45℃在真空烘箱中將產(chǎn)物干燥過
夜，得到標題化合物，為淡黃色固體(123.0g，84％)。
[0203] 實施例26
[0204] 7-丁基-3-[3-氯-5-(2-甲基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-基]-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶
[0205]
[0206] 將5-(5-溴-4-氯-噻吩-2-基)-1-甲基-1H-[1，2，4]三唑(169mg，0.61mmol)加至無水THF(5mL)。冷卻至-78℃。加入叔丁基鋰(0.81mL，1.37mmol，1.7M，在戊烷中)。攪拌
45分鐘，然后緩慢加入氯化鋅(1.5mL，1.76mmol，0.5M，在THF中)。攪拌5分鐘，然后加熱至
室溫，攪拌15分鐘。加入雙(三叔丁基膦)鈀(0)(62mg，0.12mmol)和7-丁基-3-碘-2，
5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(200mg，0.61mmol)。加熱至回流過夜。將反應物經(jīng)硅藻
土過濾，濃縮至干。使用硅膠柱色譜法純化，用0-50％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到標題化合
35 +
物(36mg，15％)。ES/MS m/z( Cl)401(M+1)。
45分鐘，然后緩慢加入氯化鋅(1.5mL，1.76mmol，0.5M，在THF中)。攪拌5分鐘，然后加熱至
室溫，攪拌15分鐘。加入雙(三叔丁基膦)鈀(0)(62mg，0.12mmol)和7-丁基-3-碘-2，
5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶(200mg，0.61mmol)。加熱至回流過夜。將反應物經(jīng)硅藻
土過濾，濃縮至干。使用硅膠柱色譜法純化，用0-50％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到標題化合
35 +
物(36mg，15％)。ES/MS m/z( Cl)401(M+1)。
[0207] 實施例27
[0208] {5-[7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-甲基-噻吩-2-基}-二甲基-胺鹽酸鹽
[0209] 將3-(5-硝基-3-甲基-噻吩-2-基)-7-(1-乙基-丙基)-2，5-二甲基-吡唑并[1，5a]嘧啶(0.36g，1.0mmol)溶解于含有10％披鈀碳(0.20g)的THF(5mL)中，用真空
/氫氣流吹掃脫氣(3×)，在氫氣氛(55psi)下于室溫攪拌3小時。使用TLC確認反應完
全。用THF(50mL)稀釋反應物，經(jīng)硅藻土過濾。以60％ 油懸液形式加入氫化鈉(0.10g，
2.25mmol)，在室溫攪拌20分鐘。將碘甲烷(0.140mL，2.25mmol)加至反應物，于50℃在密封
的反應容器中攪拌過夜。用水淬滅反應物，用乙酸乙酯(100mL)稀釋。用水、飽和氯化銨和
鹽水洗滌有機部分。經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮至油。使用快速色譜法純化所得殘
渣，用100％己烷/0％(25％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(25％乙酸乙酯/己烷)
以10％增量的階段梯度洗脫，得到泡沫(0.145g，41％)。將產(chǎn)物(0.13g，0.365mmol)溶解于
甲醇(3mL)中，加入4.0M HCl-二噁烷(3mL)。將反應物攪拌30分鐘，用正氬壓泄放(blow
+
down)反應物。在真空烘箱中干燥，提供白色固體(0.125g)。ES/MS m/z 357.2(M+1)。
/氫氣流吹掃脫氣(3×)，在氫氣氛(55psi)下于室溫攪拌3小時。使用TLC確認反應完
全。用THF(50mL)稀釋反應物，經(jīng)硅藻土過濾。以60％ 油懸液形式加入氫化鈉(0.10g，
2.25mmol)，在室溫攪拌20分鐘。將碘甲烷(0.140mL，2.25mmol)加至反應物，于50℃在密封
的反應容器中攪拌過夜。用水淬滅反應物，用乙酸乙酯(100mL)稀釋。用水、飽和氯化銨和
鹽水洗滌有機部分。經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮至油。使用快速色譜法純化所得殘
渣，用100％己烷/0％(25％乙酸乙酯/己烷)至0％己烷/100％(25％乙酸乙酯/己烷)
以10％增量的階段梯度洗脫，得到泡沫(0.145g，41％)。將產(chǎn)物(0.13g，0.365mmol)溶解于
甲醇(3mL)中，加入4.0M HCl-二噁烷(3mL)。將反應物攪拌30分鐘，用正氬壓泄放(blow
+
down)反應物。在真空烘箱中干燥，提供白色固體(0.125g)。ES/MS m/z 357.2(M+1)。
[0210] 實施例A
[0211] 使用離體結(jié)合的體內(nèi)功效評價
[0212] 為了評價體內(nèi)功效，使用離體結(jié)合評價本發(fā)明化合物。使用如D.R.Gehlert等人，EJP 509：145-153(2005)中提供的方法，經(jīng)由口服途徑向大鼠施用化合物。然后如Gehlert
125
等人所述，離體評價 I-蛙皮降壓肽與小腦的結(jié)合。例如，實施例20在10mg/kg時提供
74％抑制。
125
等人所述，離體評價 I-蛙皮降壓肽與小腦的結(jié)合。例如，實施例20在10mg/kg時提供
74％抑制。
[0213] 實施例B
[0214] CRF1濾膜結(jié)合試驗
[0215] 通過使用由Stanford許可的Phoenix逆轉(zhuǎn)錄病毒表達系統(tǒng)，克服了基于質(zhì)粒的人CRF1表達在生成具有足以開展結(jié)合試驗的受體密度的重組細胞系方面的局限性。穩(wěn)定的
125
HEK-hCRF1細胞系用于制備膜，且結(jié)合反應物(200μl)如下建立：50μl I-蛙皮降壓肽
(最終0.2nM)、50μl化合物和100μlCRF1膜(25μg/反應)。將反應物在室溫孵化2小
時，然后經(jīng)預處理的FBMillipore玻璃纖維濾板(96孔)過濾而終止。將所述板用冰冷的
試驗緩沖液(50mM tris、12.5mM NaCl、1mM EDTA、10mM MgCl2、0.05％BSA，pH 7.2)洗滌兩
次，風干過夜，用100μl Microscint 40在MicroBeta計數(shù)器中計數(shù)。非特異性結(jié)合(NSB)
在0.5μM未標記的蛙皮降壓肽存在下測定。通常進行一式三份測定，中值數(shù)據(jù)點由Graph
Pad Prism繪圖。
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HEK-hCRF1細胞系用于制備膜，且結(jié)合反應物(200μl)如下建立：50μl I-蛙皮降壓肽
(最終0.2nM)、50μl化合物和100μlCRF1膜(25μg/反應)。將反應物在室溫孵化2小
時，然后經(jīng)預處理的FBMillipore玻璃纖維濾板(96孔)過濾而終止。將所述板用冰冷的
試驗緩沖液(50mM tris、12.5mM NaCl、1mM EDTA、10mM MgCl2、0.05％BSA，pH 7.2)洗滌兩
次，風干過夜，用100μl Microscint 40在MicroBeta計數(shù)器中計數(shù)。非特異性結(jié)合(NSB)
在0.5μM未標記的蛙皮降壓肽存在下測定。通常進行一式三份測定，中值數(shù)據(jù)點由Graph
Pad Prism繪圖。
[0216] 使用此試驗，所實施的本發(fā)明化合物(除了實施例2、3、6、7和8，它們用作其他實125
施例的中間體且未進行測試)抑制 I-蛙皮降壓肽(4nM)在轉(zhuǎn)瓶(roller)/貼壁細胞中
的結(jié)合，Ki(抑制常數(shù))≤500nM。例如，實施例20顯示Ki為4.4nM。
施例的中間體且未進行測試)抑制 I-蛙皮降壓肽(4nM)在轉(zhuǎn)瓶(roller)/貼壁細胞中
的結(jié)合，Ki(抑制常數(shù))≤500nM。例如，實施例20顯示Ki為4.4nM。
[0217] 實施例C
[0218] CRF2濾膜結(jié)合試驗
[0219] 通過使用由Stanford許可的Phoenix逆轉(zhuǎn)錄病毒表達系統(tǒng)，克服了基于質(zhì)粒的人CRF2表達在生成具有足以開展結(jié)合試驗的受體密度的重組細胞系方面的局限性。穩(wěn)定
125
的HEK-hCRF2細胞系用于制備膜，且結(jié)合反應物(200μl)如下建立：50μl I-蛙皮降壓
肽(終濃度0.2nM)、50μl化合物和100μl CRF2膜(25μg/反應)。將反應物在室溫孵化
2小時，然后經(jīng)預處理的FB Millipore玻璃纖維濾板(96孔)過濾而終止。將所述板用冰
冷的試驗緩沖液(50mM tris、12.5mM NaCl、1mM EDTA、10mM MgCl2、0.05％BSA，pH 7.2)洗
滌兩次，風干過夜，用100μl Microscint 40在MicroBeta計數(shù)器中計數(shù)。非特異性結(jié)合
(NSB)在0.5μM未標記的蛙皮降壓肽存在下測定。作為替代選擇，使用閃爍親近測定法評
125
價化合物。此測定如下建立：50ul I-蛙皮降壓肽(0.2nM終濃度)、50μl化合物或未標
記的蛙皮降壓肽(NSB)和100μl含有250μg麥胚凝集素(WGA)SPA珠和CRF2膜(1.5μg/
反應)。將各板在室溫孵化4-5小時，然后以200Xg離心10分鐘。使用Wallac Trilux閃
爍計數(shù)器評價結(jié)合的放射性。結(jié)合通常進行一式三份測定，中值數(shù)據(jù)點由Graph Pad Prism
繪圖?；衔锲鸪跻怨潭舛群Y選，如果記錄充分的活性，那么隨后產(chǎn)生濃度-反應曲線。
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的HEK-hCRF2細胞系用于制備膜，且結(jié)合反應物(200μl)如下建立：50μl I-蛙皮降壓
肽(終濃度0.2nM)、50μl化合物和100μl CRF2膜(25μg/反應)。將反應物在室溫孵化
2小時，然后經(jīng)預處理的FB Millipore玻璃纖維濾板(96孔)過濾而終止。將所述板用冰
冷的試驗緩沖液(50mM tris、12.5mM NaCl、1mM EDTA、10mM MgCl2、0.05％BSA，pH 7.2)洗
滌兩次，風干過夜，用100μl Microscint 40在MicroBeta計數(shù)器中計數(shù)。非特異性結(jié)合
(NSB)在0.5μM未標記的蛙皮降壓肽存在下測定。作為替代選擇，使用閃爍親近測定法評
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價化合物。此測定如下建立：50ul I-蛙皮降壓肽(0.2nM終濃度)、50μl化合物或未標
記的蛙皮降壓肽(NSB)和100μl含有250μg麥胚凝集素(WGA)SPA珠和CRF2膜(1.5μg/
反應)。將各板在室溫孵化4-5小時，然后以200Xg離心10分鐘。使用Wallac Trilux閃
爍計數(shù)器評價結(jié)合的放射性。結(jié)合通常進行一式三份測定，中值數(shù)據(jù)點由Graph Pad Prism
繪圖?；衔锲鸪跻怨潭舛群Y選，如果記錄充分的活性，那么隨后產(chǎn)生濃度-反應曲線。
[0220] 本發(fā)明化合物優(yōu)選顯示對CRF2受體的弱親和力(相對于CRF1)。例如，實施例20在50μM濃度時顯示39％抑制。
[0221] 實施例D
[0222] 生物利用度和藥動學特性
[0223] 分布容積(Vdist)將體內(nèi)藥物的量與血液或血漿中藥物的濃度相聯(lián)系。分布容積是指以與血液或血漿中相同的濃度包含體內(nèi)藥物總量所需的液 體體積：Vdist＝體內(nèi)藥
物的量/血液或血漿中藥物的濃度(Goodman和Gillman，s)。對于10mg劑量和10mg/L的
血漿濃度，分布容積為1升。分布容積反映藥物存在于血管外組織中的程度。大的分布容
積反映相較于血漿蛋白結(jié)合，化合物結(jié)合組織成分的趨向。在臨床環(huán)境下，Vdist可用于測
定達到穩(wěn)態(tài)濃度的負荷劑量(loading dose)。
物的量/血液或血漿中藥物的濃度(Goodman和Gillman，s)。對于10mg劑量和10mg/L的
血漿濃度，分布容積為1升。分布容積反映藥物存在于血管外組織中的程度。大的分布容
積反映相較于血漿蛋白結(jié)合，化合物結(jié)合組織成分的趨向。在臨床環(huán)境下，Vdist可用于測
定達到穩(wěn)態(tài)濃度的負荷劑量(loading dose)。
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