細胞結(jié)合分子的特異性偶聯(lián)
專利匯可以提供細胞結(jié)合分子的特異性偶聯(lián)專利檢索，專利查詢，專利分析的服務(wù)。并且本 發(fā)明 描述了一類包含橋連接體的細胞結(jié)合劑-藥物偶聯(lián)物以及連接體和偶聯(lián)物的應(yīng)用。，下面是細胞結(jié)合分子的特異性偶聯(lián)專利的具體信息內(nèi)容。
1.結(jié)構(gòu)式為(I)的橋連接體：
其中連接體上的乙炔乙二酸結(jié)構(gòu)可以和細胞結(jié)合劑中的一對硫原子反應(yīng)；
Z1和Z2是相同的或不同的能和細胞毒性藥物反應(yīng)的官能團，可通過生成二硫鍵、醚鍵、
酯鍵、硫醚鍵、硫酯鍵、肽鍵、腙鍵、氨基甲酸酯鍵、碳酸酯鍵、胺鍵(二級，三級或四級)、亞胺鍵、雜環(huán)烷基、雜芳基、烷氧肟鍵或酰胺鍵與毒性小分子藥物結(jié)合；
R1和R2是相同的、不同的或缺省的含1～6個碳原子的直鏈烷基，3到6個碳原子的支鏈或
環(huán)烷基，直鏈、直鏈或環(huán)烯基或炔基，或1～6個碳原子的酯基、醚基、酰胺基或聚乙氧基
(OCH2CH2)p，其中p是0到約1000的整數(shù)，或這些基團的組合；
另外，R1和R2是包含C,N,O,S,Si,和P原子的鏈狀結(jié)構(gòu)，最優(yōu)含0～500個原子，共價連接
于X1或X2和Z1或Z2；R1和R2中的各個原子以所有可能的化學(xué)方式結(jié)合，比如形成烷基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、醚、聚氧烷基、酯、胺、亞胺、聚胺、肼、腙、酰胺、脲、氨基脲、卡巴肼、烷氧胺、聚氨酯、氨基酸、多肽、酰氧胺、異羥肟酸，或這些基團的組合；
X1和X2獨立選自NH,N(R3),O,S或CH2；R3是H,1～6個碳原子的直鏈烷基，3到6個碳原子的
支鏈或環(huán)狀烷基，直鏈、支鏈或環(huán)烯基或炔基，或1～6個碳原子的酯、醚、酰胺或聚乙氧單元(OCH2CH2)p，其中p是0到1000的整數(shù)，或這些基團的組合。
2.結(jié)構(gòu)為公式(II)的細胞結(jié)合劑-藥物偶聯(lián)物：
其中：
Cb為細胞結(jié)合劑，最優(yōu)為抗體；
括號內(nèi)是通過一對硫原子與細胞結(jié)合分子偶聯(lián)的連接體-藥物組分；
Drug1和Drug2為相同的或不同的細胞毒性劑，它們以烷基、亞烷基、亞烯基、亞炔基、醚、聚烷氧基、酯、胺，亞胺，聚胺、肼、腙、酰胺、脲、氨基脲、卡巴肼、烷氧基胺、氨基甲酸酯、氨基酸、肽、酰氧胺、異羥肟酸、二硫鍵、硫醚、硫酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、雜環(huán)、雜烷基、雜芳基或烷氧肟鍵及其組合與細胞結(jié)合劑鏈接；
n是1～20；R1,R2,X1和X2的定義同權(quán)利要求1。
3.結(jié)構(gòu)式如(III)的化合物：
其中Cb,Z1,Z2,n,R1,R2,X1和X2的定義同權(quán)利要求1和2。
4.結(jié)構(gòu)式如(IV)的化合物：：
其中Drug1,Drug2,Z1,Z2,n,R1,R2,X1,和X2的定義同權(quán)利要求1和2。
5.在權(quán)利要求1中，含有乙炔二羰基類橋連接體的合成是，乙炔二羰基或其衍生物，和
其他組分末端胺(一級或二級胺)、醇或硫醇的縮合，如下面(Ia)所示：
其中，X是在權(quán)利要求1中的X1或X2的描述，指N(R3),O,或S；R是R1和/或R2，R1、R2和R3定義同權(quán)利要求1。
Lv1和Lv2相同的或各自獨立的OH、F、Cl、Br、I、硝基苯酚、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、苯酚、二硝基苯酚、五氟苯酚、四氟苯酚、二氟苯酚、單氟苯酚、五氯酚、三氟甲基磺酸、咪唑、二氯苯酚、四氯苯酚、1-羥基苯并三氮唑、對甲苯磺酸、甲磺酸、2-乙基-5-苯基異惡唑-3'-磺酸、酸酐或與其他酸酐如乙酰酐、甲酸酐形成的酸酐；或多肽縮合反應(yīng)中間體或Mitsunobu反應(yīng)中間體；縮合試劑包括：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，N,N'-二異丙基碳二酰亞胺(DIC)，1-環(huán)已基-2-嗎啉乙基碳二亞胺對甲苯
磺酸鹽(CMC,或CME-CDI)，羰基二咪唑(CDI)，TBTU(O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四
氟硼酸)，O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨
基)磷鎓六氟磷酸鹽(BOP)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)，焦碳酸二乙酯(DEPC)，N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，1-[(二甲胺)(嗎啉基)亞甲基]-1[1,2,3]三唑并[4,5-b]1-吡
啶-3-氧六氟磷酸鹽(HDMA)，2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸鹽(CIP)，氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(PyCloP)，雙(四亞甲基)氟代甲酰胺(BTFFH)，N,N,N',N'-四甲基-硫-(1-氧代-
2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸鹽，2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TPTU)，硫-(1-氧代-2-吡啶基)-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸鹽，O-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-
N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸鹽(HOTU)，(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亞乙基氨基氧基)二
甲基氨基-嗎啉-碳鎓六氟磷酸鹽(COMU)，(苯并三氮唑-1-基氧基)二吡咯烷碳六氟磷酸鹽
(HBPyU)，N-芐基-N′-環(huán)己基碳二亞胺(或荷載在聚合物上)，二吡咯烷基(N-琥珀酰亞氨氧基)碳鎓六氟磷酸鹽(HSPyU)，1-(氯-1-吡咯烷基亞甲基)吡咯烷六氟磷酸鹽(PyClU)，2-氯-
1,3-二甲基咪唑四氟硼酸鹽(CIB)，(苯并三氮唑-1-基氧基)二哌啶碳六氟磷酸鹽
(HBPipU)，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TCTU)，溴化三(二甲基氨基)膦六氟磷酸(BroP)，1-正丙基磷酸酐(PPACA， )，2-異氰基乙基嗎啉(MEI)，N,N,N',N'-四
甲基脲-氧-(N-琥珀酸亞胺基)六氟磷酸鹽(HSTU)，2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸鹽(BEP)，氧-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟硼酸鹽(TOTU)，4-(4,6-二甲氧基三
嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(MMTM,DMTMM)，2-琥珀酰亞胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸
酯(TSTU)，N,N,N',N'-四甲基-O-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基)脲四氟硼酸鹽
(TDBTU)，偶氮二甲酰二哌啶(ADD)，雙(4-氯芐基)偶氮二甲酸酯(DCAD)，偶氮二甲酸二叔丁酯(DBAD)，偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)，偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)。
6.權(quán)利要求1中，橋連接體上乙炔二羰基與其他官能團縮合，延伸碳鏈，合成步驟為二
(三甲基硅基)乙炔、乙炔二溴化鎂(格氏試劑)、乙炔二鋰鹽或其它乙炔二金屬鹽，和酰鹵或酸酐的反應(yīng)，圖示如(Ib),(Ic),(Id),(Ie),(If),(Ig)和(Ih)：
這里M是Na,K,Li,Cu,CuLi,Sn,Ti,Ca,Mg或Zn。
7.在權(quán)利要求2和4中，公式(II)和(IV)里的Drug1和Drug2相同或各自獨立選自：
1)化療劑：a)烷基化劑，如氮芥：氯苯那普，氯普那嗪，環(huán)磷酰胺，達卡巴嗪，雌二醇氮
芥，異環(huán)磷酰胺，氮芥，鹽酸二甲氧胺，氧化二氮芥，鹽酸氨氯地平，麥考酚酸，衛(wèi)矛醇，哌泊溴烷，新氮芥，苯芥膽甾醇，松龍苯芥，噻替哌，曲磷胺對，尿嘧啶；CC-1065(包括其阿多來新，卡折來新和比折來新合成同系物)；多卡霉素(包括合成同系物KW-2189和CBI-TMI)；苯并二氮卓二聚體(例如吡咯并苯二氮卓(PBD)或托美霉素，吲哚并苯并二氮卓，咪唑并苯并
噻二氮卓或惡唑烷并苯并二氮卓的二聚體)；亞硝基脲(卡莫司汀，洛莫司汀，氯化梭菌素，福莫司汀，尼莫司汀，拉莫司汀)；烷基磺酸鹽(白消安，硫丹，硫丹和硫磺)；三氮烯(達卡巴嗪)；含鉑化合物(卡鉑，順鉑，奧沙利鉑)；吖丙啶類，如苯并二氫吡喃酮，卡洛酮，美妥替派和烏雷多巴；乙烯亞胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺，三亞乙基三胺，三乙基磷酰胺，三亞乙基硫代磷酰胺和三羥甲基甲基胺；b)植物生物堿，如長春花生物堿(長春新堿，長春堿，長春地辛，長春瑞濱，去甲長春堿)；類紫杉醇(紫杉醇，多西紫杉醇)及其同系物；美登素生物堿(DM1，DM2，DM3，DM4，DM5，DM6，DM7，美登素和安沙霉素)及其同系物；cryptophycin(特別是cryptophycin?1和cryptophycin8)；埃博霉素，軟珊瑚醇，迪莫利德，草苔蟲內(nèi)酯，海兔毒素，奧瑞他汀，tubulysin，cephalostatin，pancratistatin，sarcodictyin，海綿抑制素；c)DNA拓撲異構(gòu)酶抑制劑，例如依托泊苷替尼(9-氨基喜樹堿，喜樹堿，克立那托，道諾霉素，依托泊苷，磷酸依托泊苷，伊立替康，米托蒽醌，諾消靈，視黃酸(視黃醇)，替尼泊苷，拓撲替康，9-硝基喜樹堿(RFS?2000))；絲裂霉素(絲裂霉素C)；d)抗代謝物，例如抗葉酸劑，DHFR抑制劑(甲氨蝶呤，曲麥克特，二甲葉酸，蝶羅呤，氨喋呤(4-氨基苯甲酸)或其他葉酸同系物)；
IMP脫氫酶抑制劑(麥考酚酸，噻唑呋林，利巴韋林，EICAR)；核糖核苷酸還原酶抑制劑(羥基脲，去鐵胺)；嘧啶同系物，尿嘧啶同系物(安西他濱，阿扎胞苷，6-氮尿嘧啶，卡培他濱(希羅達)，卡莫氟，阿糖胞苷，雙脫氧尿苷，去氧氟尿苷，依諾他濱，5-氟尿嘧啶，氟尿苷，
ratitrexed(Tomudex)；胞嘧啶同系物(阿糖胞苷，胞嘧啶阿拉伯糖苷，氟達拉濱)；嘌呤同系物(硫唑嘌呤，氟達拉濱，巰嘌呤，硫胺素，硫鳥嘌呤)；葉酸補充劑，如弗洛林酸；e)激素療法劑，如受體拮抗劑，抗雌激素(甲地孕酮，雷洛昔芬，他莫昔芬)，LHRH興奮劑(戈斯他林，醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素藥(比卡魯胺，氟他胺，卡魯司酮，丙酸倍他雄酮，表雄甾醇，戈舍瑞林，亮丙瑞林，美替利定，尼魯米特，睪內(nèi)酯，曲洛司坦及其他雄激素抑制劑)；維甲類化合物，維生素D3同系物(CB1093，EB1089KH1060，膽鈣化醇，麥角鈣化甾醇)；光動力療法劑(維替泊芬，酞菁，光敏劑Pc4，去甲氧基-竹紅菌素A)；細胞因子(干擾素-α，干擾素-γ，腫瘤壞死因子(TNF)，含TNF的人蛋白)；f)激酶抑制劑，如BIBW?2992(抗-EGFR/Erb2)，伊馬替尼，吉非替尼，哌加他尼，索拉非尼，達沙替尼，舒尼替尼，厄洛替尼，尼洛替尼，拉帕替尼，阿西替尼，帕唑帕尼，凡德他尼，E7080(抗VEGFR2)，mubritinib，普納替尼(AP24534)，bafetinib(INNO-
406)，bosutinib(SKI-606)，卡博替尼，維莫德吉，iniparib，魯索利替尼，CYT387，阿西替尼，tivozanib，索拉非尼，貝伐單抗，西妥昔單抗，曲妥珠單抗，雷珠單抗，帕尼單抗，伊斯平斯；g)抗生素，如烯二炔類抗生素(加利車霉素，特別是加利車霉素γ1，δ1，α1和β1(參考J.Med.Chem.1996,39(11)，2103-2117；Angew?Chem?Intl.Ed.Engl.1994,33:183-186)，達因霉素，包括達因霉素A和脫氧米霉素，埃斯培拉霉素，卡達霉素，C-1027，maduropeptin以及新制癌菌素發(fā)色團和相關(guān)色蛋白烯二炔抗生素發(fā)色團)，aclacinomysins，放線菌素，安曲霉素，重氮絲氨酸，博來霉素，卡諾霉素，卡拉霉素，洋紅霉素，嗜癌素，阿霉素，阿霉素，嗎啉代阿霉素，2-吡咯啉阿霉素和脫氧柔紅霉素，表柔比星，阿柔比星，伊達比星，馬可霉素，霉素，霉酚酸，洛匹霉素，培洛霉素，培洛霉素，嘌呤霉素，三鐵阿霉素，阿霉素，鏈脲霉素，鏈脲佐菌素，殺結(jié)核菌素，烏苯美司，凈司他丁，佐柔比星；h)其他，如聚酮化合物(番荔素)，特別是bullatacin和bullatacinone；吉西他濱，環(huán)氧酶素(如卡菲偌米布)，硼替佐米，沙利度胺，來那度胺，pomalidomide，tosedostat，zybrestat，PLX4032，STA-9090，Stimuvax，allovectin-7，Xegeva，Provenge，Yervoy，異戊二烯化抑制劑(如洛伐他汀)，多巴胺能神經(jīng)毒素(如星形孢菌素)，放線菌素(如放線菌素D，更生霉素)，博萊霉素(如博來霉素A2，博萊霉素B2，培洛霉素)，蒽環(huán)類抗生素(如柔紅霉素)，阿霉素(亞德里亞霉素)，伊達比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，MDR抑制劑(如維拉帕米)，Ca2+ATP酶抑制劑(如毒胡蘿卜素)，組蛋白去乙酰酶抑制劑(伏立諾他，羅米地辛，帕比司他，丙戊酸，Mocetinostat
(MGCD0103)，Belinostat，PCI-24781，恩替諾特，SB939，Resminostat，Givinostat，AR-42，CUDC-101，蘿卜硫素，曲古抑菌素A)；塞來昔布，格列酮類，表沒食子兒茶素沒食子酸酯，雙硫侖，Salinosporamide?A；抗腎上腺藥物，如氨魯米特，米托坦，曲洛司坦，醋葡醛內(nèi)酯，醛磷酰胺，氨基乙酰丙酸，安吖啶，阿拉伯糖苷，bestrabucil，比生群，edatraxate，defofamine，美可辛，地吖醌，依氟鳥氨酸(DFMO)，elfomithine，依利醋銨，乙基葡糖酸，硝酸鎵，胞嘧啶，羥基脲，伊班膦酸鹽，香菇多糖，氯尼達明，米托胍腙，米托蒽醌，莫哌達醇，二胺硝吖啶，噴司他丁，蛋氨氮芥，吡柔比星，鬼臼酸，2-乙肼，甲基芐肼； 哌嗪二酮丙烷；根霉素；西佐；螺環(huán)鍺；細格孢氮雜酸；三亞胺醌；三氯三乙胺；單端孢霉烯(特別是T-2毒素，疣孢菌素A，桿孢菌素A和anguidine)，聚氨酯，siRNA，反義藥物和核酸分解酶。
2)自身免疫疾病藥物，包括但不限于環(huán)孢菌素，環(huán)孢菌素A，氨基己酸，硫唑嘌呤，溴隱
亭，苯丁酸氮芥，氯喹，環(huán)磷酰胺，皮質(zhì)類固醇(例如安西奈德，地塞米松，曲安奈德，丙酸倍氯米松，DHEA，依那西普，羥基氯喹，英夫利昔單抗，美洛昔康，甲氨蝶呤，麥考酚酸酯，潑尼松，西羅莫司，他克莫司。
3)抗感染性疾病藥物，包括但不限于a)氨基糖苷類：阿米卡星，阿司米星，慶大霉素(奈
替米星，西索米星，異帕米星)，潮霉素B，卡那霉素(阿米卡星，阿貝卡星，氨基去氧卡那霉素，地貝卡星，妥布霉素)，新霉素(framycetin，巴龍霉素，核糖霉素)，奈替米星，壯觀霉素，鏈霉素，妥布霉素，甲基姿蘇霉素；b)酰胺醇類：疊氮氯霉素，氯霉素，氟苯尼考，甲砜霉素；
c)安沙霉素：格爾德霉素，除莠霉素；d)碳青霉烯類：比阿培南，多利培南，厄他培南，亞胺培南/西司他丁，美羅培南，帕尼培南；e)頭孢烯：碳頭孢烯(洛拉卡比)，頭孢乙腈，氯氨芐青霉素，頭孢拉定，頭孢羥氨，頭孢洛寧，頭孢噻啶，頭孢噻吩或頭孢金素，頭孢氨芐，頭孢來星，頭孢孟多，頭孢匹林，羥胺唑頭孢菌素，氟唑頭孢菌素，孢西酮，唑啉頭孢菌素，頭孢拉宗，頭孢卡品，頭孢達肟，頭孢吡，頭孢克肟，頭孢西丁，頭孢羅齊，頭孢甲氧環(huán)烯胺，頭孢替唑，頭孢呋辛，頭孢克肟，頭孢地尼，頭孢托侖，頭孢吡，頭孢他美，頭孢甲肟，頭孢地嗪，頭孢尼西，頭孢哌酮，頭孢雷特，頭孢噻肟，噻乙胺唑頭孢菌素，頭孢唑蘭，頭孢氨芐，頭孢咪唑，頭孢匹胺，頭孢匹羅，頭孢泊肟，頭孢羅齊，頭孢喹諾，頭孢磺啶，頭孢他啶，頭孢特侖，頭孢布騰，頭孢噻林，頭孢唑肟，頭孢吡普，頭孢曲松，頭孢呋辛，頭孢唑南，頭霉素(頭孢西丁，頭孢替坦，頭孢氰唑)，氧(碳)頭孢烯(氟氧頭孢，頭孢)；f)糖肽：博來霉素，萬古霉素(奧利萬星，特拉萬星)，替考拉寧(達巴萬星)，雷莫拉寧，g)甘氨酰環(huán)素：如替加環(huán)素，h)β-內(nèi)酰胺酶抑制劑：
青霉烷(舒巴坦，他唑巴坦)，氧青霉烷(克拉維酸)；i)林可酰胺：克林霉素，林可霉素；j)脂肽：達托霉素，A54145，鈣依賴性抗生素(CDA)；k)大環(huán)內(nèi)酯類：阿奇霉素，克霉素，克拉霉素，地紅霉素，紅霉素，氟雷霉素，交沙霉素，酮內(nèi)酯(泰利霉素，塞紅霉素)，麥迪霉素，米卡霉素，竹桃霉素，利福霉素(異煙肼、利福平，利福布丁，利福噴汀)，羅匹霉素，羅紅霉素，大觀霉素，螺旋霉素，他克莫司(FK506)，醋竹桃霉素，泰利霉素；l)單環(huán)胺：氨曲南，替吉莫南；m)惡唑烷酮類：利奈唑胺；n)青霉素類：阿莫西林，氨芐青霉素(匹氨西林，海洛西林，巴氨西林，氨芐青霉素，阿霉素)，阿替代西林，阿洛西林，芐青霉素，芐星青霉素芐青霉素，芐星青霉素苯氧甲基青霉素，克洛西林，普魯卡因青霉素(美替西林)，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，醋甲西林，青霉素，非奈西林，苯氧基甲基青霉素，哌拉西林，氨芐西林，磺苯西林，替莫西林，替卡西林；o)多肽：桿菌肽，粘菌素，多粘菌素B，p)喹諾酮類：阿拉曲沙星，巴洛沙星，環(huán)丙沙星，克林沙，達氟沙星，二氟沙星，依諾沙星，恩諾沙星，加雷沙星，加替沙星，吉米沙星，格帕沙星，卡諾曲伐沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，麻保沙星，莫西沙星，那氟沙星，諾氟沙星，奧比沙星，氧氟沙星，培氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，西他沙星，司帕沙星，替馬沙星，托沙星，曲伐沙星；q)鏈陽性菌素：普那霉素，奎奴普丁/達福普汀，r)磺胺類藥物：磺胺類藥物：磺胺類藥物，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，柳氮磺胺吡啶，磺胺異惡唑，三苯氧胺，甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲惡唑(復(fù)方新諾明)；s)類固醇抗菌藥物：如夫西地酸；t)四環(huán)素類：強力霉素，金霉素，氯米西環(huán)素，地美環(huán)素，雷莫昔林，美西環(huán)素，美他環(huán)素，米諾環(huán)素，土霉素，青霉素V鉀哌四環(huán)素，吡咯烷甲基四環(huán)素，四環(huán)素，甘氨酰環(huán)素(如替加環(huán)素)：u)其他類型的抗生素：番荔枝素，胂凡納明，細菌萜醇抑制劑(桿菌)，DANAL/AR抑制劑(環(huán)絲氨酸)，dictyostatin，圓皮海綿內(nèi)酯，軟珊瑚醇，埃博霉素，乙胺丁醇，依托泊苷，法羅培南，夫西地酸，呋喃唑酮，異煙肼，laulimalide，甲硝唑，莫匹羅星，NAM合成抑制劑(例如磷霉素)，呋喃妥因，紫杉醇，普蘭西霉素，吡嗪酰胺，奎奴普丁/達福普汀，利福平(利福平)，他唑巴坦替硝唑，烏菊花素。
4)抗病毒藥物：a)進入/融合抑制劑：阿帕韋洛，馬拉韋羅，vicriviroc，gp41(恩夫韋
肽)，PRO?140，CD4(艾巴利珠單抗)；b)整合酶抑制劑：雷特格韋，elvite-gravir，
globoidnan?A；c)成熟抑制劑：bevirimat，vivecon；d)神經(jīng)氨酸酶抑制劑：奧司他韋，扎那米韋，帕拉米韋；E)核苷和核苷酸：阿巴卡韋，阿昔單韋，阿德福韋，阿莫西韋，阿昔單抗，溴夫定，西多福韋，克拉夫定，地塞米松，去羥肌苷(ddI)，elvucitabine，恩曲他濱(FTC)，恩替卡韋，泛昔洛韋，氟拉西林(5-FU),3’-氟取代的2’，3’-脫氧核苷同系物(如3，3’-氟-2′，3′-雙脫氧胸苷(FLT)和3’-氟-2’，3’-雙脫氧鳥苷(FLG)，福米韋生，9-鳥嘌呤，碘苷，拉米夫定(3TC)，1-核苷(例如β-1-胸苷和β-1-2'-脫氧胞苷)，噴昔洛韋，racivir，利巴韋林，迪替丁，司他夫定(d4T)，塔利巴韋林(viramidine)，替比夫定，替諾福韋，三氟尿苷伐昔洛韋，纈更昔洛韋，扎西他濱(ddC)，齊多夫定(AZT)；f)非核苷類：金剛烷胺，阿替吡啶，卡普韋林，二芳基嘧啶(依曲韋林，rilpivirine)，地拉夫定，二十二烷醇，乙米韋林，依法韋侖，膦甲酸(磷?；姿?，咪喹莫特，聚乙二醇干擾素，洛韋胺，洛德腺苷，甲吲噻腙，奈韋拉平，NOV-205，長效干擾素α，鬼臼毒素，利福平，金剛乙胺，瑞喹莫德(R-848)，醋胺金剛烷；g)蛋白酶抑制劑：安普那韋阿扎那韋，boceprevir，darunavir，福沙那韋，印地那韋，洛匹那韋，奈非那韋，普來可那立，利托那韋，沙奎那韋，telaprevir(VX-950)，替拉那韋；h)其它類型的抗病毒藥物：抗氧化酶，阿比朵爾，卡拉諾萊德，ceragenin，氰維林-n，二芳基嘧啶，表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)，膦甲酸，格里菲辛，taribavirin(viramidine)，羥基脲，KP-1461，米替福新，普來可那立，混成抑制劑，利巴韋林，seliciclib。
5)放射性同位素(放射性核素)，選自3H，11C，14C，18F，32P，35S，64Cu，68Ga，86Y，99Tc，111In，
123I，124I，125I，131I，133Xe，177Lu，211At或213Bi。
6)發(fā)色分子，可以吸收一種光，如紫外光，熒光，紅外光，近紅外光或可見光；黃色素，紅細胞，虹彩色素，白細胞，黑色素和藍綠色素的一類或一個亞類，熒光分子(吸收光后再發(fā)光的熒光化學(xué)物質(zhì))的一類或一個亞類，視覺光轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，光子分子，冷光分子和熒光素化合物；非蛋白質(zhì)有機熒光團，例如氧雜蒽衍生物(熒光素，羅丹明，俄勒岡綠，伊紅和德克薩斯紅)；花青衍生物(花青，吲哚羰花青，氧雜花青，硫代花青和部花青)；方酸衍生物和環(huán)取代的方酸，包括Seta，SeTau和Square染料；萘衍生物(丹酰和氟硅酸鈉衍生物)；香豆素衍生物；惡二唑衍生物(吡啶基惡唑，硝基苯并惡唑和苯并惡二唑)；蒽衍生物(蒽醌類，包括
DRAQ5，DRAQ7和CyTRAK橙)；芘衍生物(級聯(lián)藍等)；惡嗪衍生物(尼羅紅，尼羅藍，甲酚紫，惡嗪170等)；吖啶衍生物(黃醇黃素，吖啶橙，吖啶黃等)；芳基甲胺衍生物(金胺，結(jié)晶紫，孔雀石綠)和四吡咯衍生物(卟吩，酞菁，膽紅素)；下列熒光化合物的同系物和衍生物：CF染料(Biotium)，DRAQ和CyTRAK探針(BioS-tatus)，BODIPY(Invitrogen)，Alexa?Fluor
(Invitrogen)，DyLight?Fluor(Thermo?Scientific，Pierce)，Atto和Tracy(Sigma?
Aldrich)，F(xiàn)luoProbes(Interchim)，Abberior染料(Abberior)，DY和MegaStokes染料
(Dyomics)，Sulfo?Cy染料(Cyandye)，HiLyte?Fluor(AnaSpec)，Seta，SeTau和Square染料(Biosearch?Technologies)，SureLight染料(APC，RPEPerCP，Phycobilisomes)(Columbia?Biosciences)，APC，APCXL，RPE，BPE(Phyco-Biotech)，別藻藍蛋白(APC)，氨基胭脂蛋白，APC-Cy7偶聯(lián)物，BODIPY-FL，Cascade?Blue，Cy2，Cy3，Cy3.5，Cy3B，Cy5，Cy5.5，Cy7，熒光素，F(xiàn)luorX，羥基香豆素，麗絲胺羅丹明B，螢光黃，Me-甲氧基香豆素，NBD，Pacific?Blue，Pacific?Orange，PE-Cy5偶聯(lián)物，PE-R-藻紅蛋白(PE)，Red?613，Seta-555-Azide，Seta-
555-DBCO，Seta-555-NHS，Seta-580-NHS，Seta-680-NHS，Seta-APC-780，Seta-PerCP-680，Seta-R-PE-670，SeTau-380-NHS，SeTau-405-馬來酰亞胺，SeTau-405-NHS，SeTau-425-NHS，SeTau-647-NHS，Texas?Red,TRITC，TruRed，X-Rhodamine，7-AAD(7-氨基放線菌素D，CG-選擇性的)，吖啶橙，色霉素A3，CyTRAK橙(Biostatus)，DAPI，DRAQ5，DRAQ7，溴化乙錠，
Hoechst33258，Hoechst33342，LDS?751，光輝霉素，碘化丙啶(PI)，SYTOX藍，SYTOX綠，SYTOX橙，噻唑橙，TO-PRO，菁染料單體，TOTO-1，TO-PRO-1，TOTO-3，TO-PRO-3，YOSeta-1，YOYO-1。
可以與本發(fā)明的連接體相連，用于研究細胞的熒光化合物，選自下列化合物或其衍生物：
DCFH(2'，7'-二氯二氫熒光素，氧化形式)，DHR(二氫羅丹明123，氧化形式，光催化氧化)，F(xiàn)luo-3(AM酯，pH>6)，F(xiàn)luo-4(AM酯，pH7.2)，Indo-1(AM酯，低/高鈣(Ca?2+))，SNARF(pH?6/
9)。優(yōu)選的熒光化合物選自：別藻藍蛋白(APC)，AmCyan1(四聚體，Clontech)，AsRed2(四聚體，Clontech)，薊綠(單體，MBL)，Azurite，B-藻紅蛋白(BPE)，Cerulean，CyPet，DsRed單體(Clontech)，DsRed2(“RFP”，Clontech)，EBFP，EBFP2，ECFP，EGFP(弱二聚體，Clontech)，Emerald(弱二聚體，Invitrogen)，EYFP(弱二聚體，Clontech)，GFP(S65A突變)，GFP(S65C突變)，GFP(S65L突變)GFP(Y66H突變)，GFP(Y66W突變)，GFPuv，HcRed1，J-Red，Katusha，Kusabira?Orange(單聚體，MBL)，mCFP，mCherry(單體，MBL)，mKate(TagFP635，單體，
Evrogen)，mKeima-Red(單體，MBL)，mKO，mOrange，mPlum，mRaspberry，mRFP1(單體，Tsien實驗室)，mStrawberry，mTFP1，mTurquoise2，P3(藻膽體復(fù)合物)，多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質(zhì)復(fù)合物(PerCP)，R-phycoerythrin(RPE)，T-Sapphire，TagCFP(二聚體，Evrogen)，TagGFP(二聚體，Evrogen)，TagRFP(二聚體，Evrogen)，TagYFP(二聚體，Evrogen)，tdTomato(串聯(lián)二聚體)，Topaz，TurboFP602(二聚體，Evrogen)，TurboFPP635(二聚體，Evrogen)，TurboGFP(二聚體，Evrogen)，TurboRFP(二聚體，Evrogen)，TurboYFP(二聚體，Evrogen)，Venus，野生型GFP型，YPet，ZsGreen1(四聚體，Clontech)，ZsYellow1(四聚體，Clontech)。
7)上述藥物的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。
8.在權(quán)利要求2和4中，公式(II)和(IV)里的Drug1和Drug2為發(fā)色分子，結(jié)構(gòu)式為(II)和
(IV)的偶聯(lián)物可用于檢測，監(jiān)測或研究細胞結(jié)合分子的功能，與靶細胞的相互作用，和/或偶聯(lián)物與目標(biāo)物，特別是靶細胞的相互作用。
9.在權(quán)利要求2和4中，Drug1和Drug2優(yōu)選自tubulysin，卡奇霉素，澳瑞他汀，美登素生
物堿，CC-1065同系物，柔紅霉素和阿霉素化合物，紫杉烷類(紫杉烷類)，cryptophycin，埃博霉素，苯并二氮卓二聚體(例如吡咯并苯二氮卓(PBD)，托美霉素，安曲霉素，吲哚并苯并二氮卓，咪唑并苯并噻二氮卓或惡唑烷并苯并二氮卓的二聚體)，卡立霉素類和烯二炔類抗生素，放線菌素，氮絲菌素，博來霉素，表柔比星，他莫昔芬，伊達比星，多拉司他汀/澳瑞他汀(例如MMAE，MMAF，澳瑞他汀PYE，澳瑞他汀TP，澳瑞他汀2-AQ，6-AQ，EB(AEB)和EFP
(AEFP))，多卡霉素，噻替派，長春新堿，半米塔林，nazumamide，microginin，radiosumin，alterobactin，microsclerominmin，theonellamide，esperamicin，siRNA，溶核酶和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、酸和/或上述分子的同系物和衍生物。
10.權(quán)利要求2和3中的細胞結(jié)合劑/分子選自抗體、蛋白、維生素(如葉酸)、肽、聚合物
膠束、脂質(zhì)體、脂蛋白為基礎(chǔ)的藥物載體、納米顆粒藥物載體、樹狀分子和涂覆了細胞結(jié)合配體的上述分子或其組合物。
11.權(quán)利要求2、3和10中的細胞結(jié)合劑/分子優(yōu)選為，抗體，完整抗體(多克隆抗體，單克
隆抗體，二聚體，多聚體，多特異性抗體，例如雙特異性抗體)；單鏈抗體；結(jié)合靶細胞的抗體片段、單克隆抗體，單鏈單克隆抗體或結(jié)合靶細胞的單克隆抗體片段，嵌合抗體、結(jié)合靶細胞的嵌合抗體片段，單域抗體，結(jié)合靶細胞的單域抗體片段，表面修飾抗體，單鏈表面修飾抗體，或結(jié)合靶細胞的表面修飾抗體片段，人源化抗體，單鏈人源化抗體，或結(jié)合靶細胞的人源化抗體片段，抗獨特型抗體(抗-Id)，CDR，雙價抗體，三價抗體，微抗體，免疫蛋白
(SIP)，淋巴因子，激素，維生素，生長因子，一個集落刺激因子，營養(yǎng)轉(zhuǎn)運分子，大分子量的蛋白質(zhì)。
12.權(quán)利要求2、3和10中的細胞結(jié)合劑/分子可以是任何能夠靶向下列細胞的試劑：腫
瘤細胞、病毒感染的細胞、微生物感染的細胞，寄生蟲感染的細胞，自身免疫性疾病的細胞，激活的腫瘤細胞，骨髓細胞，活化的T細胞，侵襲B細胞，或黑素細胞。
13.權(quán)利要求2、3和10中的細胞結(jié)合劑/分子可以是任何能夠?qū)瓜铝?a href='/zhuanli/list-20327-1.html' target='_blank'>抗原或受體之一
的藥物/分子：CD3,CD4,CD5,CD6,CD7,CD8,CD9,CD10,CD11a,CD11b,CD11c,CD12w,CD14,
CD15,CD16,CDw17,CD18,CD19,CD20,CD21,CD22,CD23,CD24,CD25,CD26,CD27,CD28,CD29,
CD30,CD31,CD32,CD33,CD34,CD35,CD36,CD37,CD38,CD39,CD40,CD41,CD42,CD43,CD44,
CD45,CD46,CD47,CD48,CD49b,CD49c,CD51,CD52,CD53,CD54,CD55,CD56,CD58,CD59,CD61,
CD62E,CD62L,CD62P,CD63,CD66,CD68,CD69,CD70,CD72,CD74,CD79,CD79a,CD79b,CD80,
CD81,CD82,CD83,CD86,CD87,CD88,CD89,CD90,CD91,CD95,CD96,CD98,CD100,CD103,
CD105,CD106,CD109,CD117,CD120,CD125,CD126,CD127,CD133,CD134,CD135,CD138,
CD141,CD142,CD143,CD144,CD147,CD151,CD147,CD152,CD154,CD156,CD158,CD163,
CD166,.CD168,CD174,CD180,CD184,CDw186,CD194,CD195,CD200,CD200a,CD200b,CD209,
CD221,CD227,CD235a,CD240,CD262,CD271,CD274,CD276(B7-H3),CD303,CD304,CD309,
CD326,4-1BB,5AC,5T4(Trophoblast糖蛋白，TPBG，5T4，WNT-活化抑制因子1或WAIF1)，腺癌抗原，AGS-5,AGS-22M6，激活素受體激酶1，AFP，AKAP-4，ALK，α整合素，αvβ6，氨基肽酶N，淀粉樣蛋白β，雄激素受體，促血管新生蛋白因子2，促血管新生蛋白因子3，膜聯(lián)蛋白A1，炭疽毒素保護性抗原，抗轉(zhuǎn)移蛋白受體，AOC3(VAP-1)，B7-H3，炭疽桿菌，BAFF(B細胞激活因子)，B淋巴瘤細胞，bcr-abl，蛙皮素，BORIS，C5，C242抗原，CA125(糖抗原125，MUC16)，CA-IX(或CAIX，碳酸酐酶9)，CALLA，CanAg，犬紅斑狼瘡IL31，碳酸酐酶IX，心肌肌凝蛋白，CCL11(C-C片段趨化因子11)，CCR4(C-C趨化因子受體4，CD194)，CCR5，CD3E(ε)，CEA(癌胚抗原)，CEACAM3，CEACAM5(癌胚抗原)，CFD(因子D)，Ch4D5，膽囊收縮素2(CCK2R)，CLDN18(Claudin-
18)，叢生因子A，CRIPTO，F(xiàn)CSF1R(集落刺激因子1受體，CD115)，CSF2(集落刺激因子2，粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF))，CTLA4(細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)蛋白4)，CTAA16.88
腫瘤抗原，CXCR4(CD184)，C-X-C趨化因子受體4，環(huán)狀A(yù)DP核糖核酸酶，細胞周期蛋白B1，CYP1B1，巨細胞病毒，巨細胞病毒糖蛋白B，Dabigatran，DLL4(類Δ配體4)，DPP4(雙肽-肽酶
4)，DR5(死亡受體5)，大腸桿菌shiga毒素類型-1，大腸桿菌shiga毒素type-2，ED-B，EGFL7(類EGF結(jié)構(gòu)域蛋白7)，EGFR，EGFRII，EGFRvIII，內(nèi)皮因子(CD105)，內(nèi)皮素B受體，內(nèi)毒素，EpCAM(上皮細胞粘附分子)，EphA2，Episialin，ERBB2(表皮生長因子受體2)，ERBB3，ERG(TMPRSS2ETS融合基因)，大腸桿菌，ETV6-AML，F(xiàn)AP(成纖維細胞活化蛋白α)，F(xiàn)CGR1，甲胎蛋白，纖維蛋白IIβ鏈，纖連蛋白額外結(jié)構(gòu)域-B，F(xiàn)OLR(葉酸受體)，葉酸受體α，葉酸水解酶，F(xiàn)os相關(guān)抗原1，呼吸道合胞病毒的F蛋白，卷曲的受體，巖藻糖GM1，GD2神經(jīng)節(jié)苷脂，G-28(細胞表面抗原糖脂)，GD3獨特型，GloboH，Glypican?3，N-羥乙酰神經(jīng)氨酸，GM3，GMCSF受體α鏈，生長分化因子8，GP100，GPNMB(跨膜糖蛋白NMB)，GUCY2C(鳥苷酸環(huán)化酶2C)，鳥苷酸環(huán)化酶C(GC-C)，腸鳥苷酸環(huán)化酶，鳥苷酸環(huán)化酶C受體，熱穩(wěn)定腸毒素受體(hSTAR)，熱休克蛋白，血凝素，乙肝表面抗原，乙型肝炎病毒，HER1(人類表皮生長因子受體1)，HER2，HER2/neu，HER3(ERBB-3)，IgG4，HGF/SF(肝細胞生長因子/分散因子)，HHGFR，HIV-1，組蛋白復(fù)合物，HLA-DR(人類白細胞抗原)，HLA-DR10，HLA-DRB，HMWMAA，人類絨毛膜促性腺激素，HNGF,人類分散因子受體激酶，HPV?E6/E7，Hsp90，hTERT，ICAM-1(細胞間粘附分子1)，獨特型，IGF1R(IGF–1，類胰島素生長因子1受體)，IGHE，IFN-γ，流感血凝素，IgE，IgE?Fc區(qū)，IGHE，IL–1，IL-2R(白介素2受體)，IL–4，IL-5，IL–6，IL-6R(白介素6受體)，IL-9，IL–10，IL–12，IL-13，IL-17，IL-
17A，IL-20，IL-22，IL-23，IL31RA，ILGF2(類胰島素生長因子2)，整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ
3、α4β7、α5β1、α6β4、α7β7、αllβ3、α5β5、αvβ5)，干擾素γ誘導(dǎo)蛋白質(zhì)，ITGA2，ITGB2，KIR2D，LCK，Le，Legumain，Lewis-Y抗原，LFA-1(淋巴細胞功能相關(guān)抗原1，CD11a)，LHRH，LINGO-1，脂磷壁酸，LIV1A，LMP2，LTA，MAD-CT-1，MAD-CT-2，MAGE-1，MAGE-2，MAGE-3，MAGE?A1，MAGE?A3，MAGE?4，MART1，MCP-1，MIF(巨噬細胞遷移抑制因子，或糖基抑制因子(GIF))，MS4A1(跨膜4結(jié)構(gòu)域亞家族A成員1)，MSLN(間皮素)，MUC1(粘蛋白1，細胞表面相關(guān)(MUC1)或多態(tài)性上皮粘蛋白(PEM))，MUC1-KLH，MUC16(CA125)，MCP1(單核細胞趨化蛋白1)，MelanA/MART1，ML-IAP，MPG，MS4A1，MYCN，髓磷脂相關(guān)糖蛋白，Myostatin,NA17，NARP-1,NCA-90(粒細胞抗原)，Nectin-4(ASG-22ME)，NGF，神經(jīng)細胞凋亡調(diào)控蛋白酶1,NOGO-A，Notch受體，核仁素，Neu致癌基因產(chǎn)物，NY-BR-1，NY-ESO-1，OX-40,OxLDL(氧化低密度脂蛋白)，OY-TES1，P21，p53非突變體，P97，PAP，抗(N-羥乙酰神經(jīng)氨酸)抗體結(jié)合部位，PAX3，PAX5，PCSK9，PDCD1(PD-1、程序性細胞死亡蛋白1，CD279)，PDGF-Rα(α血小板源生長因子受體)，PDGFR-β，PDL-1，PLAC1，類PLAP睪丸堿性磷酸酶，血小板衍生生長因子受體β，磷酸鈉聯(lián)合轉(zhuǎn)運體，PMEL?17，聚唾液酸，蛋白酶3(PR1)，前列腺癌，PS(磷脂酰絲氨酸)，前列腺癌細胞，銅綠假單胞菌，PSMA，PSA，PSCA，狂犬病病毒糖蛋白，RHD(Rh多肽1(RhPI)，CD240)，Rhesus因子，RANKL，RhoC，Ras突變，RGS5，ROBO4，呼吸道合胞病毒，RON，肉瘤易位斷點，SART3，Sclerostin，SLAMF7(SLAM成員
7)，Selectin?P，SDC1(多配體蛋白聚糖1)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(a)，生長調(diào)節(jié)素C，SIP(1-磷酸鞘氨醇)，生長激素抑制素，精子蛋白17，SSX2，STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1)，STEAP2，STn，TAG-72(腫瘤相關(guān)糖蛋白)，存活素，T細胞受體，T細胞跨膜蛋白，TEM1(腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記1)，TENB2，Tenascin?C(TN-C)，TGF-α，TGF-β(轉(zhuǎn)化生長因子β)，TGF-β1，TGF-β2(轉(zhuǎn)化生長因子2)，Tie(CD202b)，Tie2，TIM-1(CDX-014)，Tn，TNF，TNF-α，TNFRSF8，TNFRSF10B(腫瘤壞死因子受體超家族成員10B)，TNFRSF13B(腫瘤壞死因子受體超家族成員13B)，TPBG(滋養(yǎng)細胞糖蛋白)，TRAIL-R1(TNF相關(guān)壞死誘導(dǎo)配體受體1)，TRAILR2(死亡受體5(DR5))，腫瘤相關(guān)的鈣信號傳感器2，腫瘤特異糖基化的MUC1，TWEAK受體，TYRP1(糖蛋白75)，TRP-2，酪氨酸酶，VCAM-1(CD106)，VEGF,VEGF-A,VEGF-2(CD309)，VEGFR-1，VEGFR2，vimentin,WT1,XAGE?
1，表達任何胰島素生長因子受體的細胞，或任何表皮生長因子受體。
14.權(quán)利要求12中的腫瘤細胞選自淋巴瘤細胞、骨髓瘤細胞、腎細胞癌細胞、乳腺癌細
胞、前列腺癌細胞、卵巢癌細胞、結(jié)腸癌細胞、胃癌細胞、鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌細胞、睪丸癌細胞，或任何不受控、加速生長、分化而致癌的細胞。
15.權(quán)利要求1，2，3和4中的連接體組分R1和R2，可以由一個或者多個的連接體組分構(gòu)
成：6-馬來酰亞胺己酸(MC)，3-馬來酰亞胺基丙酸(MP)，纈氨酸-瓜氨酸(val-cit)，丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)，對氨基芐氧羰基(PAB)，4-硫代戊酸(SPP)，4-(N-馬來酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸(MCC)，4-硫代丁酸(SPDB)，乙基馬來酰亞胺(ME)，4-硫代-2-羥基磺基丁酸(2-Sulfo-SPDB)，吡啶二硫醇(PySS)，烷氧基氨基(AOA)，乙烯氧基(EO)，4-甲基-4-二硫-戊酸(MPDP)，疊氮(N3)，炔，二硫代，肽，和/或(4-乙?；?氨基苯甲酸酯(SIAB)。
16.權(quán)利要求2中，Drug1和Drug2為Tubulysin同系物，具有結(jié)構(gòu)通式(II)的優(yōu)選的偶聯(lián)
物T01，T02，T03，T04，T05和T06：
其中mAb是抗體；Z3和Z3’是H，OP(O)(OM1)(OM2)，OCH2OP(O)(OM1)(OM2)，OSO3M1，R1或O-糖苷(糖苷，半乳糖苷，甘露糖苷，葡萄糖苷，果糖苷等)，NH-糖苷，S-糖苷或CH2-糖苷；M1和M2獨立地為H，Na，K，Ca，Mg，NR1R2R3；n是1～20；X1，X2，R1，R2和R3與權(quán)利要求1中定義相同。
17.權(quán)利要求2中，Drug1和Drug2為加利車霉素同系物，具有結(jié)構(gòu)通式(II)的優(yōu)選的偶聯(lián)
物C01：
其中mAb是抗體；n是1～20；X1，X2，R1和R2與權(quán)利要求1中定義相同。
18.權(quán)利要求2中，Drug1和Drug2為美登素生物堿同系物，具有結(jié)構(gòu)通式(II)的優(yōu)選的偶
聯(lián)物M01：
其中mAb是抗體；n是1～20；X1，X2，R1和R2與權(quán)利要求1中定義相同。
19.權(quán)利要求2中，Drug1和Drug2為紫杉烷同系物，具有結(jié)構(gòu)通式(II)的優(yōu)選的偶聯(lián)物
Tx01，Tx02和Tx03：
其中mAb是抗體；n是1～20；X1，X2，R1和R2與權(quán)利要求1中定義相同。
20.權(quán)利要求2中，Drug1和Drug2為CC-1065同系物，具有結(jié)構(gòu)通式(II)的優(yōu)選下面的偶
聯(lián)物CC01，CC02，CC03：
其中mAb是抗體；n是1～20；Z4和Z4’是HH，PO(OM1)(OM2)，SO3M1，CH2PO(OM1)(OM2)，CH3N(CH2CH2)2NC(O)-，O(CH2CH2)2NC(O)-，R1或糖苷；X3和X3’是O，NH，NHC(O)，OC(O)，C(O)O，R1或缺??；X1、X2、R1、R2、M1和M2與權(quán)利要求1中定義相同。
21.權(quán)利要求2中，Drug1和Drug2為柔紅霉素/阿霉素同系物，具有結(jié)構(gòu)通式(II)的優(yōu)選
的偶聯(lián)物Da01，Da02，Da03和Da04：
其中mAb是抗體；n是1～20；X3和X3’是獨立的H，O，NH，NHC(O)，NHC(O)NH，C(O)，OC(O)或R1；X1、X2、R1和R2與權(quán)利要求1中定義相同。
22.權(quán)利要求2中，Drug1和Drug2為澳瑞他汀同系物，具有結(jié)構(gòu)通式(II)的優(yōu)選的偶聯(lián)物
Au01，Au02，Au03，Au04和Au05：
其中mAb是抗體；n為1～20；X3和X3’為獨立的CH2，O，NH，NHC(O)，NHC(O)NH，C(O)，OC(O)R1或缺?。籜4和X4’是獨立的CH2，C(O)，C(O)NH，C(O)N(R1)，R1，NHR1，NR1，C(O)R1或C(O)O；Z3和Z3’是獨立的H，R1，OP(O)(OM1)(OM2)，NHR1，OCH2OP(O)(OM1)(OM2)，OSO3M1或O-糖苷(糖苷，半乳糖苷，甘露糖苷，葡萄糖苷，果糖苷等)，NH-糖苷，S-糖苷或CH2-糖苷；M1和M2獨立地為H，Na，K，Ca，Mg，NR1R2R3；X1，X2，R1，R2和R3與權(quán)利要求1中定義相同。
23.權(quán)利要求2中，Drug1和Drug2為苯并二氮卓二聚體同系物，具有結(jié)構(gòu)通式(II)的優(yōu)選
的偶聯(lián)物PB01，PB02，PB03，PB04，PB05，PB06，PB07，和PB08：
其中mAb是抗體；n為1～20；X3和X3’為獨立的CH2，O，NH，NHC(O)，NHC(O)NH，C(O)，OC(O)，OC(O)(NR3)，R1，NHR1，NR1，C(O)R1或缺??；X4和X4’是獨立的CH2，C(O)，C(O)NH，C(O)N(R1)，R1，NHR1，NR1，C(O)R1或C(O)O；X1，X2，R1，R2和R3與權(quán)利要求1中定義相同。另外，R1和/或R2可以缺省。
24.一種用于癌癥、自身免疫性疾病或傳染病的治療或預(yù)防的藥物組合物，包含治療有
效劑量的權(quán)利要求2，16，17，18，19，20，21，22，和/或23中的偶聯(lián)物，和其藥學(xué)可接受的鹽、載體、稀釋劑或賦形劑或其組合。
25.權(quán)利要求2，16，17，18，19，20，21，22，23或24中的偶聯(lián)物，具有體外，體內(nèi)或離體活性。
26.權(quán)利要求2，16，17，18，19，20，21，22，或23中的偶聯(lián)物，其中連接體組分R1和/或R2包含一個1～20天然或非天然氨基酸單元的肽，氨基芐單元，6-馬來酰亞胺己?；鶈卧?，二硫化物，硫醚單元，腙單元、三唑單元，或烷氧肟單元。
27.權(quán)利要求2，16，17，18，19，20，21，22，或23中的連接體可以被蛋白酶所切斷。
28.一種藥物組合物，包含治療有效量的權(quán)利要求2，16，17，18，19，20，21，22，23或/和
24中的偶聯(lián)物，與其它治療劑如化療藥物、放射治療、免疫治療劑，自身免疫性疾病藥物、抗感染藥物或其他偶聯(lián)物同時使用，協(xié)同有效治療或預(yù)防癌癥、自身免疫性疾病或傳染病。
29.權(quán)利要求28中的協(xié)同劑優(yōu)選自下列藥物中的一種或幾種：阿巴西普，醋酸阿比特
龍，對乙酰氨基酚/氫可酮，阿達木單抗，阿法替尼馬來酸鹽，阿侖單抗，阿利維A酸，曲妥珠單抗，苯丙胺混合鹽(苯丙胺/右苯丙胺)阿那曲唑，阿立哌唑，阿扎那韋，Atezolizumab，阿托伐他汀，阿昔替尼，貝林，貝伐單抗，卡巴他賽，卡博替，貝沙羅汀，blinatumomab，硼替佐米，波舒替尼，brentuximab?vedotin，布地奈德，布地奈德/福莫特羅，丁丙諾啡，卡培他濱，卡非佐米，塞來考昔，ceritinib，西妥昔單抗，環(huán)孢素，西那卡塞，克里唑替尼，達比加群，達拉菲尼，阿法達貝汀，地瑞那韋，甲磺酸伊馬替尼，達沙替尼，地尼白介素，狄諾塞麥，雙丙戊酸鈉，右蘭索拉唑，右哌甲酯，Dinutuximab，多西環(huán)素，度洛西汀，恩曲他濱/利匹韋林/替諾福韋地索普西富馬酸鹽，恩曲他濱/替諾福韋/依法韋侖，依諾肝素，恩雜魯胺，阿法依泊汀，厄洛替尼，埃索美拉唑，依折麥布，依折麥布/辛伐他汀，非諾貝特，非格司亭，芬戈莫德，丙酸氟替卡松，氟替卡松/沙美特羅，氟維司群，吉非替尼，格拉替雷，醋酸戈舍瑞林，伊馬替尼，替伊莫單抗，依魯替尼，胰島素門冬胰島素，地特胰島素，甘精胰島素，賴脯胰島素，干擾素β1a，干擾素β1b，拉帕替尼，Ipilimumab，異丙托溴銨/沙丁胺醇，醋酸蘭樂肽，來那度胺，聯(lián)合二甲苯磺酸鹽，來曲唑，左甲狀腺素，左旋甲狀腺素，利多卡因，利奈唑胺，利拉魯肽，MEDI4736，美金剛，哌醋甲酯，美托洛爾，莫達非尼，莫米松，尼羅替尼，Nivolumab，奧法木單抗，奧立他珠單抗，帕唑帕尼，派姆單抗，培美曲塞，帕妥珠單抗，肺炎球菌結(jié)合疫苗，泊馬度胺，普瑞巴林，喹硫平，雷貝拉唑氯化鐳223，雷洛昔芬，拉替拉韋，雷莫瑞單抗，雷珠單抗，瑞格菲尼，利妥昔單抗，利伐沙班，羅米地辛，羅蘇伐他汀，魯索替尼磷酸鹽，沙丁胺醇，司維拉明，西地那非，siltuximab，西他列汀，西他列汀/二甲雙胍，索非那新，索拉非尼，舒尼替尼，他達拉非，他莫昔芬，替拉普韋，替西羅莫司，替諾福韋/恩曲他濱，睪酮凝膠，沙利度胺(Talidex)，噻托溴銨，托瑞米芬，曲美替尼，曲妥珠單抗，Tretinoin，尤特克單抗，纈沙坦，凡德他尼，維羅非尼，伏立諾他，阿柏西普，Zostavax及其同系物、衍生物、藥學(xué)上可接受的鹽、載體、稀釋劑或賦形劑，或其組合。
細胞結(jié)合分子的特異性偶聯(lián)
技術(shù)領(lǐng)域
的方法：或者先用這類連接體修飾藥物，再與細胞結(jié)合劑反應(yīng)，或者先用這類連接體修飾細胞結(jié)合劑，再與藥物分子反應(yīng)。
技術(shù)背景
Interscience,2005)。在蛋白許多的應(yīng)用中，該蛋白常要用意思的基團修飾，比如細胞毒性分子，放射性元素標(biāo)簽或具有色譜特性的分子，以滿足治療或診斷檢測的需要(Teicher,
B.A.et?al.Clin.Cancer?Res.2011,17,6389-97；Elsadek,B.et?al.,J.Control?Release,
2012,157,4～28)。這些應(yīng)用之一，抗體-藥物共軛偶聯(lián)物(ADCs)，在近20年內(nèi)作為熱點得到了深入的開發(fā)，它結(jié)合了抗體精確的靶向性和抗腫瘤試劑的細胞毒性，使得藥物被定靶傳
送進入癌細胞，而并不對正常細胞產(chǎn)生影響。尤其是，自從美國FDA在2011年批準(zhǔn)了
Adcetris(brentuximab?vedotin)，2013年批準(zhǔn)了Kadcyla(ado-trastuzumab?emtansine)
以來，應(yīng)用抗體-藥物共軛偶聯(lián)物作為靶向治療癌癥的手段，已經(jīng)被國際幾乎所有的制藥公司和生物科技公司所應(yīng)用(Chari,R.et?al,Angew.Chem.,Int.Ed.2014,53,3796-3827；
Sievers,E.L.et?al.Annu?Rev?Med.2013,64,15-29；Mehrling,T.Future?Oncol,2015,11,
549)。根據(jù)網(wǎng)站www.clinictrails.gov.的統(tǒng)計目前在臨床試驗階段的ADC藥物有50多個。
50個暴露在表面的賴氨酸和8個半胱氨酸，這種非選擇性偶聯(lián)方式會導(dǎo)致細胞毒性分子和
抗體表面所有區(qū)域發(fā)生隨機交叉鏈接，產(chǎn)生多種多樣，DAR值(藥物抗體比)分布寬泛的ADC
群(Wang,L.,et?al.2005Protein?Sci.14,2436；Hamblett,K.J.,et?al.2004Clin.Cancer?
Res.10,7063)。部分不希望產(chǎn)生的ADC亞群具有循環(huán)半衰期縮短、低效、潛在脫靶毒性高以及體內(nèi)藥代動力學(xué)(PK)性質(zhì)不確定等缺陷(Hamblett,K.J.et?al,Clin.Cancer?Res.2004,
10,7063-7070；Adem,Y.T.et?al,Bioconjugate?Chem.2014,25,656-664；Boylan,
N.J.Bioconjugate?Chem.,2013,24,1008–1016；Strop,P.,et?al?Chem.Biol.2013,20,
161-167)。此外，這種傳統(tǒng)的偶聯(lián)方式生產(chǎn)的ADC，保持批間一致性非常具有挑戰(zhàn)性，需要更高的生產(chǎn)能力(Wakankar,A.mAbs,2011,3,161–172)。
方法包括：在抗體上引入非配對的半胱氨酸，例如Genentech的THIOMAB抗體(Junutula,
J.R.,et?al?Clin.Cancer?Res.2010，16,4769；Junutula,J.R.,et?al? Nat?
Biotechnol.2008?26,925-32；US專利8,309,300；7,855,275；7,521,541；7,723,485；
WO2008/141044)；或引入谷氨酰胺標(biāo)簽，可以被用茂原輪鏈絲菌擴增的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶
(mTG)(Strop,P.,Bioconjugate?Chem.,2014,25,855–862；Strop,P.,et?al.,
Chem.Biol.2013,20,161–167；輝瑞Rinat公司的美國專利8,871,908)或由細菌來源的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(MTGase)(Dennler,P.,et?al,Bioconjug.Chem.2014,25,569–578；Innate藥物公司美國專利申請20130189287；意大利Bio-Ker?S.r.l.公司的美國專利7,893,019)所識
別；引入巰基-L-巖藻糖(Dennler,P.,et?al,Bioconjugate?Chemistry?2014,25,569；
Okeley,N.M.,et?alBioconjugate?Chem.2013,24,1650)；通過誘變引入非天然氨基酸
(Axup,J.Y.,et?al.,Proc.Natl.Acad.Sci.2012,109,16101–16106；Zimmerman,E.S.,et?
al.,Bioconjug.Chem.2014,25,351–361；Wu,P.,et?al,Proc.Natl.Acad.Sci.2009,106,
3000-3005；Rabuka,D.,et?al,Nat.Protoc.2012,7,1052-67；Sutro生物藥物公司美國專利
8,778,631和美國專利申請20100184135，世界知識產(chǎn)權(quán)專利申請WO2010/081110；Ambrx公
司專利WO2006/069246,2007/059312,美國專利7,332,571,7,696,312；和7,638,299；
Allozyne公司專利WO2007/130453及美國專利7,632,492；7,829,659)；引入硒代半胱氨酸
(Hofer,T.,et?al?Biochemistry?2009,48,12047–12057；美國國家癌癥研究院的美國專利
8,916,159)；用甲酰甘氨酸生成酶(FGE)將CXPXR共有序列上的半胱氨酸轉(zhuǎn)化為甲酰甘氨酸
(FGly)(Drake,P.M.,et?al.,Bioconjug.Chem.2014,25,1331–1341.美國專利7,985,783；
Redwood生命科學(xué)公司的美國專利8,097,701；8,349,910和美國專利申請20140141025,
20100210543)；或用半乳糖或唾液酸轉(zhuǎn)移酶通過糖工程引入唾液酸(Zhou,Q.,et?al?
Bioconjug.Chem.,2014,25,510-520,賽諾菲-健贊公司的美國專利20140294867)。用上述
的方法可以生產(chǎn)出均一的產(chǎn)品，但是它們都需要抗體工程改造和重新優(yōu)化細胞培養(yǎng)條件。
此外,非天然氨基酸基因編碼的表達通常沒有希望的那么高(Tian,F.,et?al,2014,
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.111,1766-71)，這一點對ADC產(chǎn)品的成本有重要的影響。另外，通過半胱氨酸側(cè)鏈偶聯(lián)獲得的ADC藥物通常在循環(huán)系統(tǒng)中的穩(wěn)定性有限，導(dǎo)致了在抵達腫
瘤細胞前，毒性小分子荷載過早的斷裂(Junutula,J.R.,et?al?Nat.Biotechnol.2008,26,
925-32)。
Frangione?B,Milstein?C.Nature?1967,216:939-941；Pink?JR,Milstein?C.Nature?
1967,216:941-942；Frangione?B,et?al.Biochem?J?1968,106,15–21；Frangione?B,
Milstein?C.J?Mol?Biol1968；33:893–906；Edelman?GM,et?al.Proc?Natl?Acad?Sci?USA?
1969；63:78-85；Frangione?B,et?al.Nature?196,221:145-148,Spiegelberg,H.L.et?al?Biochemistry,1975,10,2157-63)。二硫鍵對于IgG分子的結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性和生物功能都有很
重要的作用。在IgG抗體的四種亞型IgG1,IgG2,IgG3和IgG4中，每個IgG分子含有總共12個鏈內(nèi)二硫鍵；每個二硫鍵與一個獨立的IgG域相關(guān)聯(lián)。兩條重鏈在鉸鏈區(qū)通過不同數(shù)目的二硫鍵相連：IgG1和IgG4是2個，IgG2?4個，IgG311個。在IgG1上，輕鏈上最后一個半胱氨酸與重鏈上第5個半胱氨酸形成二硫鍵而相連。在IgG2,IgG3和IgG4上，輕鏈上最后一個半胱氨酸與重鏈上第3個半胱氨酸形成二硫鍵(Liu,H.and?May,K.,2012,mAbs?4,17-23)。通過還原實驗、烷基化和LC-MS分析，可以知道人源IgG1抗體上二硫鍵斷裂難易的特性(Liu,H,et?al?
Anal.Chem.,2010,82,5219–5226)。鏈間二硫鍵比鏈內(nèi)二硫鍵更易被還原斷裂，并且輕重鏈之間的二硫鍵比兩條重鏈間的二硫鍵更易被還原斷裂。兩條重鏈上部的鏈間二硫鍵比下部
的那一條更易斷裂。此外,CH2域上的二硫鍵是最容易被還原的。VL,CL,VH,和CH1域的二硫
鍵具有相似的中等程度的可斷裂性，而CH3域的二硫鍵是最不易被還原的(Liu,H,et?al?
Anal.Chem.,2010,82,5219–5226)。
為下一代的馬來酰亞胺化合物(NGMs)，即溴代物或二溴馬來酰亞胺類化合物(Schumacher,
F.F.,et?al?Org.Biomol.Chem.2014,12,7261–7269)，使用雙烷基化試劑形成一個三碳橋
鍵(Badescu,G.,et?al.,Bioconjug.Chem.2014,25,1124–1136,PolyTherics有限公司的專
利WO2013/190272,WO2014/064424)，使用雙取代的雜芳基橋鍵(Concortis生物系統(tǒng)公司的
美國專利申請2015/0105539)，或通過雙馬來酰亞胺作為橋鍵(WO2014/114207)。我們同樣
使用溴代馬來酰亞胺和二溴馬來酰亞胺作為連接體來偶聯(lián)藥物和抗體(WO2014/009774,
PCT/IB2012/053554)已很長時間了。但是，上述的橋連接體的設(shè)計是將一個細胞毒性分子
和一對二硫鍵偶聯(lián)，由于受抗體上可用于共軛偶聯(lián)的雙硫鍵數(shù)目所限(約為2對)，大多數(shù)情況下生產(chǎn)出的ADCs藥物DAR值低于2。
3191；Chari,R.V.Acc.Chem.Res.,2008,41,98-107,Zhao,R.Y.2011J.Med.Chem.54,3606-
3623)。本發(fā)明中的新型二硫鍵橋連接體不僅能夠在每個連接體上連上2個或更多的小分子
藥物，實現(xiàn)更高的DAR(≥4)，并且為了能夠選擇性地橋連抗體表面的鏈間二硫鍵。這是由于乙炔二羰基中三鍵伸展的自然特性決定的，當(dāng)兩個毒性小分子連接于伸展的橋連接體兩端
的時候，能形成大分子( 間距)，其它二硫基團，如重鏈內(nèi)部下端二硫基團難以接近。因
此本發(fā)明的二硫鍵橋連接體，可以選擇性地橋連被TCEP或DTT斷裂的抗體鏈間自由巰基對，從而產(chǎn)生DAR大于4的ADC。其它被還原過頭的二硫鍵由于難以被橋連接體，特別是為含有2
個毒性小分子的伸展的橋連接體所接近，可以在偶聯(lián)完成后用氧化物如脫氫抗壞血酸
(DHAA)或Cu(II)重新連接?？傊景l(fā)明中的這些橋連接體可以以一種簡便的方式產(chǎn)生同
質(zhì)均一的ADC藥物。
發(fā)明摘要
其中Cb是細胞結(jié)合劑，L是連接體，Drug1和Drug2是藥物小分子，n是
一個1到20的整數(shù)，且2個硫元素橋連Cb于L，每個橋連接體L共價連接2個或更多的藥物分
子。在細胞小分子-藥物偶聯(lián)物中應(yīng)用這類連接體的優(yōu)點有：a).共價交聯(lián)(重新搭橋)細胞
結(jié)合劑(如抗體)上還原打開的二硫鍵巰基的方式，有利于保持偶聯(lián)物的穩(wěn)定性；b).可以使毒性小分子/藥物連接在細胞結(jié)合劑的特定位置，比如IgG抗體的鏈間位點，從而產(chǎn)生均一
的ADC藥物。
乙炔乙二酸結(jié)構(gòu)：
2-二甲基丁基，2,3-二甲基丁基，2,2-二甲基戊基，2,3-二甲基戊基，3,3-二甲基戊基，2,3,
4–三甲基戊基，3-甲基己基，2,2-二甲基己基，2,4-二甲基己基，2,5-二甲基己基，3,5-二甲基己基，2,4-二甲基戊基，2-甲基庚基，3-甲基庚基，正庚基，異庚基，正辛基，異辛基。一個C1-C8烷基可以是未被取代的或被一個或多個下列基團取代的，包括但不限于-C1-C8烷基，-O-(C1-C8烷基)，芳基，-C(O)R',-OC(O)R',-C(O)OR',-C(O)NH2,-C(O)NHR',-C(O)N(R')2,-NHC(O)R',-SR',-S(O)2R',-S(O)R',-OH,鹵素，-N3,-NH2,-NH(R'),-N(R')2和–CN；其中每個R'獨立選自-C1-C8烷基和芳基。“鹵素”指氟、氯、溴、碘原子，優(yōu)選為氟和氯原子。
2OR’,-OS(O)2OR’,-PR’R”,-P(O)R’R”,-P(OR’)(OR”),-P(O)(OR’)(OR”)或-OP(O)(OR’)(OR”)所取代，其中R’,R”是獨立的氫,烷基,烯基,炔基,雜烷基,芳基,芳烷基,羰基或藥用鹽。
Physics,78th?Edition,CRC?Press,Inc.,1997-1998,p.225to?226。優(yōu)選的非芳香類雜環(huán)
包括，但不限于環(huán)氧、乙烯亞氨基、吡咯烷、吡唑烷基，烷基咪唑、環(huán)氧乙烷基、四氫呋喃、二氧戊環(huán)、吡喃阿霉素，二惡烷基，二氧戊環(huán)、呱，哌嗪，嗎啉、吡喃、咪唑啉、吡咯啉基、吡唑啉基、噻唑烷基，四氫噻喃，二噻烷，硫嗎啉，二氫吡喃、吡喃阿霉素，四氫吡啶、二氫吡啶、四氫嘧啶、二氫噻喃、六亞甲基亞胺以及它們與苯基縮合而產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)。
HPLC，高效液相色譜；NHS，N-羥基琥珀酰亞胺；MMP，4-甲基嗎啉；PAB，對氨基苯基；PBS，磷酸緩沖液(pH?7.0～7.5)；PEG，聚乙二醇；SEC，分子排阻色譜；TCEP，磷酸三氯乙酯；TFA，三氟乙酸；THF，四氫呋喃；Val，纈氨酸。
季銨鹽。例如，常規(guī)的無毒鹽包括無機酸的衍生物，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；和用有機酸制備的鹽，如乙酸、丙酸、丁二酸、酒石酸、檸檬酸、磺酸、苯磺酸、葡萄糖、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對甲苯磺酸、草酸、琥珀酸，馬來有機酸、乳酸等。其它鹽包括銨鹽，如三甲胺，甲葡胺、吡咯乙醇鹽等，和金屬鹽，如鈉、鉀、鈣、鋅和鎂鹽。
見于圖2和10。
(EDC)，二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，N,N'-二異丙基碳二酰亞胺(DIC)，1-環(huán)已基-2-嗎啉乙基碳二亞胺對甲苯磺酸鹽(CMC,或CME-CDI)，羰基二咪唑(CDI)，TBTU(O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸)，O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，苯并三氮唑-1-基氧
基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽(BOP)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷
(PyBOP)，焦碳酸二乙酯(DEPC)，N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽,2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，1-[(二甲胺)(嗎啉基)亞甲基]-1[1,2,3]三
唑并[4,5-b]1-吡啶-3-氧六氟磷酸鹽(HDMA)，2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸鹽(CIP)，
氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(PyCloP)，雙(四亞甲基)氟代甲酰胺(BTFFH)，N,N,N',N'-四甲基-硫-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸鹽,2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲
四氟硼酸鹽(TPTU)，硫-(1-氧代-2-吡啶基)-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸鹽,O-[(乙氧
基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸鹽(HOTU)，(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代
亞乙基氨基氧基)二甲基氨基-嗎啉-碳鎓六氟磷酸鹽(COMU)，(苯并三氮唑-1-基氧基)二吡
咯烷碳六氟磷酸鹽(HBPyU)，N-芐基-N′-環(huán)己基碳二亞胺(或荷載在聚合物上)，二吡咯烷基(N-琥珀酰亞氨氧基)碳鎓六氟磷酸鹽(HSPyU)，1-(氯-1-吡咯烷基亞甲基)吡咯烷六氟磷酸
鹽(PyClU)，2-氯-1,3-二甲基咪唑四氟硼酸鹽(CIB)，(苯并三氮唑-1-基氧基)二哌啶碳六
氟磷酸鹽(HBPipU)，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TCTU)，溴化三(二甲
基氨基)膦六氟磷酸(BroP)，1-正丙基磷酸酐(PPACA， )，2-異氰基乙基嗎啉(MEI)，N,
N,N',N'-四甲基脲-氧-(N-琥珀酸亞胺基)六氟磷酸鹽(HSTU)，2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸
鹽(BEP)，氧-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟硼酸鹽(TOTU)，4-(4,
6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(MMTM,DMTMM)，2-琥珀酰亞胺基-1,1,3,3-四甲
基脲四氟硼酸酯(TSTU)，N,N,N',N'-四甲基-O-(3,4-二氫-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基)
脲四氟硼酸鹽(TDBTU)，偶氮二甲酰二哌啶(ADD)，雙(4-氯芐基)偶氮二甲酸酯(DCAD)，偶氮二甲酸二叔丁酯(DBAD)，偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)，偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)。
4-硫代丁酸(SPDB)，4-硫代-2-羥基磺基丁酸(2-Sulfo-SPDB)，一個或者多個乙氧基-
CH2CH2O-單元(″EO″or″PEO")，還包括其他在本領(lǐng)域中眾所周知的連接體，部分在這里列出。
結(jié)合劑-藥物偶聯(lián)物的合成，是通過修飾的細胞結(jié)合劑中的二硫鍵和含有游離巰基的藥物
之間的二硫鍵交換來實現(xiàn)的；通過硫醚鍵結(jié)合的細胞結(jié)合子-藥物偶聯(lián)物的合成，是通過經(jīng)馬來酰亞胺基或鹵乙?；蛞一啃揎椀募毎Y(jié)合劑和含游離巰基的藥物反應(yīng)來實現(xiàn)；合
成分子內(nèi)含酸不穩(wěn)定的腙的偶聯(lián)物，可由一個連接體中的酰肼基團和羰基反應(yīng)來實現(xiàn)，具
體方法也為本領(lǐng)域內(nèi)公知(參考P.Hamann?et?al.,Hinman,L.M.,et?al,Cancer?Res.1993,
53,3336-334；B.Laguzza?et?al.,J.Med.Chem.,1959,32；548-555；P.Trail?et?al.,
Cancer?Res.,1997,57；100-105)；合成含三唑基團的偶聯(lián)物可以通過一個連接體上的1-炔與含疊氮基團的藥物以點擊化學(xué)反應(yīng)(偶極環(huán)加成)來實現(xiàn)(Lutz,J-F.et?al,Adv.Drug?
Del.Rev.2008,60,958–970；Sletten,E.M.et?al?Acc.Chem.Research2011,44,666–676)。
(III)中連接體上的馬來酰亞胺、鹵乙?；蛞一酋；?，在pH?5.5-9的緩沖液中反應(yīng)，生成硫醚鍵鏈接的共軛偶聯(lián)物。含巰基的藥物可以與公式(III)中連接體上的吡啶二硫片段進
行二硫鍵交換，生成二硫鍵鏈接的共軛偶聯(lián)物。含有羥基或巰基的藥物可與公式(III)中連接體上的鹵素，尤其是α鹵代羧酸上的鹵素，在弱堿條件下，如pH值8.0-9.5，反應(yīng)得到醚或硫醚鍵鏈接的共軛偶聯(lián)物。含羥基的藥物，也可以在EDC或DCC的縮合劑的作用下，和公式
(I)中連接體上的羧基縮合成酯。經(jīng)藥物修飾的橋連接體再與細胞結(jié)合分子進行偶聯(lián)。含有氨基的藥物可以和公式(III)中連接體上的NHS、咪唑、硝基苯酚、N-羥基丁二酰亞胺、苯酚、二硝基苯酚、五氟苯酚、2,3,5,6-四氟苯酚、二氟苯酚、單氟苯酚、五氯苯酚、三氟甲烷磺酸、二氯苯酚、四氯苯酚、1-羥基苯并三唑、甲苯磺酸、甲磺酸、2-乙基-5-苯基異惡唑-3'-磺酸的羧酸酯反應(yīng)，得到酰胺鍵鏈接的共軛偶聯(lián)物。
500mM。同時將細胞結(jié)合劑，如抗體以1～35mg/ml的濃度溶解在pH?5～9.5,最好6～8.5的緩沖液中，與1～20當(dāng)量的TCEP或者DTT反應(yīng)20分鐘到12小時。還原后，用SEC色譜柱純化除去DTT。TCEP可以用SEC色譜柱純化或者不純化直接進入下一步。此外，用TCEP還原的抗體或其他細胞結(jié)合劑可以在公式(I)橋連接體存在下進行，此時細胞結(jié)合劑的交聯(lián)共軛偶聯(lián)就和
TCEP還原同步進行。
HEPES，和MOPS緩沖液，可以包含其它成分，如環(huán)糊精，蔗糖和鹽，如氯化鈉和氯化鉀。將公式(I)中的橋連接體溶液加入到還原的細胞結(jié)合劑溶液中，并在4至45℃，最好是室溫孵育，并通過測量溶液在254nm或者其他合適的波長吸光度，來監(jiān)測反應(yīng)的進程。在反應(yīng)完成后，可以按照常規(guī)方法純化修飾的細胞結(jié)合劑，例如使用凝膠過濾層析或吸附色譜法。
(CEMS)來分析確定。本發(fā)明中的橋連接體上可以含有不同種類的官能團，可與各種藥物反
應(yīng)，尤其是具有合適的官能團的細胞毒性藥物。例如，修飾后含氨基或羥基取代基的細胞結(jié)合劑能與含N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯的藥物反應(yīng)，修飾后含巰基的細胞結(jié)合劑能與含馬
來酰亞胺基或鹵素乙酰基的藥物反應(yīng)。此外，修改后含羰基(醛或酮基)的細胞結(jié)合劑能與
含酰肼或烷氧基胺的藥物反應(yīng)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以很容易地根據(jù)其中官能團的反應(yīng)活
性來確定使用怎樣的連接體。
方法在反應(yīng)式(Ia),(Ib),(Ic),(Id),(Ie),(If),(Ig)和(Ih)中已有描述。
物。
復(fù)合或反應(yīng)。
4861)；干擾素(如I，II，III型)；多肽；淋巴因子如IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-10，GM-CSF，干擾素-γ(IFN-γ)；激素例如胰島素，TRH(促甲狀腺激素釋放激素)，MSH(促黑素細胞激素)，類固醇激素如雄激素和雌激素；生長因子和集落刺激因子，如表皮生長因子(EGF)，粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)如TGFα，TGFβ，胰島素和胰島素樣生長因子(IGF-I,IGF-II)，G-CSF，M-CSF和GM-CSF(Burgess,Immunology?Today?1984,
5,155-158)；牛痘生長因子(VGF)；成纖維細胞生長因子(FGF)；小分子量的蛋白質(zhì)；多肽；肽和肽激素，如鈴蟾肽，胃泌素，胃泌素釋放肽；血小板衍生的生長因子；白細胞介素和細胞因子，例如，白細胞介素-2(IL-2)，白細胞介素-6(IL-6)，白血病抑制因子，粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)；維生素，如葉酸；脫輔基蛋白和糖蛋白，如轉(zhuǎn)鐵蛋白(O'Keefe?et?al,J.Biol.Chem.1985?260932-937)；糖結(jié)合蛋白或脂蛋白，如凝集素；細胞營養(yǎng)傳遞分子；小分子抑制劑，如前列腺特異性膜抗原(PSMA)抑制劑和小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI)，非肽或任何其它細胞結(jié)合分子或物質(zhì)，如生物活性聚合物(Dhar ,et? al ,
Proc.Natl.Acad.Sci.2008,105,17356-61)，生物活性樹枝狀大分子(Lee,et?al,
Nat.Biotechnol.2005,23,1517-26；Almutairi,et?al；Proc.Natl.Acad.Sci.2009,106,
685-90)，納米粒子(Liong,et?al,ACS?Nano,2008,19,1309-12；Medarova,et?al,
Nat.Med.2007,13,372-7；Javier,et?al,Bioconjugate?Chem.2008,19,1309-12)，脂質(zhì)體
(Medinai,et?al,Curr.Phar.Des.2004,10,2981-9)和病毒外殼(Flenniken,et?al,
Viruses?Nanotechnol.2009,327,71-93)。
胞，與已經(jīng)用所需抗原免疫的小鼠的脾細胞融合，來制備單克隆抗體( G.；Milstein,
C.Nature?1975,256:495-497)。詳細的過程在“Antibodies--A?Laboratory?Manual,
Harlow?and?Lane,eds.,Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press,New?York(1988)”中有
描述，此處引作參考。具體地，可以用目標(biāo)抗原，如完整的靶細胞，從靶細胞分離的抗原，完整的病毒，滅活的全病毒和病毒蛋白質(zhì)，免疫小鼠，大鼠，倉鼠或任何其它哺乳動物。通常使用聚乙二醇(PEG)6000將脾細胞與骨髓瘤細胞融合。通過對HAT(次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸腺
嘧啶)的敏感性來篩選融合細胞。通過它們免疫反應(yīng)特異性受體的能力或抑制靶細胞上的
受體活性的能力，可以確定實施本發(fā)明的單克隆抗體的雜交瘤。
足的一段時間，以使雜交瘤將抗體分子分泌到培養(yǎng)基。然后收集含有抗體的培養(yǎng)基。使用通過公知的技術(shù)進一步分離抗體分子，如蛋白質(zhì)A親和層析，陰離子、陽離子、疏水或體積排阻色譜法(特別是通過蛋白質(zhì)A親和層析和體積排阻色譜法)，離心，差異溶解度或任何其他純化蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。
ppm的Cu，Mn，F(xiàn)e或Zn等重金屬或/和重金屬鹽，以及消泡劑如聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
4))或卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒(KSHV)，見于美國專利4,341,761；4,399,121；4,427,783；
4,444,887；4,451,570；4,466,917；4,472,500；4,491,632；4,493,890。單克隆抗體也可以通過含末端羧基的抗受體肽或肽制備，這些都為如本領(lǐng)域所公知，可參考文獻Niman?et?
al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1983,80:4949-4953；Geysen? et? al.,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1985,82:178-182；Lei?et?al.Biochemistry?1995,34(20):
6675-6688。通常，抗受體肽或肽類似物作為產(chǎn)生抗受體肽單克隆抗體免疫原，可以單獨使用或與免疫原性載體連接。
式，可用于選擇能與抗原特異性結(jié)合的人源抗體。噬菌體展示技術(shù)在文獻中也有詳細描
述，，噬菌體展示庫的構(gòu)建和篩選在本領(lǐng)域也是眾所周知的，可參考文獻Dente?et?al,
Gene.1994,148(1):7-13；Little?et?al,Biotechnol?Adv.1994,12(3):539-55；Clackson?et?al.,Nature?1991,352:264-628；Huse?et?al.,Science?1989,246:1275-1281。
描述，如美國專利5,859,205和6,797,492；Liu?et?al,Immunol?Rev.2008,222:9-27；
Almagro?et?al,Front?Biosci.2008,13:1619-33；Lazar?et?al,MolImmunol.2007,44(8):
1986-98；Li?et?al,Proc.Natl.Acad.Sci.U?S?A.2006,103(10):3557-62，此處引為參考。
完整人抗體也可以通過用免疫原免疫攜帶大部分的人類球蛋白重輕鏈的轉(zhuǎn)基因小鼠、兔
子、猴子或其他哺乳動物來制備。這些老鼠的例子有：Xenomouse(Abgenix/Amgen)，HuMAb-Mouse(Medarex/BMS)和VelociMouse(Regeneron)，參考美國專利6,596,541,6,207,418,6,
150,584,6,111,166,6,075,181,5,922,545,5,661,016,5,545,806,5,436,149和5,569,
825。用于人類治療時，小鼠的可變區(qū)域和人的恒定區(qū)域也可以被融合，成為“嵌合抗體”，它在人類身上的免疫原性顯著低于小鼠單抗(Kipriyanov?et?al,MolBiotechnol.2004,26:
39-60；Houdebine,CurrOpinBiotechnol.2002,13:625-9)。另外，在抗體可變區(qū)域的定點誘變能導(dǎo)致抗體具有較高的親和性和特異性(Brannigan?et?al,Nat?Rev?Mol?Cell?
Biol.2002,3:964-70；Adams?et?al,J?Immunol?Methods.1999,231:249-60)，抗體恒定區(qū)
域的改變可以提高其介導(dǎo)結(jié)合和細胞毒性的效應(yīng)功能。
編碼可以商業(yè)獲得，例如從GenBank數(shù)據(jù)庫或類似數(shù)據(jù)庫，文獻出版物獲得，或通過常規(guī)克隆和測序得到。
肽或蛋白質(zhì)，它們對表位或相應(yīng)的受體有親和力，不一定非得是免疫球蛋白家族成員。這些肽可以通過類似噬菌體顯示抗體的技術(shù)分離出來(Szardenings,J?Recept?Signal?
Transduct?Res.2003；23(4):307-49)。從隨機肽庫中獲得的肽可以與抗體和抗體片段類似被使用。肽或蛋白質(zhì)結(jié)合分子可以偶聯(lián)或鏈接至大分子或其他物質(zhì)，包括但不限于白蛋白、聚合物、脂質(zhì)體、納米粒子、樹形分子，只要這樣的鏈接能保留肽或蛋白質(zhì)的抗原結(jié)合特異性。
6)，Alemtuzumab(Campath，MabCampath，抗CD52)，Altumomab(抗CEA)，Anatumomab(抗TAG-
72)，Anrukinzumab(IMA-638,抗-IL-13)，Apolizumab(抗-HLA-DR)，阿奇單抗(抗-CEA)，阿塞珠單抗(抗-L-選擇蛋白CD62L)，Atlizumab(tocilizumab,Actemra,RoActemra,抗-IL-6
受體),Atorolimumab(抗-Rhesus因子),Bapineuzumab(抗-β淀粉樣蛋白)，Basiliximab
(Simulect，抗CD25(IL-2受體的α鏈))，Bavituximab(抗磷脂酰絲氨酸)，Bectumomab
(LymphoScan，抗-CD22)，貝利單抗(Benlysta，LymphoStat-B，抗BAFF)，Benralizumab(抗CD125)，Bertilimumab(抗CCL11(eotaxin-1))，Besilesomab(Scintimun，抗CEA相關(guān)抗原)，貝伐單抗(Avastin，抗VEGF-A)，Biciromab(FibriScint，抗纖維蛋白IIβ鏈)，Bivatuzumab(抗-CD44v6)，Blinatumomab(BiTE，抗CD19)，Brentuximab(cAC10，抗-CD30TNRSF8)，
Briakinumab(抗IL-12，IL-23)，Canakinumab(Ilaris，抗IL-1)，Cantuzumab(C242，抗
CanAg)，Capromab，Catumaxomab(Removab，抗EpCAM，抗CD3)，CC49(抗TAG-72)，Cedelizumab(抗CD4)，Certolizumab單抗(Cimzia抗TNF-α)，西妥昔單抗(愛必妥，IMC-C225，抗EGFR)，Citatuzumab?bogatox(抗EpCAM)，Cixutumumab(抗IGF-1)，Clenoliximab(抗CD4)，
Clivatuzu-mab(抗MUC1)，Conatumumab(抗TRAIL-R2)，CR6261(抗流感A血凝素)，
Dacetuzumab(抗CD40)，Daclizumab(Zenapax，抗CD25(IL-2受體α鏈))，Daratumumab(抗
CD38(環(huán)ADP核糖水解酶)，Denosumab(Prolia，抗RANKL)，Detumomab(抗B淋巴瘤細胞)，
Dorlimomab，Dorlixizumab，Ecromeximab(抗GD3神經(jīng)節(jié)苷脂)，Eculizumab(Soliris，抗-C5)，Edobacomab(抗內(nèi)毒素)，Edrecolomab(Panorex，MAb17-1A，抗-EpCAM)，Efalizumab(Raptiva，抗LFA-1(CD11a))，Efungumab(Mycograb，抗Hsp90)，Elotuzumab(抗SLAMF7)，Elsilimomab(抗IL-6)，Enlimomab單抗(抗ICAM-1(CD54))，Epitumomab(抗episialin)，依他珠單抗(抗-CD22)，Erlizumab(抗-ITGB2(CD18))，Ertumaxomab(Rexomun，抗HER2/neu，CD3)，依他拉單抗(Abegrin，抗整聯(lián)蛋白αvβ3)，Exbivirumab(抗乙肝表面抗原)，
Fanolesomab(NeutroSpec，抗CD15)，F(xiàn)aralimomab(抗干擾素受體)，F(xiàn)arletuzumab(抗葉酸受體1)，F(xiàn)elvizumab(抗呼吸道合胞病毒)，F(xiàn)ezakinumab(抗-IL-22)，F(xiàn)igitumumab(抗-IGF-
1受體)，F(xiàn)ontolizumab(抗-IFN-γ)，F(xiàn)oravirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白)，F(xiàn)resolimumab
(抗TGF-β)，Galiximab(抗CD80)，Gantenerumab(抗β淀粉樣蛋白)，Gavilimomab(抗CD147(basigin))，Gemtuzumab(抗CD33)，Girentuximab(抗碳酸酐酶9)，Glembatumumab(CR011，抗GPNMB)，Golimumab(Simponi，抗-TNF-α)，Gomiliximab(抗-CD23(IgE受體))，Ibalizumab(抗-CD4)，Ibritumomab(抗CD20)，Igovomab(Indimacis-125，抗CA-125)，Imciromab
(Myoscint，抗心肌肌凝蛋白)，Infliximab(Remicade，抗TNF-α)，Intetumumab(抗CD51)，Inolimomab(抗CD25(IL-2受體α鏈)，伊珠單抗(抗-CD22)，Ipilimumab(抗CD152)，
Iratumumab(抗CD30(TNFRSF8))，Keliximab(抗-CD4)，Labetuzumab(CEA-Cide，抗CEA)，
Lebrikizumab(抗IL-13)，Lemalesomab(抗NCA-90(粒細胞抗原))，Lerdelimumab(抗TGFβ
2)，Lexatumumab(抗TRAIL-R2)，Libivirumab(抗乙肝表面抗原)，Lintuzumab(抗CD33)，魯米木單抗(抗CD40)，魯米單抗(抗CD23(IgE受體)，Mapatumumab(抗TRAIL-R1)，馬西莫單抗(抗T-細胞受體)，馬妥珠單抗(抗EGFR)，Mepolizumab(Bosatria，抗IL-5)，Metelimumab(抗TGFβ1)，Milatuzumab(抗CD74)，Minretumomab(抗TAG-72)，Mitumomab(BEC-2，抗GD3神經(jīng)節(jié)苷脂)，Morolimumab(抗恒河猴因子)，Motavizumab(Numax，抗呼吸道合胞病毒)，
Muromonab-CD3(Orthoclone?OKT3，抗CD3)，Nacolomab(抗-C242)，Naptumomab(抗5T4)，那他珠單抗(Tysabri，抗整聯(lián)蛋白α4)，奈巴單抗(抗-內(nèi)毒素)，Necitumumab(抗EGFR)，
Nerelimomab(抗-TNF-α)，Nimotuzumab(Theracim，Theraloc，抗-EGFR)，Nofetumomab，Ocrelizumab(抗-CD20)，奧利木單抗(Afolimomab，抗LFA-1(CD11a))，Ofatumumab
(Arzerra，抗CD20)，Olaratumab(抗PDGF-Rα)，Omalizumab(Xolair，抗IgE?Fc區(qū))
Oportuzumab(抗EpCAM)，Oregovomab(OvaRex，抗CA-125)，Otelixizumab(抗CD3)，
Pagibaximab(抗脂磷壁酸)，Palivizumab(Synagis，Abbosynagis，抗呼吸道合胞病毒)，帕尼單抗(Vectibix，ABX-EGF，抗EGFR)，Panobacumab(抗銅綠假單胞菌(Pseudomonas?
aeruginosa))，帕考珠單抗(抗IL-4)，Pemtumomab(Theragyn，抗MUC1)，Pertuzumab
(Omnitarg，2C4，抗HER2/neu)，Pexelizumab(抗-c5)，Pintumomab(抗腺癌抗原)，
Priliximab(抗-CD4)，Pritumumab(抗波形蛋白)，PRO140(抗-CCR5)Racotumomab(1E10，抗-N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(NeuGc，NGNA)-神經(jīng)節(jié)苷脂GM3))，Rafivirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白)，Ramucirumab(抗VEGFR2)，Ranibizumab(Lucentis，抗VEGF-A)，Raxibacumab(抗炭疽毒素，保護性抗原)，Regavirumab(抗巨細胞病毒糖蛋白B)，Reslizumab(抗-IL-5)，Rilotumumab(抗-HGF)，Rituximab(MabThera，Rituxanmab，抗-CD20)，Robatumumab(抗-IGF-1受體)，Rontalizumab(抗IFN-α)，Rovelizumab(LeukAr-rest，抗CD11，CD18)，Ruplizumab(Antova，抗CD154(CD40L))，Satumomab(抗TAG-72)，Sevirumab(抗巨細胞病毒)，Sibrotuzumab(抗
FAP)，西法木單抗(抗IFN-α)，Siltuximab(抗IL-6)，Siplizumab(抗CD2)，Smart?MI95(抗CD33)，Solanezumab(抗β淀粉狀蛋白)，Sonepcizumab(抗鞘氨醇-1-磷酸)，Sontuzumab(抗-episialin)，Stamulumab(抗-myostatin)，Sulesomab(LeukoScan，抗NCA-90(粒細胞抗
原))，Tacatuzumab(抗α甲胎蛋白)，Tadocizumab(抗整聯(lián)蛋白αIIbβ3)，Talizumab(抗IgE)，Tanezumab(anti-NGF)，Taplitumomab(抗-CD19)，Tefibazumab(Aurexis，(抗凝聚因子A))，Telimomab，Tenatumomab(抗腱生蛋白C)，Teneliximab(抗CD40)，Teplizumab(抗CD3)，
TGN1412(抗CD28)，Ticilimumab(Tremelimumab，抗-CTLA-4)，Tigatuzumab(抗TRAIL-R2)，TNX-650(抗IL-13)，Tocilizumab(Atlizumab，Actemra，RoActemra，IL-6受體)，
Toralizumab(抗CD154(CD40L))，Tositumomab(抗CD20)，曲妥珠單抗(赫賽汀，抗HER2/
neu)，Tremelimumab(抗CTLA-4)，Tucotuzumab?celmoleukin(抗EpCAM)，Tuvirumab(抗乙型肝炎病毒)，Urtoxazumab(抗大腸桿菌)，Ustekinumab(Stelara,抗-IL-12,IL-23)，
Vapaliximab(抗-AOC3(VAP-1))，維多珠單抗(抗整聯(lián)蛋白α4β7)，維妥珠單抗(抗CD20)，Vepalimomab(抗AOC3(VAP-1))，Visilizumab(Nuvion，抗CD3)，Vitaxin(抗血管整合素
avb3)，Volociximab(抗整聯(lián)蛋白α5β1)，Votumumab(HumaSPECT，抗腫瘤抗原CTAA16.88)，Zalutumumab(HuMax-EGFR，Zanolimumab(HuMax-CD4，抗-CD4)，Ziralimumab(抗-CD147
(basigin))，Zolimomab(抗-CD5)，依那西普 Alefacept
Abatacept Rilonacept(Arcalyst)，14F7(抗IRP-2(鐵調(diào)節(jié)蛋白2))，14G2a(抗
GD2神經(jīng)節(jié)苷脂，源于Nat.Cancer?Inst.，治療黑素瘤和實體瘤)，J591(抗-PSMA，源于Weill?Cornell醫(yī)學(xué)院，治療前列腺癌)，225.28S(抗HMW-MAA(高分子量黑素瘤相關(guān)抗原)，Sorin?Radiofarmaci?SRL(源于意大利米蘭，治療黑色素瘤)，COL-1(抗CEACAM3，CGM1，源于Nat?Cancer?Inst.治療結(jié)腸直腸癌和胃癌)，CYT-356( 治療前列腺癌)，HNK20(OraVax?
Inc.治療呼吸道合胞病毒感染)，ImmuRAIT(源于Immunomedics，治療NHL)，Lym-1(抗HLA-
DR10，Peregrine?Pharm)，MAK-195F(抗TNF(腫瘤壞死因子，TNFA，TNF-α，TNFSF2，源于Abbott/Knoll，治療膿毒癥中毒性休克)，MEDI-500(T10B9，抗CD3，TRαβ(T細胞受體α/β)，源于MedImmune?Inc，用于移植物抗宿主疾病病)，RING?SCAN(抗TAG?72(腫瘤相關(guān)糖蛋白72)，源于Neoprobe?Corp.，用于乳腺癌，結(jié)腸癌和直腸癌)，Avicidin(抗EPCAM(上皮細胞粘附分子))，抗-TACSTD1(腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)1)，抗GA733-2(胃腸腫瘤相關(guān)蛋白2)，抗EGP-2(上皮糖蛋白2)，抗KSA，KS1/4抗原，M4S，腫瘤抗原17-1A，CD326(源于NeoRx公司，治療結(jié)腸癌，卵巢癌，前列腺癌和NHL)，LymphoCide(源于Immunomedics)，Smart?ID10(源于Protein?
Design?Labs)，Oncolym(源于Techniclone?Inc)，Allomune(源于BioTransplant)，抗VEGF(源于Genentech)；CEAcide(源于Immunomedics)，IMC-1C11(源于ImClone?Systems)和
Cetuximab(源于ImClone)。
Nucleolin，Neu癌基因產(chǎn)物(各自癌癥)，P21(各種癌)，抗(N-羥乙酰神經(jīng)氨酸)抗體結(jié)合部位(乳腺癌，黑色素瘤)，類PLAP睪丸堿性磷酸酶(卵巢癌、睪丸癌)，PSMA(前列腺瘤)，PSA(前列腺癌)，ROBO4，TAG?72(腫瘤相關(guān)糖蛋白72，AML，胃癌、結(jié)腸直腸癌、卵巢癌)，T細胞跨膜蛋白(各種癌癥)，Tie(CD202b)，TNFRSF10B(腫瘤壞死因子受體超家族成員10B，各種癌癥)，TNFRSF13B(腫瘤壞死因子受體超家族成員13B，多發(fā)性骨髓瘤，NHL，其他癌癥，RA和SLE)，TPBG(滋養(yǎng)細胞糖蛋白，腎細胞癌)，TRAIL-R1(TNF相關(guān)壞死誘導(dǎo)配體受體1，淋巴瘤，NHL，結(jié)直腸癌，肺癌)，VCAM-1(CD106，黑色素瘤)，VEGF，VEGF-a，VEGF-2(CD309)(各種癌癥)。其它腫瘤相關(guān)，可被抗體識別的抗原已被總結(jié)和評述(Gerber,et?al,mAbs?2009，1:3,247-253；
Novellino?et?al,Cancer?ImmunolImmunother.2005，54(3),187-207；Franke,et?al,
Cancer?BiotherRadiopharm.2000,15,459-76)。
CDw17,CD18,CD19,CD20,CD21,CD22,CD23,CD24,CD25,CD26,CD27,CD28,CD29,CD30,CD31,
CD32,CD33,CD34,CD35,CD36,CD37,CD38,CD39,CD40,CD41,CD42,CD43,CD44,CD45,CD46,
CD47,CD48,CD49b,CD49c,CD51,CD52,CD53,CD54,CD55,CD56,CD58,CD59,CD61,CD62E,
CD62L,CD62P,CD63,CD66,CD68,CD69,CD70,CD72,CD74,CD79,CD79a,CD79b,CD80,CD81,
CD82,CD83,CD86,CD87,CD88,CD89,CD90,CD91,CD95,CD96,CD98,CD100,CD103,CD105,
CD106,CD109,CD117,CD120,CD125,CD126,CD127,CD133,CD134,CD135,CD138,CD141,
CD142,CD143,CD144,CD147,CD151,CD147,CD152,CD154,CD156,CD158,CD163,CD166,
.CD168,CD174,CD180,CD184,CDw186,CD194,CD195,CD200,CD200a,CD200b,CD209,CD221,
CD227,CD235a,CD240,CD262,CD271,CD274,CD276(B7-H3),CD303,CD304,CD309,CD326,4-
1BB,5AC,5T4(Trophoblast糖蛋白，TPBG，5T4，WNT-活化抑制因子1或WAIF1)，腺癌抗原，AGS-5,AGS-22M6，激活素受體激酶1，AFP，AKAP-4，ALK，α整合素，αvβ6，氨基肽酶N，淀粉樣蛋白β，雄激素受體，促血管新生蛋白因子2，促血管新生蛋白因子3，膜聯(lián)蛋白A1，炭疽毒素保護性抗原，抗轉(zhuǎn)移蛋白受體，AOC3(VAP-1)，B7-H3，炭疽桿菌，BAFF(B細胞激活因子)，B淋巴瘤細胞，bcr-abl，蛙皮素，BORIS，C5，C242抗原，CA125(糖抗原125，MUC16)，CA-IX(或CAIX，碳酸酐酶9)，CALLA，CanAg，犬紅斑狼瘡IL31，碳酸酐酶IX，心肌肌凝蛋白，CCL11(C-C片段趨化因子11)，CCR4(C-C趨化因子受體4，CD194)，CCR5，CD3E(ε)，CEA(癌胚抗原)，CEACAM3，CEACAM5(癌胚抗原)，CFD(因子D)，Ch4D5，膽囊收縮素2(CCK2R)，CLDN18(Claudin-18)，叢生因子A，CRIPTO，F(xiàn)CSF1R(集落刺激因子1受體，CD115)，CSF2(集落刺激因子2，粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF))，CTLA4(細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)蛋白4)，CTAA16.88腫瘤抗原，CXCR4(CD184)，C-X-C趨化因子受體4，環(huán)狀A(yù)DP核糖核酸酶，細胞周期蛋白B1，CYP1B1，巨細胞病毒，巨細胞病毒糖蛋白B，Dabigatran，DLL4(類Δ配體4)，DPP4(雙肽-肽酶4)，DR5(死亡受體5)，大腸桿菌shiga毒素類型-1，大腸桿菌shiga毒素類型-2，ED-B，EGFL7(類EGF結(jié)構(gòu)域蛋白7)，EGFR，EGFRII，EGFRvIII，內(nèi)皮因子(CD105)，內(nèi)皮素B受體，內(nèi)毒素，EpCAM(上皮細胞粘附分子)，EphA2，Episialin，ERBB2(表皮生長因子受體2)，ERBB3，ERG(TMPRSS2ETS融合基因)，大腸桿菌，ETV6-AML，F(xiàn)AP(成纖維細胞活化蛋白α)，F(xiàn)CGR1，甲胎蛋白，纖維蛋白IIβ鏈，纖連蛋白額外結(jié)構(gòu)域-B，F(xiàn)OLR(葉酸受體)，葉酸受體α，葉酸水解酶，F(xiàn)os相關(guān)抗原1，呼吸道合胞病毒的F蛋白，卷曲的受體，巖藻糖GM1，GD2神經(jīng)節(jié)苷脂，G-28(細胞表面抗原糖脂)，GD3獨特型，GloboH，Glypican?3，N-羥乙酰神經(jīng)氨酸，GM3，GMCSF受體α鏈，生長分化因子8，GP100，GPNMB(跨膜糖蛋白NMB)，GUCY2C(鳥苷酸環(huán)化酶2C)，鳥苷酸環(huán)化酶C(GC-C)，腸鳥苷酸環(huán)化酶，鳥苷酸環(huán)化酶C受體，熱穩(wěn)定腸毒素受體(hSTAR)，熱休克蛋白，血凝素，乙肝表面抗原，乙型肝炎病毒，HER1(人類表皮生長因子受體1)，HER2，HER2/neu，HER3(ERBB-3)，IgG4，HGF/SF(肝細胞生長因子/分散因子)，HHGFR，HIV-1，組蛋白復(fù)合物，HLA-DR(人類白細胞抗原)，HLA-DR10，HLA-DRB，HMWMAA，人類絨毛膜促性腺激素，HNGF,人類分散因子受體激酶，HPV?E6/E7，Hsp90，hTERT，ICAM-1(細胞間粘附分子1)，獨特型，IGF1R(IGF–1，類胰島素生長因子1受體)，IGHE，IFN-γ，流感血凝素，IgE，IgE?Fc區(qū)，IGHE，IL–1，IL-2R(白介素2受體)，IL–4，IL-5，IL–6，IL-6R(白介素6受體)，IL-9，IL–10，IL–12，IL-13，IL-17，IL-17A，IL-
20，IL-22，IL-23，IL31RA，ILGF2(類胰島素生長因子2)，整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ3、α4β7、α
5β1、α6β4、α7β7、αllβ3、α5β5、αvβ5)，干擾素γ誘導(dǎo)蛋白質(zhì)，ITGA2，ITGB2，KIR2D，LCK，Le，Legumain，Lewis-Y抗原，LFA-1(淋巴細胞功能相關(guān)抗原1，CD11a)，LHRH，LINGO-1，脂磷壁酸，LIV1A，LMP2，LTA，MAD-CT-1，MAD-CT-2，MAGE-1，MAGE-2，MAGE-3，MAGE?A1，MAGE?A3，MAGE?
4，MART1，MCP-1，MIF(巨噬細胞遷移抑制因子，或糖基抑制因子(GIF))，MS4A1(跨膜4結(jié)構(gòu)域亞家族A成員1)，MSLN(間皮素)，MUC1(粘蛋白1，細胞表面相關(guān)(MUC1)或多態(tài)性上皮粘蛋白(PEM))，MUC1-KLH，MUC16(CA125)，MCP1(單核細胞趨化蛋白1)，MelanA/MART1，ML-IAP，MPG，MS4A1，MYCN，髓磷脂相關(guān)糖蛋白，Myostatin,NA17，NARP-1,NCA-90(粒細胞抗原)，Nectin-4(ASG-22ME)，NGF，神經(jīng)細胞凋亡調(diào)控蛋白酶1,NOGO-A，Notch受體，核仁素，Neu致癌基因產(chǎn)物，NY-BR-1，NY-ESO-1，OX-40,OxLDL(氧化低密度脂蛋白)，OY-TES1，P21，p53非突變體，P97，PAP，抗(N-羥乙酰神經(jīng)氨酸)抗體結(jié)合部位，PAX3，PAX5，PCSK9，PDCD1(PD-1、程序性細胞死亡蛋白1，CD279)，PDGF-Rα(α血小板源生長因子受體)，PDGFR-β，PDL-1，PLAC1，類PLAP睪丸堿性磷酸酶，血小板衍生生長因子受體β，磷酸鈉聯(lián)合轉(zhuǎn)運體，PMEL?17，聚唾液酸，蛋白酶3(PR1)，前列腺癌，PS(磷脂酰絲氨酸)，前列腺癌細胞，銅綠假單胞菌，PSMA，PSA，PSCA，狂犬病病毒糖蛋白，RHD(Rh多肽1(RhPI)，CD240)，Rhesus因子，RANKL，RhoC，Ras突變，RGS5，ROBO4，呼吸道合胞病毒，RON，肉瘤易位斷點，SART3，Sclerostin，SLAMF7(SLAM成員7)，Selectin?P，SDC1(多配體蛋白聚糖1)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(a)，生長調(diào)節(jié)素C，SIP(1-磷酸鞘氨醇)，生長激素抑制素，精子蛋白17，SSX2，STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1)，STEAP2，STn，TAG-72(腫瘤相關(guān)糖蛋白)，存活素，T細胞受體，T細胞跨膜蛋白，TEM1(腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記
1)，TENB2，Tenascin?C(TN-C)，TGF-α，TGF-β(轉(zhuǎn)化生長因子β)，TGF-β1，TGF-β2(轉(zhuǎn)化生長因子2)，Tie(CD202b)，Tie2，TIM-1(CDX-014)，Tn，TNF，TNF-α，TNFRSF8，TNFRSF10B(腫瘤壞死因子受體超家族成員10B)，TNFRSF13B(腫瘤壞死因子受體超家族成員13B)，TPBG(滋養(yǎng)細胞糖蛋白)，TRAIL-R1(TNF相關(guān)壞死誘導(dǎo)配體受體1)，TRAILR2(死亡受體5(DR5))，腫瘤相關(guān)的鈣信號傳感器2，腫瘤特異糖基化的MUC1，TWEAK受體，TYRP1(糖蛋白75)，TRP-2，酪氨酸酶，VCAM-1(CD106)，VEGF,VEGF-A,VEGF-2(CD309)，VEGFR-1，VEGFR2，vimentin,WT1,XAGE?1，表達任何胰島素生長因子受體的細胞，或任何表皮生長因子受體。
Achlorhydra自身免疫性活動性慢性肝炎，急性播散性腦脊髓炎，急性出血性腦白質(zhì)炎，艾迪生病，無精癥，斑禿，肌萎縮側(cè)索硬化癥，強直性脊柱炎，抗GBM/TBM腎炎，抗磷脂綜合征，抗異常酶綜合征，關(guān)節(jié)炎，特應(yīng)性過敏，特應(yīng)性皮炎，自身免疫性再生障礙性貧血，自身免疫性心肌病，自身免疫性溶血性貧血，自身免疫性肝炎，自身免疫性內(nèi)耳疾病，自身免疫性淋巴組織增生綜合征，自身免疫性周圍神經(jīng)病，自身免疫性胰腺炎，自身免疫性多內(nèi)分泌綜合征I，II和III型，自身免疫性黃體酮皮炎，自身免疫性血小板減少性紫癜，自身免疫性葡萄膜炎，Balo病/Balo同心硬化癥，Bechets綜合征，Berger氏病，Bickerstaff腦炎，Blau綜合征，大皰性類天皰瘡，Castleman病，Chagas病，慢性疲勞免疫功能障礙綜合征，慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病，慢性復(fù)發(fā)性多灶性骨髓炎，慢性萊姆病，慢性阻塞性肺病，Churg-
Strauss綜合征，瘢痕性類天皰瘡，乳糜泄，Cogan綜合征，冷凝集素病，補體成分2缺乏癥，顱骨動脈炎，CREST綜合征，Crohns病(特發(fā)性炎癥性腸病)，庫欣綜合征，皮膚白細胞增多性血管炎，德戈氏病，Dercum氏病，皰疹樣皮炎，皮肌炎，1型糖尿病，彌漫性皮膚系統(tǒng)性硬化癥，Dressler綜合征，盤狀紅斑狼瘡，濕疹，子宮內(nèi)膜異位癥，附著點炎相關(guān)的關(guān)節(jié)炎，
Eosinophilic筋膜炎，大皰性表皮松解癥，結(jié)節(jié)性紅斑，特發(fā)性混合性冷球蛋白血癥，伊文氏綜合征，纖維發(fā)育不良性骨化癥，纖維肌痛，纖維化性肌炎，纖維性肺泡炎，胃炎，胃腸類天皰瘡，巨細胞動脈炎，腎小球腎炎，古德帕斯丘爾綜合征，格雷夫斯病，格林-巴利綜合征，橋本氏腦炎，橋本氏甲狀腺炎，溶血性貧血，過敏性紫癜，妊娠性肝炎，化膿性汗腺炎，休斯綜合征(抗磷脂綜合征)，低丙球蛋白血癥，特發(fā)性炎性脫髓鞘疾病，特發(fā)性肺纖維化，特發(fā)性血小板減少性紫癜(自身免疫性血小板減少性紫癜)，IgA腎病(伯杰氏病)，包涵體肌炎，炎性脫髓鞘性多神經(jīng)炎，間質(zhì)性膀胱炎，過敏性腸綜合征，少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎，青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，川崎氏病，朗伯-伊頓重癥肌無力綜合征，白細胞碎屑性血管炎，扁平苔癬，硬化性硬化癥，線狀I(lǐng)gA疾病(LAD)，Lou?Gehrig病(也稱肌萎縮側(cè)索硬化癥)，狼瘡性肝炎，紅斑狼瘡，Majeed綜合征，美尼爾氏病，顯微鏡下多動脈炎，米勒-費希爾綜合征，混合性結(jié)締組織病，硬斑病，穆罕默德-哈貝曼病，麥考利綜合征，多發(fā)性骨髓瘤，多發(fā)性硬化癥，重癥肌無力，肌炎，嗜睡癥，視神經(jīng)脊髓炎(Devic病)，神經(jīng)性肌強直，眼瞼瘢痕性類天皰瘡，
Opsoclonus?myoclonus綜合征，Ord甲狀腺炎，回文風(fēng)濕病，PANDAS(與鏈球菌相關(guān)的小兒自身免疫性神經(jīng)精神病)，Paraneoplastic小腦變性，陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥，Parry?
Romberg綜合征，Parsonnage-Turner綜合征，睫狀體平部炎，天皰瘡，尋常型天皰瘡，貧血，周圍腦脊髓炎，POEMS綜合征，結(jié)節(jié)性多動脈炎，風(fēng)濕性多肌痛，多發(fā)性肌炎，原發(fā)性膽汁性肝硬化，原發(fā)性硬化性膽管炎，進行性炎癥性神經(jīng)病變，牛皮癬，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎，壞疽性皮膚炎，純紅細胞再生障礙，Rasmussen腦炎，雷諾現(xiàn)象，復(fù)發(fā)性多軟骨炎，賴特綜合征，不寧腿綜合癥，后神經(jīng)纖維化，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕熱，結(jié)節(jié)病，精神分裂癥，施密特綜合征，Schnitzler綜合征，施尼茨勒綜合征，鞏膜炎，硬皮病，干燥綜合征，脊椎關(guān)節(jié)病，粘稠血癥，Still病，僵人綜合征，亞急性細菌性心內(nèi)膜炎，蘇薩克綜合征，Sweet綜合征，小舞蹈病，交感神經(jīng)性貧血，Takayasu動脈炎，顳動脈炎(巨細胞動脈炎)，Tolosa-Hunt綜合征，橫貫性脊髓炎，潰瘍性結(jié)腸炎(特發(fā)性炎性腸病)，未分化結(jié)締組織病，未分化脊柱關(guān)節(jié)病，血管炎，白癜風(fēng)，韋格納肉芽腫病，威爾遜氏綜合征，威斯科特-奧爾德里奇綜合征。
Abys抗上皮細胞抗體，抗地下室膜IV型膠原蛋白抗體，抗核抗體，抗ds?DNA，抗ss?DNA，抗心磷脂抗體IgM，IgG，抗乳糜瀉抗體，抗磷脂抗體IgK，IgG，抗SM抗體，抗線粒體抗體，甲狀腺抗體，微粒體抗體，T細胞抗體，甲狀腺球蛋白抗體，抗SCL-70，抗Jo，抗U.sub.1RNP，抗La/SSB，抗SSA，抗SSB，抗壁細胞抗體，抗組蛋白，抗RNP，C-ANCA，P-ANCA，抗著絲粒，抗纖維蛋白原，抗GBM抗體，抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體，抗Desmogein?3抗體，抗p62抗體，抗sp100抗體，抗線粒體(M2)抗體，類風(fēng)濕因子抗體，抗MCV抗體，抗拓撲異構(gòu)酶抗體，抗中性粒細胞胞質(zhì)(cANCA)抗體。
蛋白基因超家族成員(例如CD2，CD3，CD4，CD8，CD19，CD20，CD22，CD28，CD30，CD33，CD37，CD38，CD56，CD70，CD79，CD79b，CD90，CD125，CD147，CD152/CTLA-4，PD-1或ICOS)，TNF受體超家族成員(例如CD27，CD40，CD95/Fas，CD134/OX40，CD137/4-1BB，INF-R1，TNFR-2，RANK，TACI，BCMA，骨保護素，Apo2/TRAIL-R1，TRAIL-R2，TRAIL-R3，TRAIL-R4和APO-3)，整合蛋白，細胞因子受體，趨化因子受體，主要組織相容性蛋白，凝集素(C型，S型或I型)或補體控制蛋白。
腦膜炎)，亞博病毒腦炎，正粘病毒(腦炎性腦炎)，RV(狂犬病)，長鼻病毒，皰疹病毒腦膜炎，拉姆齊亨特綜合征II型，脊髓灰質(zhì)炎病毒(脊髓灰質(zhì)炎病毒，后脊髓灰質(zhì)炎綜合征)，HTLV-1(熱帶麻痹性麻痹))；巨細胞病毒(巨細胞病毒視網(wǎng)膜炎，HSV(皰疹性角膜炎)；心血管病毒，如CBV(心包炎，心肌炎)；呼吸系統(tǒng)/急性病毒性鼻內(nèi)炎/病毒性肺炎，如愛潑斯坦-巴爾病毒(EBV感染/傳染性單核病)，巨細胞病毒，非典冠狀病毒(嚴(yán)重急性呼吸綜合征)或正黏液病
毒，流感病毒a/b/c(流感/禽流感)，副粘病毒，人類副流感病毒，RSV(人類呼吸道合胞病
毒)，hMPV；消化系統(tǒng)病毒(腮腺炎病毒，巨細胞病毒(巨細胞病毒食管炎)，腺病毒(腺病毒感染)，輪狀病毒，諾瓦克病毒，星狀病毒，冠狀病毒，乙型肝炎病毒，CBV，甲型肝炎病毒，丙型肝炎病毒，丁型肝炎病毒，戊型肝炎病毒，HGV)；泌尿生殖病毒，如BK病毒，MuV(腮腺炎)。
的例子包括在進行移植(HSCT)之前對造血干細胞(HSC)進行處理，以殺死患病或惡性細胞。
例如，在癌癥治療中的自體移植之前或在自身免疫性疾病的治療中從骨髓中去除腫瘤細胞
或淋巴細胞，或在移植之前為了防止移植物抗宿主疾病從同種異體骨髓或組織中除去T細
胞和其他淋巴細胞。這樣的臨床離體治療可以按如下步驟進行：從患者或其他個體收獲骨
髓，然后在含有血清的培養(yǎng)基中約37℃下孵育約30分鐘至約48小時，在該培養(yǎng)基中加入本
發(fā)明的偶聯(lián)物，濃度范圍從約1pM至0.1mM。具體的藥物濃度和孵育時間應(yīng)當(dāng)由專業(yè)臨床醫(yī)
師決定。孵育后，用含血清的培養(yǎng)基洗滌骨髓細胞，并按照已知的方法通過靜脈注射給患
者。若患者在骨髓采集和再輸注治療細胞之間，還接受其它治療(例如消融化療或全身輻射療程)的情況下，應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療設(shè)備將處理后的骨髓細胞在液氮中冷凍儲存。
50μg至20mg/kg(體重)每天，或者每周，兩周，三周或者每個月(每次注射10μg至200mg/kg劑量)。治療后 周，患者可以接受第二療程治療。有關(guān)施用途徑，賦形劑，稀釋劑，劑量，次數(shù)等的具體臨床方案可以由專業(yè)臨床醫(yī)生確定。
物的相對生物功效，藥物的配方，給藥途徑(靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)或其他)，藥物指定運送途徑的藥代動力學(xué)性質(zhì)，以及給藥速度(推注或連續(xù)輸注)和給藥方案(給定時間內(nèi)的重復(fù)次數(shù))。
0.01至100mg/kg體重。作為一般指導(dǎo)原則，人類的單位劑量其范圍為1mg到3000mg每天或者每周，或者2周，3周或者每個月。單位劑量范圍優(yōu)選1至500mg，一周一次至四次，更優(yōu)選為
10mg至500mg，一周一次。本文提供的偶聯(lián)物可以通過與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑混合而配制成藥物組合物。這樣的單位劑量組合物可以通過口服給藥，如片劑，簡單膠囊或軟凝膠膠囊的形式的藥物；或鼻內(nèi)給藥，如粉劑，滴鼻劑或氣霧劑的藥物；或皮膚給藥，如使用局部用軟膏，乳膏，乳液，凝膠或噴霧劑或通過透皮貼劑給藥。
嘧啶類似物，尿嘧啶類似物(安西他濱，阿扎胞苷，6-氮尿嘧啶，卡培他濱(希羅達)，卡莫氟，阿糖胞苷，雙脫氧尿苷，去氧氟尿苷，依諾他濱，5-氟尿嘧啶，氟尿苷，ratitrexed
(Tomudex)；胞嘧啶類似物(阿糖胞苷，胞嘧啶阿拉伯糖苷，氟達拉濱)；嘌呤類似物(硫唑嘌呤，氟達拉濱，巰嘌呤，硫胺素，硫鳥嘌呤)；葉酸補充劑，如弗洛林酸；e)激素療法劑，如受體拮抗劑，抗雌激素(甲地孕酮，雷洛昔芬，他莫昔芬)，LHRH興奮劑(戈斯他林，醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素藥(比卡魯胺，氟他胺，卡魯司酮，丙酸倍他雄酮，表雄甾醇，戈舍瑞林，亮丙瑞林，美替利定，尼魯米特，睪內(nèi)酯，曲洛司坦及其他雄激素抑制劑)；維甲類化合物，維生素D3類似物(CB1093，EB1089KH1060，膽鈣化醇，麥角鈣化甾醇)；光動力療法劑(維替泊芬，酞菁，光敏劑Pc4，去甲氧基-竹紅菌素A)；細胞因子(干擾素-α，干擾素-γ，腫瘤壞死因子(TNF)，含TNF的人蛋白)；f)激酶抑制劑，如BIBW?2992(抗-EGFR/Erb2)，伊馬替尼，吉非替尼，哌加他尼，索拉非尼，達沙替尼，舒尼替尼，厄洛替尼，尼洛替尼，拉帕替尼，阿西替尼，帕唑帕尼，凡德他尼，E7080(抗VEGFR2)，mubritinib，普納替尼(AP24534)，bafetinib(INNO-406)，bosutinib(SKI-606)，卡博替尼，維莫德吉，iniparib，魯索利替尼，CYT387，阿西替尼，tivozanib，索拉非尼，貝伐單抗，西妥昔單抗，曲妥珠單抗，雷珠單抗，帕尼單抗，伊斯平斯；
g)抗生素，如烯二炔類抗生素(加利車霉素，特別是加利車霉素γ1，δ1，α1和β1(參考
J.Med.Chem.1996,39(11)，2103-2117；Angew?Chem?Intl.Ed.Engl.1994,33:183-186)，達因霉素，包括達因霉素A和脫氧米霉素，埃斯培拉霉素，卡達霉素，C-1027，maduropeptin以及新制癌菌素發(fā)色團和相關(guān)色蛋白烯二炔抗生素發(fā)色團)，aclacinomysins，放線菌素，安曲霉素，重氮絲氨酸，博來霉素，卡諾霉素，卡拉霉素，洋紅霉素，嗜癌素，阿霉素，阿霉素，嗎啉代阿霉素，2-吡咯啉阿霉素和脫氧柔紅霉素，表柔比星，阿柔比星，伊達比星，馬可霉素，霉素，霉酚酸，洛匹霉素，培洛霉素，培洛霉素，嘌呤霉素，三鐵阿霉素，阿霉素，鏈脲霉素，鏈脲佐菌素，殺結(jié)核菌素，烏苯美司，凈司他丁，佐柔比星；h)其他，如聚酮化合物(番荔素)，特別是bullatacin和bullatacinone；吉西他濱，環(huán)氧酶素(如卡菲偌米布)，硼替佐米，沙利度胺，來那度胺，pomalidomide，tosedostat，zybrestat，PLX4032，STA-9090，Stimuvax，allovectin-7，Xegeva，Provenge，Yervoy，異戊二烯化抑制劑(如洛伐他汀)，多巴胺能神經(jīng)毒素(如星形孢菌素)，放線菌素(如放線菌素D，更生霉素)，博萊霉素(如博來霉素A2，博萊霉素B2，培洛霉素)，蒽環(huán)類抗生素(如柔紅霉素)，阿霉素(亞德里亞霉素)，伊達比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，MDR抑制劑(如維拉帕米)，Ca2+ATP酶抑制劑(如毒胡蘿卜素)，組蛋白去乙酰酶抑制劑(伏立諾他，羅米地辛，帕比司他，丙戊酸，Mocetinostat
(MGCD0103)，Belinostat，PCI-24781，恩替諾特，SB939，Resminostat，Givinostat，AR-42，CUDC-101，蘿卜硫素，曲古抑菌素A)；塞來昔布，格列酮類，表沒食子兒茶素沒食子酸酯，雙硫侖，Salinosporamide?A；抗腎上腺藥物，如氨魯米特，米托坦，曲洛司坦，醋葡醛內(nèi)酯，醛磷酰胺，氨基乙酰丙酸，安吖啶，阿拉伯糖苷，bestrabucil，比生群，edatraxate，defofamine，美可辛，地吖醌，依氟鳥氨酸(DFMO)，elfomithine，依利醋銨，乙基葡糖酸，硝酸鎵，胞嘧啶，羥基脲，伊班膦酸鹽，香菇多糖，氯尼達明，米托胍腙，米托蒽醌，莫哌達醇，二胺硝吖啶，噴司他丁，蛋氨氮芥，吡柔比星，鬼臼酸，2-乙肼，甲基芐肼； 哌嗪二酮丙烷；根霉素；西佐；螺環(huán)鍺；細格孢氮雜酸；三亞胺醌；三氯三乙胺；單端孢霉烯(特別是T-2毒素，疣孢菌素A，桿孢菌素A和anguidine)，聚氨酯，siRNA，反義藥物和核酸分解酶。
1137-1146)。細胞結(jié)合分子，例如抗體可以通過本專利的連接體鏈接配體試劑，進行標(biāo)記。
配體可以用文獻(Current?Protocols?in?Immunology,Volumes?1and?2,Coligen?et?al,
Ed.Wiley-Interscience,New?York,N.Y.,Pubs.(1991))所述的方法與放射性金屬結(jié)合、螯
合或生成復(fù)合物?？梢越j(luò)合金屬離子的螯合配體包括DOTA，DOTP，DOTMA，DTPA和TETA
(Macrocyclics，Dallas，TX)等。
光，熒光，紅外光，近紅外光或可見光；發(fā)色分子包括黃色素，紅細胞，虹彩色素，白細胞，黑色素和藍綠色素的一類或一個亞類，熒光分子(吸收光后再發(fā)光的熒光化學(xué)物質(zhì))的一類或
一個亞類，視覺光轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的一類或一個亞類，光子分子的一類或一個亞類，冷光分子的一類或一個亞類和熒光素化合物的一類或一個亞類。
唑)；蒽衍生物(蒽醌類，包括DRAQ5，DRAQ7和CyTRAK橙)；芘衍生物(級聯(lián)藍等)；惡嗪衍生物(尼羅紅，尼羅藍，甲酚紫，惡嗪170等)；吖啶衍生物(黃醇黃素，吖啶橙，吖啶黃等)；芳基甲胺衍生物(金胺，結(jié)晶紫，孔雀石綠)和四吡咯衍生物(卟吩，酞菁，膽紅素)。
Fluor(Thermo?Scientific，Pierce)，Atto和Tracy(Sigma?Aldrich)，F(xiàn)luoProbes
(Interchim)，Abberior染料(Abberior)，DY和MegaStokes染料(Dyomics)，Sulfo?Cy染料
(Cyandye)，HiLyte? Fluor(AnaSpec)，Seta，SeTau和Square染料(Biosearch?
Technologies)，SureLight染料(APC，RPEPerCP，Phycobilisomes)(Columbia?
Biosciences)，APC，APCXL，RPE，BPE(Phyco-Biotech)。
555-Azide，Seta-555-DBCO，Seta-555-NHS，Seta-580-NHS，Seta-680-NHS，Seta-APC-780，Seta-PerCP-680，Seta-R-PE-670，SeTau-380-NHS，SeTau-405-馬來酰亞胺，SeTau-405-
NHS，SeTau-425-NHS，SeTau-647-NHS，Texas?Red,TRITC，TruRed，X-Rhodamine。
(APC)，AmCyan1(四聚體，Clontech)，AsRed2(四聚體，Clontech)，薊綠(單體，MBL)，
Azurite，B-藻紅蛋白(BPE)，Cerulean，CyPet，DsRed單體(Clontech)，DsRed2(“RFP”，Clontech)，EBFP，EBFP2，ECFP，EGFP(弱二聚體，Clontech)，Emerald(弱二聚體，
Invitrogen)，EYFP(弱二聚體，Clontech)，GFP(S65A突變)，GFP(S65C突變)，GFP(S65L突變)GFP(Y66H突變)，GFP(Y66W突變)，GFPuv，HcRed1，J-Red，Katusha，Kusabira?Orange(單聚體，MBL)，mCFP，mCherry(單體，MBL)，mKate(TagFP635，單體，Evrogen)，mKeima-Red(單體，MBL)，mKO，mOrange，mPlum，mRaspberry，mRFP1(單體，Tsien實驗室)，mStrawberry，mTFP1，mTurquoise2，P3(藻膽體復(fù)合物)，多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質(zhì)復(fù)合物(PerCP)，R-
phycoerythrin(RPE)，T-Sapphire，TagCFP(二聚體，Evrogen)，TagGFP(二聚體，Evrogen)，TagRFP(二聚體，Evrogen)，TagYFP(二聚體，Evrogen)，tdTomato(串聯(lián)二聚體)，Topaz，TurboFP602(二聚體，Evrogen)，TurboFPP635(二聚體，Evrogen)，TurboGFP(二聚體，
Evrogen)，TurboRFP(二聚體，Evrogen)，TurboYFP(二聚體，Evrogen)，Venus，野生型GFP型，YPet，ZsGreen1(四聚體，Clontech)，ZsYellow1(四聚體，Clontech)。
或惡唑烷并苯并二氮卓的二聚體)，卡立霉素類和烯二炔類抗生素，放線菌素，氮絲菌素，博來霉素，表柔比星，他莫昔芬，伊達比星，多拉司他汀，澳瑞他汀(例如MMAE，MMAF，澳瑞他汀PYE，澳瑞他汀TP，澳瑞他汀2-AQ，6-AQ，EB(AEB)和EFP(AEFP))，多卡霉素，噻替派，長春新堿，半米塔林，nazumamide，microginin，radiosumin，alterobactin，microsclerominmin，theonellamide，esperamicin，PNU-159682及其類似物和衍生物。
2009,52,238–240.Wipf,P.；et?al.Org.Lett.,2004,6,4057–4060.Pando,O.；et?
al.J.Am.Chem.Soc.,2011,133,7692–7695.Reddy,J.A.；et?al.Mol.Pharmaceutics,2009,
6,1518–1525.Raghavan,B.；et?al.J.Med.Chem.,2008,51,1530–1533.Patterson,A.W.；et?al.J.Org.Chem.,2008,73,4362–4369.Pando,O.；et?al.Org.Lett.,2009,11(24),pp5567–
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Matschiner,G.；et?al,PCT?WO?2009095447.Vlahov,I.；et?al,PCT?WO?2009055562,WO?
2008112873.Low,P.；et?al,PCT?WO?2009026177.Richter,W.,PCT?WO?2008138561.Kjems,
J.；et?al,PCT?WO?2008125116.Davis,M.；et?al,PCT?WO?2008076333.Diener,J.；et?al,U.S.Pat.Appl.20070041901,WO? 2006096754.Matschiner,G.；et?al,PCT?WO?
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102004030227；PCT?WO?2004005327；WO?2004005326；WO2004005269.Stanton,M.；et?al,U.S.Pat.Appl.Publ.20040249130.Hoefle,G.；et?al,Ger.Offen.DE?10254439；DE?
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Ger.Offen.DE?19638870；Wolfgang,R.；US?20120129779,Chen,H.,US?appl.20110027274。
在專利PCT/IB2012/053554中描述了與細胞結(jié)合分子連接的tubulysin的優(yōu)選結(jié)構(gòu)。
5888，和美國專利4,970,198；5,053,394；5,108,912；5,264,586；5,384,412；5,606,040；5,
712,374；5,714,586；5,739,116；5,770,701；5,770,710；5,773,001；5,877,296；6,015,
562；6,124,310；8,153,768。通過橋連接體連接的抗體-加利車霉素類似物的結(jié)構(gòu)的例子如C01：
331,598；4,450,254；4,364,866；4,313,946；4,315,929；4,362,663；4,322,348；4,371,
533；4,424,219；5,208,020；5,416,064；5,208,020；5,416,064；6,333.410；6,441,163；6,
716,821,7,276,497；7,301,019；7,303,749；7,368,565；7,411,063；7,851,432和8,163,
888。一個抗體-美登素偶聯(lián)物的例子如M01：
3896；1997,40,267-278；2002,45,5620-5623；Ojima?et?al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,1999,
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al.J.Med.Chem.,2004,47,4802-4805；美國專利5,475,011?5,728,849,5,811,452；6,340,
701；6,372,738；6,391,913,6.436,931；6,589,979；6,596,757；6,706,708；7,008,942；7,
186,851；7,217,819；7,276,499；7,598,290和7,667,054。
J.Med.Chem.31:590-603(1988),D.Boger?et?al.,J.Org.Chem；66；6654-6661,2001；美國專利4169888,4391904,4671958,4816567,4912227,4923990,4952394,4975278,4978757,
4994578,5037993,5070092,5084468,5101038,5117006,5137877,5138059,5147786,
5187186,5223409,5225539,5288514,5324483,5332740,5332837,5334528,5403484,
5427908,5475092,5495009,5530101,5545806,5547667,5569825,5571698,5573922,
5580717,5585089,5585499,5587161,5595499,5606017,5622929,5625126,5629430,
5633425,5641780,5660829,5661016,5686237,5693762,5703080,5712374,5714586,
5739116,5739350,5770429,5773001,5773435,5786377?5786486,5789650,5814318,
5846545,5874299,5877296,5877397,5885793,5939598,5962216,5969108,5985908,
6060608,6066742,6075181,6103236,6114598,6130237,6132722,6143901,6150584,
6162963,6172197,6180370,6194612,6214345,6262271,6281354,6310209,6329497,
6342480,6486326,6512101,6521404,6534660,6544731,6548530,6555313,6555693,
6566336,6,586,618,6593081,6630579,6,756,397,6759509,6762179,6884869,6897034,
6946455,7,049,316,7087600,7091186,7115573,7129261,7214663,7223837,7304032,
7329507,7,329,760,7,388,026,7,655,660,7,655,661,7,906,545,和8,012,978。經(jīng)橋連
接體連接的抗體-CC-1065類似物結(jié)構(gòu)的實例如下：
H.M.,and?Reisfeld,R.A.,Proc.Natl.Acad.Sci.1988,85,1189-1193；Pietersz,C.A.,E.,
et?al.,E.,et?al.,Cancer?Res.1988,48,926-9311；Trouet,et?al.,1982,79,626-629；
Z.Brich?et?al.,J.Controlled?Release,1992,19,245-258；Chen?et?al.,Syn.Comm.,
2003,33,2377-2390；King?et?al.,Bioconj.Chem.,1999,10,279-288；King?et?al.,
J.Med.Chem.,2002,45,4336-4343；Kratz?et?al.,J?Med?Chem.2002,45,5523-33；Kratz?
et?al.,Biol?Pharm?Bull.Jan.1998,21,56-61；Lau?et?al.,Bioorg.Med.Chem.1995,3,
1305-1312；Scott?et?al.,Bioorg.Med.l?Chem.Lett.1996?6,1491-1496；Watanabe?et?
al.,Tokai? J.Experimental? Clin.Med.1990,15,327-334；Zhou?et? al.,
J.Am.Chem.Soc.2004,126,15656-7；WO?01/38318；美國專利5,106,951；5,122,368；5,146,
064；5,177,016；5,208,323；5,824,805；6,146,658；6,214,345；7569358；7,803,903；8,
084,586；8,053,205。通過橋連接體連接的抗體-阿霉素類似物結(jié)構(gòu)的實例如下所示：
物，在如下文獻中有描述：Int.J.Oncol.1999,15,367-72；Molecular? Cancer?
Therapeutics,2004,3(8),921-932；美國專利申請11134826,20060074008,2006022925,美
國專利4414205,4753894,4764368,4816444,4879278,4943628,4978744,5122368,
5165923,5169774,5286637,5410024,5521284,5530097,5554725,5585089,5599902,
5629197,5635483,5654399,5663149,5665860,5708146,5714586,5741892,5767236,
5767237,5780588,5821337,5840699,5965537,6004934,6033876,6034065,6048720,
6054297,6054561,6124431,6143721,6162930,6214345,6239104,6323315,6342219,
6342221,6407213,6569834,6620911,6639055,6884869,6913748,7090843,7091186,
7097840,7098305,7098308,7498298,7375078,7462352,7553816,7659241,7662387,
7745394,7754681,7829531,7837980,7837995,7902338,7964566,7964567,7851437,
7994135?？贵w-澳瑞他汀通過橋連接體連接的偶聯(lián)物結(jié)構(gòu)的實例如AuO?1，AuO?2，AuO?3，AuO?4和AuO?5：
319；7,704,924；7,691,848；7,678,787；7,612,062；7,608,615；7,557,099；7,528,128；7,
528,126；7,511,032；7,429,658；7,407,951；7,326,700；7,312,210；7,265,105；7,202,
239；7,189,710；7,173,026；7,109,193；7,067,511；7,064,120；7,056,913；7,049,311；7,
022,699；7,015,215；6,979,684；6,951,853；6,884,799；6,800,622；6,747,144；6,660,
856；6,608,192；6,562,806；6,977,254；6,951,853；6,909,006；6,344,451；5,880,122；4,
935,362；4,764,616；4,761,412；4,723,007；4,723,003；4,683,230；4,663,453；4,508,
647；4,464,467；4,427,587；4,000,304；美國專利申請20100203007,20100316656,
20030195196?？贵w-苯并二氮卓二聚體偶聯(lián)物結(jié)構(gòu)的實例如PB01，PB02，PB03，PB04，PB05，PB06，PB07和PB08：
物和衍生物。
外，細胞培養(yǎng)試劑來自于Invitrogen公司。所有的無水試劑均由商業(yè)途徑獲得，并儲存于
Sure-Seal密封瓶中。其他的試劑和溶劑均按照最高規(guī)格購買，使用時未經(jīng)進一步的處理。
Varian?Prostar?HPLC進行制備HPLC純化。NMR數(shù)據(jù)在Varian?Mercury?400MHz上獲得，化學(xué)位移以ppm為單位，四甲基硅烷為參考(0.00ppm)，耦合常數(shù)(J)的單位是Hz。質(zhì)譜數(shù)據(jù)在
Waters?XevoQTof質(zhì)譜儀(連接Waters?Acquity?UPLC高效液相色譜儀和TUV檢測器)上獲
得。
2H,J＝6.4Hz),3.59-3.72(m,14H).ESI?MS?m/z-C13H25O6(M-H),計算值.277.17,實測值
277.20.
(d,2H,J＝8.0Hz),7.75(d,2H,J＝8.0Hz)；ESI?MS?m/z+C20H33O8S(M+H),計算值433.18,實測值433.30.
35mL)萃取，合并的有機層用無水硫酸鎂干燥，過濾，真空除去溶劑。粗品(約90％TLC純)不經(jīng)進一步純化而使用。1H?NMR(CDCl3):1.40(s,9H),2.45(t,2H,J＝6.4Hz),3.33(t,2H,J＝
5.2Hz),3.53-3.66(m,12H).ESI?MS?m/z+C13H26N3O8(M+H),計算值.304.18,實測值304.20.
三氧雜十二烷酸叔丁酯丁酯37(1.83g，收率44％ESI?MSm/z+C13H27NO5(M+H),計算值278.19,實測值278.30)和13-氨基-雙(4,7,10-三氧雜十二烷酸叔丁酯)38(2.58g，32％產(chǎn)率，ESI?
MS?m/z+C26H52NO10(M+H),計算值538.35,實測值538.40).
86％收率)，無需進一步純化。ESI?MS?m/z+C9H20NO5(M+H),計算值222.12，實測值222.20.[0230] 例6.?13-氨基-雙(4,7,10-三氧雜十二烷酸鹽酸鹽)(40)
0.71g，91％收率)，未經(jīng)進一步純化。ESI?MS?m/z+C18H36NO10(M+H),計算值426.22，實測值
426.20。
干燥，真空濃縮。所得產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(100-200目，5％至10％H2O/乙腈)純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物(5.50g，產(chǎn)率85％)。ESI?MS?m/z-C10H9O6(M-H),計算值226.05,實測值226.10.
4-甲酰氨基)-5-(3-氨基-4-羥基苯基)-2-甲基戊酸，51(Huang?Y.et?al,Med?Chem.#44,
th
249 ?ACS?National?Meeting,Denver,CO,Mar.22～26,2015；WO2014009774)(151mg，
0.199mmol)的THF(4.0ml)溶液和磷酸鹽緩沖液(4mL，100mM?Na?2HPO?4，pH?7.0)。在室溫下攪拌4小時后，濃縮反應(yīng)液并用C-18制備HPLC(250mm×20mm)純化，用水/乙醇(90％至50％
水，55分鐘，流速15ml/分鐘)。合并含有產(chǎn)物的組分，濃縮并用EtOH/正己烷結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(73mg，53％收率)。ESI?MS?m/z+C86H122N12NaO20S2(M+Na),計算值1729.83,實測值
1730.10.
(345mg，59％收率)。ESI?MS?m/z-C22H36N2O12(M-H),計算值519.22,實測值519.30.
基)丁-2-炔二酸鹽9(190mg，0.61mmol)。在室溫下暗處攪拌4h后，濃縮反應(yīng)混合物并用C-18制備HPLC(250mm×內(nèi)徑30mm)，用水/乙醇(在55分鐘內(nèi)90％至50％水，流速35ml/分鐘)洗
脫，合并含有產(chǎn)物的組分并濃縮，得到標(biāo)題化合物(287毫克，產(chǎn)率51％)。ESI?MS?m/z-
C40H67N2O22(M-H),計算值927.42,實測值928.30.
(401mg，2.08mmol)。將混合物在暗處攪拌過夜，濃縮后在SiO?2柱上純化，用EtOAc/DCM(5:
1)洗脫，得到標(biāo)題化合物88(330mg，71％收率)。ESI?MS?m/z+C30H43N4O16(M+H),計算值
715.26,實測值715.20.
1,30-二酸鹽(89)
(249mg，63％收率)。ESI?MS?m/z+C56H81N6O30(M+H),計算值1317.49,實測值1317.80.
(2-((1R，3R)-1-乙酰氧基-3-((2S，3S)-N，3-二甲基-2-((R)-1-甲基哌啶-2-甲酰氨基)戊基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰氨基)-2-甲基-酸)(90)
戊基)噻唑-4-甲酰氨基)-5-(3-氨基-4-羥基苯基)-2-甲基戊酸，51(Huang?Y.et?al,Med?
Chem.#44,249th?ACS?National?Meeting,Denver,CO,Mar.22～26,2015；WO2014009774)
(80mg，0.107mmol)的THF(4.0ml)溶液和磷酸鹽緩沖液(4ml,100mM?Na2HPO4,pH?7.0)。在室溫下攪拌4小時后，將混合物濃縮并用C-18制備HPLC(250mm×內(nèi)徑20mm)純化，用水/乙醇
(95％至50％水，流速15ml/分鐘)。合并含有產(chǎn)物的組分，濃縮并用EtOH/正己烷結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(48mg，56％收率)。ESI?MS?m/z-C98H147N14O26S2(M-H),計算值2000.01,實測值
2000.40.
91(約87％收率)( 緩沖液中)。藥物/抗體比率(DAR)通過UPLC-Qtof質(zhì)譜測定
為4.0。SEC?HPLC(Tosoh?Biosciences，Tskgel?G3000SW，7.8mm?ID×30cm，0.5毫升/分鐘，
100分鐘)分析顯示單體含量96-99％，SDS-PAGE凝膠測量顯示單一條帶。
4-甲酰氨基)-5-(3-氨基-4-羥基苯基)-2-甲基戊酸，51(Huang?Y.et?al,Med?Chem.#44,
249th?ACS?National?Meeting,Denver,CO,Mar.22～26,2015；WO2014009774)(100.6mg，
0.132mmol)的THF(4.0ml)溶液和磷酸鹽緩沖液(4ml，100mM?Na2HPO4，pH7.0)。在室溫下攪拌
4小時后，濃縮反應(yīng)混合物并用C-18制備HPLC(250mm×內(nèi)徑20mm)純化，用水/乙醇(95％至
50％水，50分鐘內(nèi)，流速15ml/分鐘)洗脫。合并含有產(chǎn)物的組分，濃縮并用EtOH/正己烷結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物92(47.6mg，47％收率)。ESI?MS?m/z-C192H291N26O50S4(M-H),計算值.3890.00,實測值3890.30.
25柱上純化，用100mM?NaH2PO4，50mM?NaCl?pH 的緩沖液洗脫，得到 的
偶聯(lián)物92( 緩沖液中， 產(chǎn)率)。藥物/抗體比率(DAR)通過UPLC-Qtof質(zhì)譜
測定為8.0。SEC?HPLC(Tosoh?Biosciences，Tskgel?G3000SW，7.8mm?ID×30cm，0.5毫升/分鐘，100分鐘)分析顯示單體含量96-99％，SDS-PAGE凝膠測量顯示單一條帶。
1640培養(yǎng)基。對于SKOV3細胞，細胞生長在含10％FBS的McCoy?5A培養(yǎng)基。運行試驗時，細胞(180μl，6000細胞)被添加到96孔板并且在37℃和5％二氧化碳的環(huán)境中孵育24小時，之后用不同濃度的化合物(20μL)來處理這些細胞(總體積0.2mL)。對照孔包含細胞和培養(yǎng)基，無測試化合物?？装逶?7℃和5％的二氧化碳的環(huán)境中孵育120小時后，向其中加入MTT(5mg/
mL)，在37℃孵化1.5小時。小心的去除培養(yǎng)基后加入DMSO(180μL)，震蕩15分鐘，在490nm和
570nm測量吸光度，620nm為參考。依照以下公式計算抑制率：抑制率％＝[1-(分析值-空白對照值)/(控制值-空白對照值)]×100％
偶連物91 0.108nM 0.089nM >20nM
偶聯(lián)物93 0.037nM 0.029nM >10nM
T-DM1 0.270nM 0.191nM >15nM
344；偶聯(lián)物T-DM1對N87細胞的特異性超過55(IC50>15/IC50＝0.27)，對SK-OV-3細胞超過
78。
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