技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本
發(fā)明涉及中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種從藤茶中分離提純楊梅素和二氫楊梅素的方法。
背景技術(shù)
[0002] 藤茶屬葡萄科，蛇葡萄屬，學(xué)名為顯齒蛇葡萄(Ampelopsis?grossedentata)，味甘、淡，性涼，具有清
熱解毒、祛
風(fēng)濕、強筋骨、消炎、
鎮(zhèn)痛等功效。民間將其幼嫩莖葉制成保健茶，用于
治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、黃疸型
肝炎、皰癤等癥已有數(shù)百年的歷史，是一種典型的藥食兩用
植物。藤茶主要有效成分為黃
酮類化合物，并以二氫楊梅素(Dihydromyricetin，簡稱DMY)含量最高。研究表明，藤茶中總黃酮含量為43.4％～44.0％(
質(zhì)量分?jǐn)?shù))，二氫楊梅素含量高達(dá)37.4％～40％，但與地理、
氣候環(huán)境等因素有關(guān)。近年來，國內(nèi)外已有部分學(xué)者開展了從植物中提取二氫楊梅素的研究，通常是以
有機溶劑為提取劑，如
醋酸乙酯、正丁醇、
乙醇等。這種方法提取成本高，回收溶劑的能耗高，還存在費時、提取率低、重現(xiàn)性差等不足之處。而且所用溶劑通常有毒，不安全，易對環(huán)境和操作人員造成危害。超臨界萃取二氫楊梅素雖具有節(jié)省
試劑，無污染等優(yōu)點,但回收率較差，為了獲得超臨界條件，設(shè)備一次性投資較大，運行成本高。此外，還有大孔
樹脂吸附法、
微波萃取法、逆流法、乙醇輔助法及
超聲波輔助溶劑提取法。
發(fā)明內(nèi)容
[0003] (一)要解決的技術(shù)問題
[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是如何低成本、低能耗、安全、無毒、無污染的提取藤茶中的有效成分，而提供一種從藤茶中分離提純楊梅素和二氫楊梅素的方法
[0005] (二)技術(shù)方案
[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種從藤茶中分離提純楊梅素和二氫楊梅素的方法(所用原料均市購獲得)，該方法包括如下步驟：
[0007] 步驟一：預(yù)備：稱取藤茶，精選，
粉碎，過35-45目篩；太細(xì)，太粗提取效率不高；
[0008] 步驟二：浸提：加入藤茶重量18-22倍的75-85％的酒精，用5％
碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.0-8.0，浸泡6-10小時，然后在35-45℃
溫度下回流浸提3-5小時；
堿性條件有利于提??；
[0009] 步驟三：二次浸提：加入藤茶重量8-12倍的75-85％的酒精，在35-45℃溫度下回流浸提3-5小時；
[0010] 步驟四：過濾：合并兩次浸提液體，過濾得到濾液；過濾掉雜質(zhì)；
[0011] 步驟五：回收酒精：從濾液中回收酒精至酒精含量為15％以下，達(dá)到無酒精
味道，然后
真空濃縮至得到比重1.0-1.5的浸膏；
[0012] 步驟六：
水沉：將濃縮浸膏用18-22倍重量的90-98℃的熱水充分?jǐn)嚢璨⒂?a href='/zhuanli/list-23097-1.html' target='_blank'>
超聲波震蕩2.5-3.5小時，在80-90℃溫度下高速離心，收集上清液；
[0013] 步驟七：離心：將步驟六得到的上清液冷藏過夜，第二天進行高速離心，收集沉淀，真空烘干得黃綠色粉末初提物；冷藏有利于楊梅素和二氫楊梅素結(jié)晶沉淀，過夜保證目標(biāo)物充分結(jié)晶析出；
[0014] 步驟八：分離純化；對步驟七得到的初提物分離純化得到98％以上的高純度楊梅素和二氫楊梅素純品。
[0015] 優(yōu)選地，在步驟八中，所述的分離純化步驟如下：
[0016] 1)將步驟七中得到黃綠色粉末初提物，分3次用9倍重量的乙酸乙酯加入黃綠色粉末初提物中，均勻攪拌并用超聲震蕩2.5-3.5小時，乙酸乙酯層變成黃綠色，合并三次得到的乙酸乙酯上清液和三次得到的白色沉淀物；
[0017] 2)對步驟1)得到的白色沉淀物用8-12倍5％
碳酸氫鈉溶液溶解，高速離心，取上清液，將上清液
酸化，冷藏過夜，得到白色結(jié)晶沉淀，烘干得到純度至少90％的二氫楊梅素；再將白色結(jié)晶沉淀用5倍重量的90℃以上熱水充分?jǐn)嚢枞芙?，高速離心，分離沉淀，收集上清液，將上清液冷藏過夜，高速離心，收集得到白色針狀結(jié)晶，用純水洗滌3次，得到白色針狀結(jié)晶，烘干得到純度98％以上的白色針狀二氫楊梅素晶體；
[0018] 3)從步驟1)得到的上清液中回收乙酸乙酯，真空烘干得到黃色粉末，將黃色粉末采用5％碳酸氫鈉溶液溶解，高速離心，除去沉淀收集上清液，將上清液酸化，過夜冷藏，分離沉淀并真空干燥可得98％以上黃綠色針狀楊梅素結(jié)晶。
[0019] 優(yōu)選地，在步驟八中，所述的分離純化步驟如下：
[0020] 1)將步驟七中得到黃綠色粉末初提物，加入10倍初提物重量的5％
硼酸溶液，充分?jǐn)嚢璨⒊曊鹗?.5-3.5小時，然后靜置過夜沉淀；高速離心，除去沉淀，收集上清液；
[0021] 2)在上清液中加入5％氫
氧化
鈣溶液，緩慢攪拌，不斷產(chǎn)生白色絮狀沉淀，調(diào)節(jié)穩(wěn)定至PH?7.5為止，再緩慢攪動半小時以上，高速離心除去沉淀，收集上清液；
[0022] 3)將收集到的上清液用
鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.0，冷藏過夜，高速離心沉淀，收集得到只有楊梅素和二氫楊梅素的混合物的沉淀；
[0023] 4)在步驟3)得到的沉淀中分3次加入9倍重量的乙酸乙酯，充分?jǐn)嚢璨⒊暡ㄕ鹗?小時以上，靜置過夜；高速離心，分別收集沉淀和上清液；
[0024] 5)將步驟4)得到的沉淀真空烘干，即得純度98％的白色針狀二氫楊梅素晶體；
[0025] 6)從步驟4)得到的上清液中真空回收乙酸乙酯，得到膏狀體，加入10倍95℃以上熱水，充分溶解，過濾，冷卻，過夜，高速離心，收集得到純度98％以上的黃色針狀楊梅素晶體。
[0026] 優(yōu)選地，在步驟一中，所述的篩為40目。
[0027] 優(yōu)選地，在步驟二和步驟三中，所述的浸提溫度為40℃。
[0028] 優(yōu)選地，在步驟五中，所述的比重為1.15-1.20。
[0029] 優(yōu)選地，在步驟六中，所述的水沉溫度為95℃。
[0030] 優(yōu)選地，在步驟3)中，真空度為-0.08--0.09MPa。
[0031] 優(yōu)選地，所述方法包括如下步驟：
[0032] 步驟一：預(yù)備：稱取藤茶，精選，粉碎，過40目篩；
[0033] 步驟二：浸提：加入藤茶重量20倍的重量濃度80％的酒精，用5％碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5，浸泡8小時，然后在40℃溫度下回流浸提4小時；
[0034] 步驟三：二次浸提：加入藤茶重量10倍的重量濃度80％的酒精，在40℃溫度下回流浸提4小時；
[0035] 步驟四：過濾：合并兩次浸提液體，過濾得到濾液；
[0036] 步驟五：回收酒精：從濾液中回收酒精至酒精濃度為15％以下，然后真空濃縮至得到比重1.2的浸膏；
[0037] 步驟六：水沉：將濃縮浸膏用20倍重量的95℃的熱水充分?jǐn)嚢璨⒂贸暡ㄕ鹗?小時，在85℃溫度下高速離心，收集上清液；
[0038] 步驟七：離心：將步驟六得到的上清液冷藏過夜，第二天進行高速離心，收集沉淀，真空烘干得黃綠色粉末初提物；
[0039] 步驟八：分離純化；對步驟七得到的初提物分離純化得到98％以上的高純度楊梅素和二氫楊梅素純品。
[0040] 本發(fā)明還提供了上述的從藤茶中分離提純楊梅素和二氫楊梅素的方法所制得的楊梅素和二氫楊梅素。
[0041] (三)有益效果
[0042] 本發(fā)明方法所采用設(shè)備簡單，工藝簡單可行，便于工業(yè)化生產(chǎn)；所用溶劑無毒無殘留，不產(chǎn)生環(huán)境污染，后期洗滌結(jié)晶用的
有機溶劑使用量??；本發(fā)明利用藤茶提取分離純化的利用率高、所得回收率高，都在90％以上，所得楊梅素、二氫楊梅素純度也很高，可直接用于藥品工業(yè)。
具體實施方式
[0043] 下面結(jié)合
實施例對本發(fā)明的實施方式作進一步詳細(xì)描述。以下實施例用于說明本發(fā)明，但不能用來限制本發(fā)明的范圍。
[0044] 下面所使用的溶劑、HCL、碳酸氫鈉、乙酸乙酯均為食用級或者分析純，不得使用工業(yè)級。
[0045] 實施例1
[0046] 1)1000公斤，藤茶精選除雜，藤茶粉碎，過40目篩，但不要過細(xì)，過秤補齊1000公斤總量；
[0047] 2)第一次浸提：20噸80％酒精溶液用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH至7.5，加入10噸提取罐浸泡8小時然后40℃溫度下回流浸提4小時；
[0048] 3)第二次浸提：10噸80％酒精溶液40℃溫度下回流浸提4小時；
[0049] 4)第一次和第二次浸提液用板框式
壓濾機過濾，得合并的濾液共28.6噸；
[0050] 5)回收酒精及濃縮：濾液合并后回收酒精，至酒精濃度小于15％，然后真空濃縮至得到比重1.2的浸膏，浸膏重量為1340公斤；
[0051] 6)浸膏用27噸95℃以上的熱水充分?jǐn)嚢璨⒂贸暡ㄕ鹗?小時，趁熱(85℃)下高速離心收集上清液25.9噸；
[0052] 7)上清液進入冷庫，冷藏過夜，第二天高速離心收集沉淀，真空烘干得黃綠色粉末初提物632公斤；
[0053] 8)對632公斤黃綠色初提物分離純化提取高純度98％以上的楊梅素和二氫楊梅素純品；
[0054] 8.1)第一種分離純化方法；
[0055] 8.1.1)步驟7)所得黃綠色初提物312公斤，用2700公斤分析純乙酸乙酯分3次(每次900公斤)量加入黃綠色粉末中，不斷慢速攪拌并用超聲震蕩3小時，乙酸乙酯層變成黃綠色，最后一次3倍乙酸乙酯層基本不變色；
[0056] 8.1.2)分別得到白色沉淀物(1)210公斤和三次乙酸乙酯上清液合并重量2800公斤；
[0057] 8.1.3)對沉淀(1)用1000公斤5％碳酸氫鈉容易溶解，高速離心，上清液酸化冷藏過夜得白色結(jié)晶沉淀烘干得至少129公斤90％純度的二氫楊梅素，白色針狀結(jié)晶用600公斤95℃以上熱水充分?jǐn)嚢枞芙?，高速離心分離沉淀收集上清液，上清液冷藏過夜高速離心收集白色針狀結(jié)晶，純水洗滌3次后得黃色針狀結(jié)晶烘干可得98％以上的白色針狀二氫楊梅素晶體123.3公斤。
[0058] 8.1.4)乙酸乙酯上清液2800公斤；上清液回收乙酸乙酯，真空烘干得黃色粉末9.1公斤，對黃色粉末采用100公斤5％碳酸氫鈉容易溶解高速離心除去沉淀收集上清液106.4公斤，上清液酸化過夜冷藏分離沉淀并真空干燥可得98％以上黃綠色針狀楊梅素結(jié)晶8.7公斤；
[0059] 8.2)第二種分離純化方法；
[0060] 8.2.1)步驟7)所得黃綠色粉末初提物316公斤，加入3000公斤重量的5％硼酸溶液，充分?jǐn)嚢璨⒊曊鹗?小時，然后靜置過夜沉淀；
[0061] 8.2.2)過夜后高速離心除去沉淀得上清液3260公斤；
[0062] 8.2.3)上清液加入5％氫氧化鈣溶液，緩慢攪拌，不斷產(chǎn)生白色絮狀沉淀，調(diào)節(jié)穩(wěn)定至PH7.5為止，緩慢攪動半小時以上，高速離心除去沉淀，收集上清液2980公斤；
[0063] 8.2.4)收集到的上清液用鹽酸調(diào)節(jié)PH至4.0，冷藏過夜；
[0064] 8.2.5)過夜后高速離心沉淀，收集得到只有楊梅素和二氫楊梅素的混合物的沉淀(2)322公斤；
[0065] 8.2.6)沉淀(2)用2700公斤的分析純乙酸乙酯進行分離楊梅素和二氫楊梅素，900公斤一次分析純乙酸乙酯分3次充分?jǐn)嚢璨⒊暡ㄕ鹗?小時以上，高速離心沉淀收集上清液，沉淀再次用900公斤乙酸乙酯超聲并攪拌再高速離心分離沉淀和上清液，第三次用900公斤乙酸乙酯對沉淀進行抽提和離心分離；
[0066] 8.2.7)得沉淀(3)119公斤白色結(jié)晶烘干后得到白色針狀晶體的二氫楊梅素121.7公斤，合并的三次上清液2690公斤；
[0067] 8.2.8)真空回收乙酸乙酯得膏狀體24.5公斤，膏狀體加入250公斤95℃以上熱水充分溶解過濾，冷去過夜高速離心收集黃色針狀結(jié)晶體并真空烘干得8.5公斤楊梅素純度98％以上。
[0068] 實施例2
[0069] 1)1000公斤，藤茶精選除雜，藤茶粉碎，過40目篩，但不要過細(xì)，過秤補齊1000公斤總量；
[0070] 2)第一次浸提：20噸80％酒精溶液用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH至7.5，加入10噸提取罐浸泡8小時然后40℃溫度下回流浸提4小時；
[0071] 3)第二次浸提：10噸80％酒精溶液40℃溫度下回流浸提4小時；
[0072] 4)第一次和第二次浸提液用板框式壓濾機過濾，得合并的濾液共28.4噸；
[0073] 5)回收酒精及濃縮：濾液合并后回收酒精，至酒精濃度小于15％，然后真空濃縮至得到比重1.2的浸膏，浸膏重量為1290公斤；
[0074] 6)浸膏用26噸95℃以上的熱水充分?jǐn)嚢璨⒂贸暡ㄕ鹗?小時，趁熱(85℃)下高速離心收集上清液25.1噸；
[0075] 7)上清液進入冷庫，冷藏過夜，第二天高速離心收集沉淀，真空烘干得黃綠色粉末初提物628公斤；
[0076] 8)對628公斤黃綠色初提物分離純化提取高純度98％以上的楊梅素和二氫楊梅素純品；
[0077] 8.1)第一種分離純化方法；
[0078] 8.1.1)步驟7)所得黃綠色初提物314公斤，用2700公斤分析純乙酸乙酯分3次(每次900公斤)量加入黃綠色粉末中，不斷慢速攪拌并用超聲震蕩3小時，乙酸乙酯層變成黃綠色，最后一次3倍乙酸乙酯層基本不變色；
[0079] 8.1.2)分別得到白色沉淀物(1)201公斤和三次乙酸乙酯上清液合并重量2880公斤；
[0080] 8.1.3)對沉淀(1)用1000公斤5％碳酸氫鈉容易溶解，高速離心，上清液酸化冷藏過夜得白色結(jié)晶沉淀烘干得至少132.7公斤90％純度的二氫楊梅素，白色針狀結(jié)晶用650公斤95℃以上熱水充分?jǐn)嚢枞芙?，高速離心分離沉淀收集上清液，上清液冷藏過夜高速離心收集白色針狀結(jié)晶，純水洗滌3次后得黃色針狀結(jié)晶烘干可得98％以上的白色針狀二氫楊梅素晶體120.2公斤。
[0081] 8.1.4)乙酸乙酯上清液2880公斤；上清液回收乙酸乙酯，真空烘干得黃色粉末9.2公斤，對黃色粉末采用100公斤5％碳酸氫鈉容易溶解高速離心除去沉淀收集上清液110.1公斤，上清液酸化過夜冷藏分離沉淀并真空干燥可得98％以上黃綠色針狀楊梅素結(jié)晶8.6公斤；
[0082] 8.2)第二種分離純化方法；
[0083] 8.2.1)步驟7)所得黃綠色粉末初提物314公斤，加入3000公斤重量的5％硼酸溶液，充分?jǐn)嚢璨⒊曊鹗?小時，然后靜置過夜沉淀；
[0084] 8.2.2)過夜后高速離心除去沉淀得上清液3310公斤；
[0085] 8.2.3)上清液加入5％氫氧化鈣溶液，緩慢攪拌，不斷產(chǎn)生白色絮狀沉淀，調(diào)節(jié)穩(wěn)定至PH7.5為止，緩慢攪動半小時以上，高速離心除去沉淀，收集上清液3130公斤；
[0086] 8.2.4)收集到的上清液用鹽酸調(diào)節(jié)PH至4.0，冷藏過夜；
[0087] 8.2.5)過夜后高速離心沉淀，收集得到只有楊梅素和二氫楊梅素的混合物的沉淀(2)317公斤；
[0088] 8.2.6)沉淀(2)用2700公斤的分析純乙酸乙酯進行分離楊梅素和二氫楊梅素，900公斤一次分析純乙酸乙酯分3次充分?jǐn)嚢璨⒊暡ㄕ鹗?小時以上，高速離心沉淀收集上清液，沉淀再次用900公斤乙酸乙酯超聲并攪拌再高速離心分離沉淀和上清液，第三次用900公斤乙酸乙酯對沉淀進行抽提和離心分離；
[0089] 8.2.7)得沉淀(3)129.6公斤白色結(jié)晶烘干后得到白色針狀晶體的二氫楊梅素119.8公斤，合并的三次上清液2700公斤；
[0090] 8.2.8)真空回收乙酸乙酯得膏狀體25.5公斤，膏狀體加入250公斤95度以上熱水充分溶解過濾，冷去過夜高速離心收集黃色針狀結(jié)晶體并真空烘干得8.3公斤楊梅素純度98％以上。
[0091] 實施例3
[0092] 1)1000公斤，藤茶精選除雜，藤茶粉碎，過40目篩，但不要過細(xì)，過秤補齊1000公斤總量；
[0093] 2)第一次浸提：20噸80％酒精溶液用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH至7.5，加入10噸提取罐浸泡8小時然后40℃溫度下回流浸提4小時；
[0094] 3)第二次浸提：10噸80％酒精溶液40℃溫度下回流浸提4小時；
[0095] 4)第一次和第二次浸提液用板框式壓濾機過濾，得合并的濾液共29.1噸；
[0096] 5)回收酒精及濃縮：濾液合并后回收酒精，至酒精濃度小于15％，然后真空濃縮至得到比重1.2的浸膏，浸膏重量為1295公斤；
[0097] 6)浸膏用27噸95℃以上的熱水充分?jǐn)嚢璨⒂贸暡ㄕ鹗?小時，趁熱(85℃)下高速離心收集上清液25.7噸；
[0098] 7)上清液進入冷庫，冷藏過夜，第二天高速離心收集沉淀，真空烘干得黃綠色粉末初提物638公斤；
[0099] 8)對638公斤黃綠色初提物分離純化提取高純度98％以上的楊梅素和二氫楊梅素純品；
[0100] 8.1)第一種分離純化方法；
[0101] 8.1.1)步驟7)所得黃綠色初提物319公斤，用2700公斤分析純乙酸乙酯分3次(每次900公斤)量加入黃綠色粉末中，不斷慢速攪拌并用超聲震蕩3小時，乙酸乙酯層變成黃綠色，最后一次3倍乙酸乙酯層基本不變色；
[0102] 8.1.2)分別得到白色沉淀物(1)218公斤和三次乙酸乙酯上清液合并重量2770公斤；
[0103] 8.1.3)對沉淀(1)用1000公斤5％碳酸氫鈉容易溶解，高速離心，上清液酸化冷藏過夜得白色結(jié)晶沉淀烘干得至少128.6公斤90％純度的二氫楊梅素，白色針狀結(jié)晶用600公斤95℃以上熱水充分?jǐn)嚢枞芙?，高速離心分離沉淀收集上清液，上清液冷藏過夜高速離心收集白色針狀結(jié)晶，純水洗滌3次后得黃色針狀結(jié)晶烘干可得98％以上的白色針狀二氫楊梅素晶體123.9公斤。
[0104] 8.1.4)乙酸乙酯上清液2770公斤；上清液回收乙酸乙酯，真空烘干得黃色粉末8.8公斤，對黃色粉末采用100公斤5％碳酸氫鈉容易溶解高速離心除去沉淀收集上清液112.3公斤，上清液酸化過夜冷藏分離沉淀并真空干燥可得98％以上黃綠色針狀楊梅素結(jié)晶8.4公斤；
[0105] 8.2)第二種分離純化方法；
[0106] 8.2.1)步驟7)所得黃綠色粉末初提物319公斤，加入3000公斤重量的5％硼酸溶液，充分?jǐn)嚢璨⒊曊鹗?小時，然后靜置過夜沉淀；
[0107] 8.2.2)過夜后高速離心除去沉淀得上清液3350公斤；
[0108] 8.2.3)上清液加入5％氫氧化鈣溶液，緩慢攪拌，不斷產(chǎn)生白色絮狀沉淀，調(diào)節(jié)穩(wěn)定至PH7.5為止，緩慢攪動半小時以上，高速離心除去沉淀，收集上清液3030公斤；
[0109] 8.2.4)收集到的上清液用鹽酸調(diào)節(jié)PH至4.0，冷藏過夜；
[0110] 8.2.5)過夜后高速離心沉淀，收集得到只有楊梅素和二氫楊梅素的混合物的沉淀(2)317公斤；
[0111] 8.2.6)沉淀(2)用2700公斤的分析純乙酸乙酯進行分離楊梅素和二氫楊梅素，900公斤一次分析純乙酸乙酯分3次充分?jǐn)嚢璨⒊暡ㄕ鹗?小時以上，高速離心沉淀收集上清液，沉淀再次用900公斤乙酸乙酯超聲并攪拌再高速離心分離沉淀和上清液，第三次用900公斤乙酸乙酯對沉淀進行抽提和離心分離；
[0112] 8.2.7)得沉淀(3)133.3公斤白色結(jié)晶烘干后得到白色針狀晶體的二氫楊梅素124.1公斤，合并的三次上清液2720公斤；
[0113] 8.2.8)真空回收乙酸乙酯得膏狀體23.7公斤，膏狀體加入250公斤95度以上熱水充分溶解過濾，冷去過夜高速離心收集黃色針狀結(jié)晶體并真空烘干得8.4公斤楊梅素純度98％以上。
[0114] 對比實驗
[0115] 湖南湘西張家界地區(qū)藤茶經(jīng)我們分析總黃酮含量達(dá)到36.5％，其中二氫楊梅素含量在27.8％，楊梅素含量在2.3％，通過查找資料目前還沒有一種成熟的工業(yè)方法同時提取楊梅素和二氫楊梅素，工業(yè)上藤茶中楊梅素含量低，一般從楊梅中提取楊梅素，文獻中也未有工業(yè)化高純度楊梅素和二氫楊梅素的提取工藝，本發(fā)明具有開拓性和首創(chuàng)性。
[0116] 實驗例1
[0117] 楊梅素的含量測定方法(鄧丹雯，南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室)[0118] 1，儀器
[0119] Aglient1260高效液相色譜儀(四元
泵、紫外檢測器)，Simon?Aldrich-C?18固相萃取小柱，JT2003
電子精密天平(河北路儀公路儀器有限分公司)，DFY－500搖擺式高速萬能粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)，
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE－52(上海亞榮生化儀器廠)，DHG－9053型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司)，DKS－24型電熱恒溫水浴鍋(嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司)。
[0120] 2，色譜條件
[0121] HPLC檢測條件色譜柱:Thermo-C?18液相色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相:0.005mol/L
磷酸二氫
鉀溶液-甲醇(體積比30∶70)；流速為0.5mL/min，進樣10μL，柱溫25℃，檢測
波長360nm。
[0122] 3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
[0123] 準(zhǔn)確稱取楊梅素標(biāo)品10mg置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，作為對照品溶液。用甲醇稀釋并定容，配成10，20，30，40，50μg/mL系列濃度的楊梅素標(biāo)品溶液，10μL進樣，在1.3.5.2色譜條件下進HPLC分析，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以濃度為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。所得回歸方程為Y＝54.155X－161.47，R＝0.999?6，表明樣品在10～50μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。
[0124] 實驗例2
[0125] 二氫楊梅素含量測定方法(王家勝，中成藥2012年1月貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院)[0126] 1，實驗儀器
[0127] 試驗儀器和設(shè)備主要有KQ-500DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，分
